50 % Haemolytic 보완 (CH 측정 50) 활동

요약

고전 경로는 항체에 의해 활성화되고 대상 세포 용해에 culminates 있습니다. CH ₅₀ 검정은 혈청 샘플의 보완 활동의 측정을 제공합니다. 이 비디오는 CH를 결정에 관련된 단계를 설명합니다 ₅₀ 혈청 샘플의 결과의 계산 및 해석.

초록

보완 시스템은 세포 용해를 대상으로 이끌 활성화되고 opsonisation 통해 phagocytosis을 용이하게 단백질의 그룹입니다. 개인 보완 구성 요소가 있지만 이것은 경로의 활동에 같은 정보를 제공하지 않습니다 계량하실 수 있습니다. CH

프로토콜

5 배 Veronal 버퍼 살린 (VBS)의 준비

1. Veronal 버퍼 살린 (VBS)를 준비하려면, 별도의 세 가지 솔루션을 준비해야합니다.
2. 증류수의 350ml에 나트륨 Barbitone의 NaCl과 0.94gm의 21.25gm을 용해하여 용액 1을 준비합니다. NaCl과 나트륨 Barbitone의 최종 농도는 각각 1.02M과 13mM 있습니다.
3. 뜨거운 증류수의 125ml에 Barbitone의 1.44gm을 용해하여 용액 2를 준비합니다. Barbitone의 최종 농도는 62.5mM입니다.
4. 증류수의 100ml에 CaCl ₂ MgCl ₂ 4.41gm의 20.33gm을 용해하여 용액 세를 준비합니다. MgCl _2, CaCl _2의 최종 농도는 각각 2.18M과 440mM입니다.
5. 믹스 솔루션 1, 2 룸 온도 냉각.
6. 통합 솔루션이 냉각되면, 솔루션 3 1.25ml를 추가하고 1M HCL을 사용하여 7.3-7.5 수있는 산도를 조정합니다.
7. 배 재고 솔루션을 준비하는 증류수로 500ml로 최종 볼륨을 조정합니다.
8. 1X 작업 솔루션을 준비하려면, 증류수와 주식 1:5 희석.

토론

CH ₅₀ 검정은 많은 interferences의 적용을받습니다. 일부 SRBC는 활동을 보완하기 위해 무관 자연 haemolysis의 결과로, 다른 사람보다 더 연약하고 있습니다. 토끼 항체의 친화도는 많은에서 많은 한 제조 업체에서 다른 다릅니다, 이것은 SRBC에 바인딩 항체의 양을 영향을 미칩니다. 또한, 항체 코팅 SRBC의 다양한 양의와 세포 항체 결과 SRBC을 sensitizing의 과정. 표본 수집 및 저장 오류의 중요한 잠재적인 소스입니다. 보완 구성 요소 예 : C1q, C3, C4 및 C5 매우 불안 정한 있으므로 적절한 샘플 처리가 중요합니다. 더위에 장시간 노출은 보완 작업을 감소하고 보완 구성 요소의 비활성 조각을 생산합니다. 가능한 오류의 많은 소스로 감지하기 위해서는 알려진 CH ₅₀ 가치 분석을 수행할 때마다 제어 혈청을 검사하고 알려진 혈청 컨트롤의 허용 값을 재현하는 것이 중요합니다. haemolysis의 기초 수준이나 CH ₅₀ 가.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
양 적혈구	CSL	2490201	최종 농도 1%로 사용
혈청			인간 혈청
Rabbit Anti-Sheep Haemolytic serum (RBCs), Unconjugated	AbD Serotec	C12HSB
96 웰 평평한 바닥 플레이트	Sarstedt Ltd	83.1839
Veronal 완충 식염수			최종 농도 1x로 사용
항온 수조
플레이트 리더
37°C 실온/배양기