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도설 forebrain의 explants에 대한 성장 인자 - 코팅 비드 배정

이 동영상은 개발 대뇌 피질의 explants에 성장 인자와 함께 코팅했습니다 구슬을 준비하고 삽입을위한 두 가지 방법을 보여줍니다. 이 구슬은 forebrain의 explants 같은 신경 조직을 개발 공간 제한 유전자 발현을 유도하는 데 사용할 수 있습니다. 방법은 Affi - 젤 구슬과 헤파린 acryllic 구슬을 모두 사용 주어집니다.

도설 Forebrain의 Explants에 대한 성장 인자 - 코팅 비드 배정

이것이 제가 사용할 첫 번째 유형의 구슬입니다. 그들은 젤 블루 젤 구슬입니다. 부드럽습니다.그래서 입 피펫 끝에 풀링 된 유리 피펫을 사용하여 Xs.The 두 번째 유형의 구슬을 Xs에 배치해야합니다. 그들은 뻣뻣한 유형의 구슬이며, 텅스텐 바늘을 사용하여 X 외식목에 이 구슬을 놓을 것입니다. 이것이 바로 제가 분젠 버너를 사용하여 먼저 녹일 유리 모세관 튜브입니다.그런 다음 더 미세한 팁을 만들기 위해 당깁니다. 그래서 저는 모세관을 화염 한가운데에 대고 튜브가 녹을 때 굴립니다. 부드러워지는 것을 느낄 수 있습니다.나는 그것을 불에서 들어 올린 다음 끌어 낼 것입니다. 이 다이아몬드 팁 펜으로 모세관 전체에 선을 에칭하여 멋진 스트레이트 컷을 할 수 있습니다. 그런 다음 끝을 화염 광택으로 닦아 청소합니다.모세관을 화염에 통과시켜 끝을 연마하고 구멍을 더 작게 만들어 모세관을 통과하는 구슬이 아닌 구슬을 포착할 수 있도록 할 것입니다. 주목해야 할 중요한 점은 모세관을 화염 속에 오래 들고 싶지 않다는 것입니다. 실제로는 매우 빠른 패스이며, 그렇지 않으면 봉인됩니다.나는 보통 이것들 중 많은 것들이 끝이 화염에 의해 밀봉된 곳에서 나오기 때문에 이것들 중 몇 개를 만듭니다. 제어하기 어렵기 때문에 여러 개만 만듭니다. 이것은 팁이 밀봉된 경우의 예입니다.이것은 좋은 피펫의 예입니다. 저는 250마이크로리터의 아겔 비드를 이 einor 튜브에 피펫으로 삽입했고, 1밀리리터의 PBS로 5번 세척하여 그들이 담근 azi 용액을 제거할 것입니다. 구슬이 가라앉을 때까지 약 3분 정도 기다린 다음 여분의 PBS를 흡인하고 이것을 4번 더 반복합니다.구슬이 아직 완전히 정착하지 않았으므로 구슬이 정착되었으며 과도한 PBS를 흡인하고 이것을 네 번 반복할 것입니다. 그리고 마지막에 PBS 300마이크로리터를 추가하고 구슬로 작업을 시작합니다. 이것은 표준 구강 피펫이며 제가 당긴 모세관을 가져다가 약 1/3 정도 위로 밀어 넣을 것입니다.먼저 파이펫에 PBS를 채웁니다. 일반적으로 모세관 작용으로 채워집니다. 이것은 30mm 배양 접시의 뚜껑을 벗겨 놓고 파란색으로 구슬 한 방울을 넣었습니다.그리고 그 옆에는 PBS의 작은 방울이 있습니다. 그리고 이 접시에는 5마이크로리터의 단백질 용액이 있습니다. 이 경우 B 및 P 4이지만 구강 피펫을 사용하여 선택한 단백질을 사용할 수 있습니다.이 파란색 원에서 구슬을 옮기고 PBS의 물방울로 한 번 헹굽니다. 그런 다음 구강 피펫과 함께 비드를 가져 와서 단백질 용액 방울에 넣고 실온에서 약 한 시간 동안 또는 4 도에서 몇 시간 동안 배양합니다. 그래서 당신은 PBS에서 구슬 풀을 볼 수 있고 나는 올바른 크기의 구슬을 선택해야합니다.너무 작으면 입 피펫을 통과하기만 하면 됩니다. 그들은 그냥 마지막에 앉아야 합니다. 이제 제가 몇 개의 구슬을 선택했다는 것을 알 수 있는데, 세 개의 큰 구슬과 세 개의 작은 구슬입니다.실험에서 더 큰 구슬을 사용하겠습니다. 이제 PBS의 작은 방울에서 단백질 용액의 작은 방울로 큰 구슬을 옮길 것입니다. 그러기 위해 저는 혀를 입 피펫에서 부드럽게 빼낼 것입니다.빨아들이는 동작이 아니라 약간의 음압을 가하기 위한 것입니다. 그런 다음 그것을 옮긴 다음 기본적으로 혀를 입 위에 다시 놓습니다. 파이프 헤드는 불지 않지만 비트를 끝에서 밀어내기 위해 약간의 양압을 추가합니다.이제 단백질 용액 방울에 5개의 구슬이 있으며 4도에서 몇 시간 동안 배양하거나 실온에서 30분에서 1시간 동안 배양할 것입니다. 이것이 바로 제가 이미 해부한 가지와 함께 배지에 떠다니는 막을 포함하는 배양 접시입니다. 저는 피펫의 끝을 잡고 몇 가지 미디어를 빨아들일 것입니다.나는 비드를 X 엑스플랜에 놓기 직전에 한 번만 미디어 방울로 비드를 헹굴 것입니다. 이것들은 아크릴 구슬을 집어 들고 배치하는 데 사용할 텅스텐 바늘입니다. 이것은 텅스텐 바늘이며 지금 홀더에 있습니다.그리고 이것들은 몇 가지 훌륭한 집게입니다. 45도 각도에서. 집게에 텅스텐 바늘을 사용하여 이 PBS 풀에서 비드를 들어 올려 비드를 단백질 용액 방울로 옮길 것입니다.내가 아겔 구슬로 했던 것처럼. 아겔 비즈와 마찬가지로, 저는 이 아크릴 비즈를 PBS에서 다섯 번 헹구고 이 플레이트에 물방울을 옮겼습니다. 그런 다음 집게에 텅스텐 바늘을 사용하여 비드를 단백질 방울로 옮기고 젤 비드로 했던 것처럼 배양할 것입니다.그래서 그것은 구슬을 들어 올리는 것입니다. 나는 오른손을 탁자에 단단히 대고 왼손 검지를 사용하여 바늘을 고정시키면서 유체 속으로 내려갈 때 바늘로 구슬을 가볍게 만지고 유체에서 천천히 들어 올립니다. 때때로 바늘에서 떨어지므로 다른 바늘로 돌아가십시오.이제 왼손으로 45도 각도의 집게를 갖게 되었습니다. 뾰족한 부분을 아래로 한 상태에서 구슬과 바늘을 액체에 대고 사용합니다. 집게 끝을 사용하여 부드럽게 누르십시오.이제 저는 단백질에 5개의 구슬을 가지고 있습니다. 자, 그래서 제 오른손으로는 구슬에 텅스텐 바늘을 넣고, 왼손은 다시 집게를 아래로 향하게 하여 4를 밀어내는 것과 같은 방식으로 합니다. 37도에서 배양하고 시간은 특정 분석에 따라 다릅니다.

growth-factor-coated-bead-placement-on-dorsal-forebrain-explants

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

University of California, Irvine (UCI).  이 동영상은 개발 대뇌 피질의 explants에 성장 인자와 함께 코팅했습니다 구슬을 준비하고 삽입을위한 두 가지 방법을 보여줍니다. 이 구슬은 forebrain의 explants 같은 신경 조직을 개발 공간 제한 유전자 발현을 유도하는 데 사용할 수 있습니다. 방법은 Affi - 젤 구슬과 헤파린 acryllic 구슬을 모두 사용 주어집니다.

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