이 기술은 생활의 분자 특성에 대한 양성자 MR 분광법 (1H - MRS HRMAS)를 회전 고해상도 마법 각도의 사용을 가능하게 Drosophila melanogaster 기존의 14.1 테슬라 분광계와이 HRMAS 프로브가 장착된.
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이 논문에서
요약
초록
고해상도 매직 각도 스피닝 (HRMAS) 프로톤 자기 공명 분광 (
프로토콜
1 부 : HRMAS 측정 준비 Drosophila
- 표준 flylab 절차 1을 사용, 새로 3 일간 파리 eclosing 신선한 플라이 음식을 포함하는 튜브를 비행을 전송 수집합니다. 파리 방금 전에 실험 5~8일 이전 될 수 있도록 오일에 대한 수집 파리 알을 품다. 단 하나의 성별은 (보통 남성) 실험에 사용됩니다.
- 건강을 사용, 손상 야생 유형은 예를 들어 충격이나 유전자 파리 1 개조 치료와 비교 날아.
- 이전 실험 비행 식품 24 시간 조각 (~ 0.2ml)을 포함 2ml 튜브에 하나의 파리를 놓습니다. 이러한 튜브는 불꽃 - 온수 인슐린 바늘을 사용하여 만든 튜브 컵에 구멍을 부담.
- 고정밀 밸런스를 사용하여 비행 삽입 전후 바로 튜브를 저울질하고 후자에서 첫 번째 가치를 빼서 각 비행기의 무게를 정의합니다. 한 남자 비행은 일반적으로 0.7-1 MG 무게.
2 부 : HRMAS의 로터 준비.
- 플라이 내부를 마취하는 분도 위해 얼음에 하나의 튜브를 놓으십시오.
- 얼음에 위치 알루미늄 호일의 레이어에 파리를 틀어서 플라이 부상을 피하면서 전체 ....
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토론
과일의 생체내 MRI에의 가능성의 최근 보고서를 제외하고 6 파리, Drosophila의 생체내 MRS 연구 아직보고되지 않았습니다. 현재 프로토콜, 우리는 생물학적으로 중요한 분자를 검출 생체내 HRMAS 1 H - MRS 방식의 소설의 구현을 설명합니다. 제로 파리 사망률을 달성하면서 특히, 우리는 lipids, 라이브 Drosophila의 작은 metabolites 충분한 수집 시간을 허용 약 45 분에서 14.1 T에서 파리를 발견했습니다. TOBSY의 로터 - 동기 워스트 - 8 단열 펄스 (C9 1 15)의 사용은 이전과 계약에 만족스러운 SNR과 등방성 혼합 펄스 (MLEV - 16) 사용에 상대 조직 스펙트럼 좋은 해상도를 얻기 위해 우리를 허용 보고서 3, 7. Drosophila의 개선 대사 프로필을 .......
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공개 사항
동물 실험은 매사 추세츠 종합 병원 기관 동물 연구 검토위원회위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.
감사의 글
이 작품은 로렌스 G. Rahme에 건강 (NIH) 부여 AI063433의 국립 연구소, 로날드 G. 톰프킨스 (A. 아리아 Tzika의 원장 건강의 국립 연구소 연구소 (NIH) 센터 그랜트 (P50GM021700)에 의해 부분적으로 지원되었다 A. 아리아 Tzika 어린이 연구 부여 (# 8893)에 대한 NMR 코어) 및 슈라 이너 병원. 우리는 Dionyssios Mintzopoulos 박사 감사 이 프로토콜 및 Ovidiu C. Andronesi 박사를 개발의 초기 단계에서 도움을 TOBSY 펄스 시퀀스를 지원.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 중수 | 시약 | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(트리메틸실릴)프로피온산-2,2,3,3-d4 산 | 시약 | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| 한천, 수크로스, 효모, 옥수수 가루 | 먹이 | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS 또는 Canton-S 초파리 | 성체 초파리 계통 | Bloomington Stock center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| 페인트 브러시 | 장비 | (크기 0) | ||
| 2ml 튜브 | 장비 | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| 초파리 배양기 | 장비 | 높은 습도 유지 능력(60-75%), 조절 가능한 온도 및 12시간:12시간 명:암 주기. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR 분광기 (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS 프로브 | 장비 | Bruker Corporation | ||
| MAS 공압 장치와 결합된 BTO-2000 유닛 | 장비 | Bruker Corporation | ||
| 4mm 지르코늄 옥사이드 로터 (용량 50 ul) | 장비 | Bruker Corporation | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | 소프트웨어 | 1D NMR 스펙트럼 분석 http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3, USCF | 소프트웨어 | 2D NMR 스펙트럼 분석 http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
참고문헌
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
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