방법 논문

실험 전이 및 CTL 입양 전송 Immunotherapy 마우스 모델

DOI:

10.3791/2077

⸱

2010년 11월 26일

 ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Medical College of Georgia

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

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종양 세포 - T 세포 상호 작용의 분석을 위해 실험적인 폐 전이와 CTL immunotherapy 마우스 모델 생체내에.

초록

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실험 전이 마우스 모델은 생리학 관련 아직 간단하고 전이 모델입니다. 종양 세포는 마우스 꼬리 정맥에 (4) 정맥 주사하고 종양 세포 자발적인 전이의 마지막 단계를 닮은, 따라서, 폐 이식과 같습니다 말초 장기의 순환, 넘쳐 흐름과 식민지에서 생존합니다. 말초 기관에서 설립 전이성 종양 : 요법의 목표는 종종 전이의 끝 지점이기 때문에보기의 치료 시점에서 실험적 전이 모델은 가장 간단한 이상적 모델입니다. 이 모델에서, 종양 세포는 마우스 꼬리 정맥에 주입 IV 및 폐의 이식과 성장을 사용할 수 있습니다. 종양 특정 CTLs은 다음 metastases 베어링 마우스에 IV를 주입하고 있습니다. 폐 metastases의 번호와 크기는 주입으로 종양 세포의 수와 종양 성장의 시간에 의해 제어하실 수 있습니다. 따라서, 전이의 여러 단계, 광범위한 전이에 최소한의 전이에서 모델 수 있습니다. 룽 metastases 따라서 쉽게 시각 관측 및 부량를 허용, 잉크와 인플레이션에 의해 분석됩니다.

프로토콜

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1. 실험 전이 마우스 모델

  1. 당일 전에 종양 세포 주사, 최대 1과 씨앗 하나 T75 플라스크 X 10 7 CMS4 - 메트 빠르게 성장하는 종양 세포를 얻기 위해 혈청 10 %를 포함하는 RPMI 매체의 10 ML에 세포를. 37 밤새 품어 ° C.
  2. 주사 당일, 미디어를 제거하고 PBS로 세포를 한 번 씻어 후 37 0.05 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)으로 종양 세포를 수확 ° C를 5 분. 10 % 혈청이 포함된 RPMI 매체 10 ML로 반응을 중지합니다. 원뿔 튜브에 세포를 전송합니다.
  3. 상온에서 3 분 Sorvall 전설 RT의 원심 분리기에서 1,300 rpm으로 세포를 스핀 다운. 뜨는을 제거합니다. 세차 10 ML 신선한 1X HBSS에있는 세포를 Resuspend, 다시 스핀 다운과 같은 방식으로 resuspend.
  4. hemocytometer에서 종양 세포를 계산합니다. 각각의 주사에 필요한 세포 100 μL의 총 볼륨 resuspended되도록, HBSS에있는 세포를 희석.
  5. 꼬리 정맥을 팽창하기 위해 따뜻한 물에 잠겨 비커에 6~8주 이전 BALB / C 마우스를 따뜻하게. 벤치에 꼬리 정맥 restrainer에 마우스를 놓습니다. 측면 ....

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공개 사항

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생쥐는 국립 암 연구소 (Friderick, MD)에서 구입 조지아 동물 시설의 메디컬 칼리지 안에 보관되어 있었다. 실험 및 의료 / 복지 연방 규정 계약 및 조지아 IACUC위원회의 메디컬 칼리지에 의해 승인된 프로토콜되었습니다.

감사의 글

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국립 보건원 (KL에 CA133085)와 미국 암 협회에서 부여 (KL에 RSG - 09 - 209-01 - TBG) 지원.

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재료

솔루션 :

인도 잉크 솔루션 (17) :

  1. 250 ML 플라스크에 증류수 150 ML 하거라.
  2. 증류수 4 방울의 암모늄 수산화을 추가합니다.
  3. 암모니아와 물을 혼합 30 ML 인도 잉크 주식 (즉, 샌포드 블랙 매직 방수 그리기 잉크 4,465 44,011 항목) 추가합니다.
  4. 200 ML의 볼륨에 증류수와 떨어져 톱. 솔루션 주입을위한 준비가 된 것입니다.

Fekete의 솔루션 (17) :

Fekete의 솔루션은 일반적인 조직의 검은 배경에서 흰색 종양의 nodules을 구분하기 위해 표백제를 인도 잉크 높게 종양 베어링 폐에하는 데 사용됩니다.

  1. 1L 유리병에 350ml 95 % EtOH를 추가합니다.
  2. 150ml 증류수를 추가
  3. 50ml 포름 알데히드 추가
  4. 25ml 빙하 산성 산성 추가

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope. J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).
  2. Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I.

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