효모의 유전자 연구는 세포의 DNA 대사에 인간 유전자의 분자 및 세포 기능을 조사하기 위해 고용 수 있습니다. 방법은 인간의 유전 특성에 대해 설명합니다 WRN 유전자 제품입니다.
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이 논문에서
요약
초록
유전자 경로에 인간의 DNA 수리 단백질의 역할을 이해하는 것은 많은 연구자에 대한 강력한 도전입니다. 포유류의 시스템에 유전자 연구가 정의 돌연변이 유전자 세포 라인, 규제 표현 시스템 및 적절한 선택 마커를 포함하여 즉시 사용 가능한 도구의 부족으로 인해 제한되었습니다. 이러한 어려움을 회피하려면, 낮은 eukaryotes의 모델은 유전 시스템은 기능적으로 보존 DNA 수리 단백질과 경로 연구를위한 매력적인 선택이되고 있습니다. 우리는 베르너 증후군 helicase - nuclease의 저조한 정의 유전자 기능을 연구하기위한 모델 효모 시스템 개발 (
프로토콜
1. 효모 레인스
야생 형 SGS1 TOP3와 종자 (WT, W303 - 1A, 유전자형, MAT ade2 - 1 canl - 100 his3 - 11, 15 leu2 - 3, 112 trpl - 전 ura3 - 1) [2], sgs1 돌연변이 (W1292 - 3C ; 유전자형 매트 SUP4 - O : URA3 sgs1 - 25 ade2 - 1 can1 - 100 his3 - 11, 15 leu2 - 3, 112 trp1 - 1 ura3 - 1 rad5 - 535)와 sgs1 top3 돌연변이 (W1058 - 11C, 유전자형, MAT SUP4 - O : URA3 sgs1 - 25 top3 - 2 : HIS3 ade2 - 1 can1 - 100 his3 - 11, 15 leu2 - 3, 112 trp1 - 1 ura3 - 1 rad5 - 535)가 [3] 특징되어 있고 친절하게 제공되었다 박사 로드니 Rothstein (콜롬비아 대학)에 의해.
2. 플라스미드 DNA의 건축
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토론
모델 시스템으로 효모를 사용의 장점 중 하나는 누룩과 인간 사이의 보존 아르 정의 DNA 복제 및 복구 경로에있는 돌연변이의 가용성이다. 실험실 변종이 auxotrophic 마커와 auxotrophic 돌연변이 벡터 아르 즉시 사용할 수 있으므로 특정 유전자를 숨겨주 transformants의 추가 선택은 간단하고 신뢰성이있다. 이러한 벡터를 사용하여 유전자 제품의 표현은 inducible업자의 통제 (예를 들어, 여자의 inducible업자 등)으로 그들을 배치하여 조정할 수 있습니다. 이러한 장점을 고려, 우리는 잠재적으로 인간과 효모 사이에 보존되어있는 경로에 베르너 증후군에 결함이 인간 WRN 유전자의 기능 요구 사항을 연구하는 효모 기반 모델 시스템을 개발했습니다. 설명 접근법을 사용하여, 우리는 WRN가 top3 관련 phenotypes에 영향을 미치는 유전자 경로에서 기능을 수있는 최초의 증거를 제공했습니다. 우리의 관측 WRN이 기능 세포의 DNA 복제 또는 재조합.......
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감사의 글
이 작품은 노화에 대한 NIH, 국립 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 전액을 지원했다. 우리는 플라스미드 SGS1 표현 효모 긴장 박사 브래드 존슨 (의학의 펜실베니아 학교의 대학, 필라델피아, 펜실베니아) 박사의 로드니 Rothstein (콜럼비아 대학)을 주셔서 감사합니다.
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참고문헌
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. Jr WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R.
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재인쇄 및 허가
