방법 논문

Dextran의 황산 나트륨 (DSS)를 사용 Murine 대장염 모델링

DOI:

10.3791/1652

⸱

2010년 1월 19일

 ,  , 
1Department of Cancer Biology, Vanderbilt University, 2Departments of Medicine and Cancer Biology, Vanderbilt University

이 논문에서

요약

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식수에서 실시 Dextran 황산 나트륨 (DSS)은 급성 대장염의 설립 murine 염증성 손상 모델입니다. 이 프로토콜은 DSS 치료와 조직의 준비를 위해 방법을 설명합니다.

초록

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- Crohn의 대장염 궤양성 대장염 특히 및 Crohn의 질병의 colonic 변종, 대장염은 바이러스 또는 박테리아 감염, 허혈성 모욕, 또는자가 면역 질환에서 발생할 수 있습니다. 급성 대장염은 복부 통증과 팽창, 흡수 장애, 설사, hematochezia 및 배설물에 점액과 함께 제공됩니다. 우리는 환경, 유전 및 대장염의 염증성 장 질환과 동물 모델에서 상피 장벽 부전이 질병의 우리의 이해를 발전에 필수되었습니다 사이의 복잡한 상호 작용을 이해하기 시작하고 있습니다. 하나의 인기있는 모델은 몇 일 지속 상피 손상과 콜론의 강력한 염증 반응의 결과로, 낮은 분자량 Dextran 나트륨 황산 (DSS)와 생쥐의 식수를 보충 포함

프로토콜

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1 부 : 상해 - 복구 대장염 모델

  1. 기준 무게 DSS 치료를 시작하기 전에 각각의 마우스에 대한 취득해야합니다.
  2. 3 % (W / V) Dextran의 황산 나트륨 소금물에 솔루션과 0.45 μm의의 셀룰로스 아세테이트 필터와 필터를 확인하십시오.
  3. 나흘 동안 3 % DSS 솔루션 마우스 케이지에서 식수를 교체합니다. 쥐를 물의 다른 소스 (자동 급수 시스템에 위치 즉, 제외 팁)에 액세스할 수 없습니다.
  4. 일 4 층에 일부 colonic 상피 복구를 허용, 추가로 3 일 동안 물을 DSS 솔루션을 대체합니다. 생쥐는 대장염의 체계적 결과를 계량하기 위해 일 넷 무게해야합니다. 체중 감소는 심각한 부상 일반적입니다.
  5. 일 7, 무게 및 생쥐를 희생. 마우스가 isoflurane, 또는 institutionally 상대방의 inhalational 과용으로 euthanized 수 IACUC이 방법을 승인했다.

2 부 : 검시와 콜론의 착취

  1. 복부에 가리지 액세스를 보장하기 위해 마우스 및 보안 다리 복부 측면을 폭로. 70 % 에탄올로 완전히 복부가 젖었어.
  2. 티슈 포셉와 복부의 정중선을 파악하고 tenting 피....

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토론

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이 프로토콜은 급성 부상, 부상 - 수리, 또는 만성 colonic 부상 프로세스를 모델로 수정할 수 있습니다.

급성 상해 변경 :

즉각적인 희생 뒤에 4~6일에 대한 DSS 처리 광고 lib과

상해 - 수리 수정 :

3-4일과 희생의 복구 기간 (위의 프로토콜에서 설명) 다음 DSS 치료 4-6일로 부상.

만성 대장염의 변경 :

생쥐는 각 사이클 사이에 회복 명이나 일 3 % DSS의 세 5 일주기에 게재됩니다. 생쥐는 마지막 16 일 휴식 기간 이후에 희생됩니다.

연구자들은이 모델로 인식하고 있어야 할 몇 가지 문제가 있습니다 :

  1. 부상 사이트의 다양성이 : 우리 손.......

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공개 사항

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동물 실험은 밴더빌트 IACUC에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

감사의 글

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NIH (1 K08 DK080221 - 01)와 밴더빌트 기관 개발 기금에서 제공하는 자금.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
덱스트란 황산염 나트륨 염USB Corp., Affymetrix9011-18-1mol wt 40,000-50,000
10% 완충 포르말린 인산Fisher ScientificSF100-4
Isoflurane, USPPhoenix Pharmaceuticals, Inc.NDC 57319-474-06
조직 경로 Macrosette 카세트Fisher Scientific15182706
BD 10 ml 주사기BD Biosciences309604
에틸 알코올Pharmco-AAPERE190로 70 %로 희석
VWR 국제20068-612
27G1 / 2 PrecisionGlide 니들BD Biosciences305109
해부 가위 샤프/블런트 팁VWR 국제82027-588
워 포저VWR 국제82027-428
비흡수성 봉합사 LOOK 수술SP116
Whatman 블로팅 페이VWR 국제28298-020필요에 따라 절단
Nalgene 계면활성제 무함유 셀룰로오스 아세테이트(SFCA) 필터Cole-ParmerEW-06731-2
탄소 섬유 복합 디지털 캘리퍼스Fisher Scientific15-007-958
염 증류수 20G 스트레이트 피딩 니들용 퍼

참고문헌

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  1. Okayasu, I. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
  2. Martinez, J. A. Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic e....

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