비교적 생체내에 학습 Xenopus laevis</em

요약

개구리 Xenopus laevis 항원에 특정한 CD8 T 세포 응답을 촉진하기 위해 gp96로 열 충격 단백질의 기능을 탐험에 대한 매력적인 대안이 아닌 포유 동물 모델을 제공합니다. 우리는 방법을 연구 제시 생체내에 촉진.

초록

우리는 수륙 양용 Xenopus의 개발은 chaperoned 항원의 교차 프레 젠 테이션을 촉진하고 타고난 및 적응 T 세포 반응을 이끌어내는 수 있습니다. Xenopus 피부 이식 거부와 같은 gp96와 같은 특정 열 충격 단백질 (hsps)의 능력을 연구하기위한 독특한 아닌 포유 동물 모델을 laevis 고전 MHC 클래스 구이 (클래스 구이) 제한 T 세포 반응을 이끌어내는 위해 gp96의 능력을 연구하는 뛰어난 플랫폼을 제공합니다. 또한, Xenopus 모델 시스템은 또한함으로써 면역 감시를 탈출 자신의 클래스 구이 분자를 아래로 조절이 종양에 대한 응답을 생성하는 gp96의 능력을 탐험 마우스에 대한 매력적인 대안을 제공합니다. 최근, 우리는 항원 제시 세포 (APCs)로 복막 leukocytes를 사용하여 Xenopus 클론에서 입양 세포 전송 분석을 개발하고, 같이 가지고 가벼운 histocompatibility 피부 항원에 대한뿐만 아니라 Xenopus thymic 종양 15에 대한 생체내에 gp96 수있는 최고급 CD8 T 세포 응답 클래스 구이 분자를 표현하지 않습니다 / 0. 우리는 여기서 복막 leukocytes의 이끌어 냄, pulsing과 입양 전송뿐만 아니라 피부 이식 및 종양 이식 assays 포함하여 이러한 assays을 수행하기 위해 관련된 방법론을 설명합니다. 또한 우리는 유동세포계측법 피부 제거 및 안티 종양 반응에 관여 효과기 인구의 자세한 특성화를 허용 확산 assays에 사용되는 주변 혈액 leukocytes의 수확과 분리를 설명하고 있습니다.

프로토콜

1. 동물

X. laevis X X. gilli 하이브리드 LG - 6와 LG - 15 isogenetic 클론 ¹ 로체스터 (http://www.urmc.rochester.edu/smd/mbi/xenopus/index.htm)의 대학의 번식 식민지에서입니다. LG - 6와 LG - 15 공유 같은 heterozygous MHC haplotype (A / C)하지만 사소한 histocompatibility (H) loci에서 다릅니다. 이 클론의 자손은 여성에 의해 만들어진 diploid 달걀은 UV - 조사 정자 (자손없이 DNA 기여)에 의해 활성화하는, gynogenesis에 의해 생산됩니다.

장갑의 사용은 통성 있습니다. 어떤 사람은 개구리를 처리하기 어렵습니다 (미끄러)와 사실 그것은 개구리 불편하게 만드는 나타나기 때문에 그들을 착용하지 선호합니다.

2. 15 / 0 종양 (종양 및 H - AGS 마이너를 모두 표현)의 gp96의 정화

Gp96 정화는 이전에 다음 ID로 ^{2, 3을} 설명하고 있습니다. 간단히, g....

토론

수륙 양용 Xenopus은 면역력을 공부하는 독특한 다목적 아닌 포유 동물 모델입니다. 생명 의학 및 면역 연구에 광범위한 사용에는 MHC 정의 클론 LG - 6와 LG - 15뿐만 아니라 다른 세포 라인과 단클론 항체와 같은 많은 중요한 연구 도구가 생긴 거죠. 우리가 강력한 AG - 특정 안티 - 사소한 H - AG 및 안티 종양 T 세포 응답 ⁷ 중재하기 위해 gp96로 열 충격 단백질의 기능 연구를 체외에서 생체내 assays에서 다른 설립 이러한 도구를 사용합니다. 이 모델은 시스템은 우리가 더욱 프라이밍 및 효과기 세포 단계에서 gp96 면역 속성을 조사 수 있습니다.

마중물 단계 등 접목 피부 종양 이식 ^{2 8로} 생체내 assays에서 전에 두 주일 간격으로 10 μg gp96의 두 주사 필요한 것을 gp96를 정화와 피하 예방 접종 사용이 반응의 초기 연구에 관한. 비교에서,.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
필요 시약:
양서류 인산 완충 식염수 (APBS):
NaCl, 1.15 g/L
Na2HPO4, 0.2 g/L
KH2PO
10N NaOH
Tricaine Methane Sulfonate (TMS, MS-222)	Crescent Research Chemicals	CAS#886-86-2
탄산수소나트륨	Fisher Scientific	S-233-500
Histopaque-1077	Sigma-Aldrich	10771	100ml
헤파린 나트륨염	Sigma-Aldrich	H3149-50KU
Xenopus 15/0 종양용 배양 배지 [자세한 내용은 3번 참조]:
Iscove DMEM 기본 배지	GIBCO, by Life Technologies	11965
인슐린
비필수 아미노산
페니실린-스트렙토마이신
카나마이신
Primatone	Sheffield Products Division
β2-mercapt–thanol
NaHCO3
30% 이중 증류수
5% 소태아 bovine serum
20% Xenopus 신장 세포주 A6 상층액
0.25% 정상 Xenopus 혈청
재료 및 장비:
50 및 15 ml 원추형 원심 분리 튜브 (멸균)
25 gauge 5/8 Precision Glide 멸균 바늘	BD Biosciences
18 gauge 1½ Precision Glide 멸균 바늘	BD Biosciences
1 ml Tuberculin Slip Tip 멸균 주사기	BD Biosciences
10 ml Slip Tip 멸균 주사기	BD Biosciences
1.5 ml MicroCentrifuge 튜브 (멸균)
60 X 15 mm 폴리스티렌 페트리 접시 멸균	Falcon BD
면도날
25 X 75 mm X 1 mm 프리미엄 현미경 슬라이드	Fisher Scientific
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