성인 Zebrafish에서 레트로 - 궤도 분사

요약

여기 우리는 성인 zebrafish에서 역전사 궤도 주사를하는 방법을 보여줍니다.

초록

전체 동물의 약물 치료 약리 화학 유전 연구에 대한 모델 시스템에 필수적인 도구입니다. 정맥 주사 (IV) 주사가 종종 관심의 대리인의 전달의 가장 효과적이고 비침 투 형태입니다. zebrafish에서 (

프로토콜

1 부. 사출 재료의 준비

1. TG (globin : GFP) 세포 :
2. 길 뒤에 찔린 물고기 헤파린 (1unit/ul)에 코팅 10ul 피펫 팁을 사용하여 성인 기증자 물고기 출혈.
3. 적혈구를 기음과 셀 버퍼에 분배 (0.9X PBS + 5% FBS + 1 %의 펜 / Strep).
4. 필터 셀 40uM 메쉬 이상의 정지 및 이전 르블랑 외 의해 설명한대로 hemocytometer를 사용하여 세포의 농도를 결정한다.
5. 스핀 다운 및 최종 사출 량이 5ul 이상 없다는 등 원하는 농도에서 세포 버퍼에 resuspend. 여기 1.5-2000000 세포 /받는 사람을 주입.
6. dextran, 텍사스 레드 ® 들어, 10-12 MG / ML의 최종 주입 농도에 대한 DPBS에 염료를 해산. 물고기마다 네 UL을 주입 계획입니다.

2 부. 주사

1. (4.2ml (4mg/ml) tricaine/100ml 물고기 물) tricaine 물고기를 마취.
2. 와시 해밀턴 주사기 이전 70 % 에탄올을 사용하여 주사하는 3-4 회. 0.9X DPBS로 3-4 회 린스.
3. 플....

토론

성인 zebrafish에서 레트로 - 궤도 분사는 사망률의 가장 낮은 발병률과 혈류에 주입 물질의 전달 가장 높은 효율을 제공합니다. 때문에 분사 지점의 성격, 주사 감염과 혈액 손실 금액의 발생을 감소 신속하게 치유가 나타납니다. 사이트도 반복 예를 들어, 약물의 매일 주사를위한 짧은 시간 동안 주입 수 있습니다.

약물의 다량은 간단하게 포장되어과 관심의 약물을 포함하는 물에 배어있는 물고기의 성인 물고기의 전통적인 치료 방법에 대한 구입하셔야합니다. 약물이 동물의 혈액에 직접 주입하는 경우 그러나, 훨씬 작은 수량은이를 실험 비용을 줄이는 치료를 위해 필요합니다. 특정 펩티드의 경우에 몸을 담글 수를 통해 물고기 순환을 입력하기에는 너무 큰 특정 화합물 들어, 복고풍 - 궤도 분사도 유리한 수 있습니다.

RO 주사는 성인 물고기의 intracardiac 사출 기술을보다 빠르고 쉽게이기 때문에 또한, RO 주사의 또 다른 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
돼지 장점막 유래 헤파린 나트륨염	Sigma-Aldrich	2106	300 USP 단위가 미리 계량된 바이알
트리케인-M (Tricaine-M)	Western Chemical		MS-222
Dulbecco’인산완충생리식염수	Invitrogen	14190-144
덱스트란, Texas Red®	Molecular Probes, Life Technologies	D1830
E3			5mM NaCl 0.17 mM KCl 0.33 mM CaCl22 0.33 mM MgSO42
마이크로리터 주사기	Hamilton Co	80300	701N 10uL SYR (26s/2”/2)