우리가 공기 - 액체 인터페이스에서 차별화된 성장을 포함한 인간 기관지기도 조직의 explants에서 기본 인간 기관지 상피 세포의 성장에 대한 자세한 방법을 설명합니다. 이 방법은 인간의 폐 건강과 질병의기도 상피의 역할을 조사하는 주요 세포의 풍부한 소스를 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
인간 기관지 상피 세포는 질병의 세포 모델에 필요한이며 기능과 인간의 상피 세포의 구조에 excipients 및 pharmacologic 대리인의 효과를 조사합니다. 여기 자세히 폐 수술 (예 : 폐암이나 폐 볼륨 감소 수술)의 시대에서 외과 의사에 의해 수확이다 기관지기도 조직의 기관지 상피 세포를 성장하는 방법을 설명합니다. 윤리 승인 및 통지 동의, 외과 병리에 필요한 무엇 소요되며 병에 걸린 지역에서 원격 기관지 부분으로 우리를 제공합니다. 조직은 다음 문화의 주요 기관지 상피 세포를 성장 사용할 수 explants의 소스로 사용됩니다. 0.5 - 1cm 길이 직경 ≤ 1cm에 대한 기관지 구간은 추위 EBSS 및 초과 parenchymal 조직 제거와 씻어서 있습니다. 세그먼트는 개방 절단 2~3mm에 다진 아르
프로토콜
인간 기관지 구간 기본 기관지 상피 세포의 풍부한 소스를 제공합니다. 이 문서에서 우리는 성장과 갓 고립된 인간 기관지 세그먼트의 인간 기관지 상피 (HBE) 세포의 확장을위한 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 다섯 섹션으로 구성되어 있습니다 :
- 코팅 및 100mm 문화 번호판을 긁는
- 기관지 조직 Explants 준비
- 기관지 조직 이식
- HBE 셀의 통과
- Transwells에 성장 솜털이있는 HBE 셀
당신은 모든 단계가 별도로 명시되지 않는 한 생물 안전 캐비닛 (BSC)에 완료됩니다을 시작하기 전에. 이 절차에 필요한 모든 자료를 가지고 있는지 확인하십시오. 재료, 시약 및 준비 섹션을 읽고 무균 (생물 안전 캐비넷 또는 BSC에서 IE)는 다음을 준비했는지 확인하십시오 :
코팅 주식 솔루션 : fibronectin (10 μg / ML), 얼의 균형 소금 용액에 BSA (10 μg / ML)과 콜라겐 (30 μg / ML) (EBSS, 멸균).
문화 매체 : 항생제 - antimycotic 첨가제 (1 %)와 FBS와 DMEM....
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토론
본 연구에서는 우리는 문화와 기본 인간 기관지 상피 세포의 확장에 대한 자세한 방법을 제시. 우리는 explants과 상피 세포의 성장을 촉진 미디어 교양 기관지 조직,의 이식이 아닌 차별 (잠수)과 차별 (공기 - 액체 인터페이스에서 성장) 세포 모델 연구를위한 인간기도 상피 세포의 지속적인 소스를 제공하는 방법을 시연 . 이러한 전지는보다 밀접하게 그들의 진짜 physiologic 환경에서 세포 유사한되는 약물 테스트 시스템에서 이용하실 수 있습니다. 그것은 당신이 explants / 이식에서 성장과 조약돌 형태를 확인 세포를 감시하는 것이 매우 중요합니다. 세포가 다른 형태를 보여주면, 세포 explants / 이식을 모두 폐기하고, 오직 성공적인 조직을 이식 계속합니다. 우리 손에 알리 문화는 이전에 보고된 것보다이 설립 더 걸렸습니다. ALI에서 매일 미디어를 변경하면 빠른 상피 세포의 분화와 속눈썹의 성장을 촉진 수도 수도 있습니다.
우리는 .......
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감사의 글
저자는 기관지 조직을 제공하는 박사 리차드 Inculet 매우 감사하고 있습니다. 연구 윤리위원회 승인은 성 요셉의 건강 해밀턴 및 웨스턴 온타리오 / 런던 건강 과학 센터 (박사 데이비드 매코맥), 조직 및 아카이브위원회, 병리의학과의 대학에서 얻은했다. 또한 immunostaining에 필요한 자료의 일부를 제공하는 우리의 알리 문화의 템즈와 다니엘라의 Farkas를 제공 어니 스핏쳐를 (전자 현미경, 맥매스터 대학교) 감사합니다. 이 작품은 온타리오 흉부 학회에서 차단 기간 부여에 의해 투자되었다; 박사 Asma Yaghi는 FSORC 장학금, 성 요셉의 건강, 해밀턴, 온타리오, 캐나다에 의해 지원되었다.
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재료
기타 요구 사항 : 보육, 생물 안전 캐비닛 (BSC), 원심 분리기, 100mm 문화 접시, 멸균 튜브 (15 ML 50 ML, 2 ML), 멸균 피펫 팁, 메스 핸들과 블레이드, 작은 날카로운 가위, 실험실 외투와 장갑. 이러한 선호하는 공급 업체에서 구할 수 있습니다.
참고문헌
- Phillips, J. Growing Cells on Transwell Inserts - Tips and Techniques [Internet]. Corning Life Sciences, Technical Resources, Online Training. , (2008).
- Turi, J. L. Oxidative stress activates anion exchange protein 2 and AP-1 in airway epithelial cells. Am J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 283, L791-L798 (2002).
- Lechner, J. F., Haugen, A., McClendon, I. A., Pettis, E. W.
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재인쇄 및 허가
