Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
사용하는 많은 연구 주소 셀 마이 그 레이션
프로토콜
준비
- hemocyte 특정 Gal4 드라이버 (예 : SRP - Gal4 2)와 UAS 통제 (예 : UAS - GFP)에서 유전자 인코딩 형광 기자를 포함하는 적절한 Drosophila 라인을 구합니다. SRP - Gal4, UAS - GMA 3 crq - Gal4, UAS - GFP 4, 5 homozygous 파리 이미징을 위해 (NB GMA가 moesin의 굴지 바인딩 도메인에 융합 GFP)을 특히 유용합니다;의 토론 아래 참조 Gal4 드라이버와 UAS의 범위가 (블루밍턴 증권 센터는 다양한 포함) 사용할 수 구성.
- 일반적으로 유전 십자가는 그러한 것을 돌연변이 대립 유전자가 Gal4 드라이버 및 대체 상동 염색체에서 실시 UAS 구조와 형광 balancers CTG TTG 또는 6을 사용 균형 아르 실시하고 있습니다. 이것은 가능한 CTG / TTG - 관련 GFP 형광 (이것이 단계에서 이루어집니다 2.11)의 부재에 기초하여 homozygous 돌연변를 선택할 수 있습니다.
- 사과 쥬스 한천 플레이트 7
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토론
이 절차의 가장 중요한 요소는 명확하게 표시된 hemocytes과 건강한 태아의 선택이며, 그들을 손상하지 않고 신중하게 그들을 마운트합니다. 배아는 할로 카본 오일에 일단 그들이 탈수에 강한 있으며, 한번 장착은 몇 시간 동안 몇 군데하실 수 있습니다. 우리의 손에 우리는 40X 목적으로 매 삼분의 자이스 혈구 LSM510 공촛점 현미경에 이미지의 Z - 스택을 복용 배아 또는 사진 손상 분명 무시할 수 탈수와 함께 세 시간 동안 이미지 hemocytes은하실 수 있습니다. hemocytes 높은 동적이기 때문에 공간과 시간적 해상도 사이에 트레이드 오프가 있습니다가 : 매우 높은 해상도의 이미지는 그 안에서 hemocyte과 구조를 필요한지 것은 스캔하는 동안 이동할 수 있습니다. 이미지가 이후에 수집하는 방법의 정확한 정보는 해결될 수있는 실험 질문에 따라 결정됩니다.
우리는 일반적으로 레이블 hemocytes에 UAS - GFP 또는 UAS - .......
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감사의 글
이 프로토콜은 폴 마틴과 안토니오 하신토의 연구소와 시간 및 공동 작업을 통해 우리의 개발되었습니다. 우리는 플라이 라인을 공유하는 지속에 대한 훌륭한 서비스와 Drosophila 커뮤니티에 대한 블루밍턴 주식 센터 주셔서 감사합니다. BS는 현재 BBSRC 프로젝트 부여하여 자금이다. WW는 웰컴 트러스트 경력 개발 원정대에 의해 후원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 셀 스트레이너(Cell strainer) | BD Biosciences | 352350 | 70μm 공극 |
| Halcarbon 오일 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Lumox/Petriperm 디쉬 | Sarstedt Ltd | 96077305 |
참고문헌
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Bruckner, K. The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila. Dev Cell.
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재인쇄 및 허가
