Toxoplasma gondii는 조직 문화 모델 했었 수있는 환경 스트레스에 대한 응답으로 낭종 형태로 변환됩니다. 이 동영상은 골수 파생 macrophages 뼈를 활성화하거나 fibroblast 세포 성장 매체 산도를 변경하여 낭종 벽 형성을 검토하기 위해 기술을 보여줍니다.
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방법 논문
활성 골수 - 유래 Macrophages과 Bradyzoite Toxoplasma gondii 약관의 낭종의 벽 형성
이 논문에서
요약
초록
Toxoplasma gondii는 온혈 동물의 nucleated 세포에 침입할 수있는 의무 세포내 기생충이다. 감염 동안, T. 빠른 복제 양식이 tachyzoite 전화로 gondii는 disseminates. Tachyzoites 잘 묘사되지 않은 신호 처리에 의해 bradyzoite라는 느린 성장 encysted 형식으로 변환합니다. 동물 내에서 bradyzoite의 cysts는 중추 신경계와 근육 조직에서 발견하고 감염의 만성 단계를 대표하고 있습니다. bradyzoites 전환은 높은 산도, 또는 인터페론 감마 (IFNγ)의 추가로 매체를 사용하여 CO 2 기아의 조직 문화에 시뮬레이션 할 수 있습니다. Bradyzoites는 렉틴가 Dolichos biflorus agglutinin (DBA)가 바인딩에 낭종 벽의 존재에 의해 특징입니다. 찬란 분류 DBA는 낮은 CO 2와 높은 산도 매체에 노출되었습니다 인간의 포피의 섬유아 세포 (HFFs) 재배 기생충에있는 낭종 벽을 시각화하는 데 사용됩니다. 마찬가지로, 기생충은 BMMs가 IFNγ와 lipopolysaccharide (LPS)로 활성화한 후 골수 파생 macrophages (BMMs)가 DBA에 의해 감지 낭종 벽을 표시 murine 뼈에 거주. 이 프로토콜은 T.의 전환을 유도하는 방법을 보여줍니다 것입니다 BMMs의 낮은 CO 2 및 활성화와 높은 산도 성장 매체를 사용하여 bradyzoites하는 gondii. 호스트 세포는 coverslips에 대한 교양 tachyzoites와 감염 중 IFNγ와 LPS (BMMs)를 추가로 활성이나 사흘 동안 높은 산도 성장 매체 (HFFs)에 노출됩니다. 감염 완료되면, 호스트 세포는 고정 permeabilized 및 차단됩니다. 낭종 벽은 형광 현미경과 rhodamine의 DBA를 사용하여 시각 것입니다.
프로토콜
1. 인간의 포피의 섬유아 세포 (HFF) 코팅 coverslips의 준비
- 24 잘 조직 문화 판의 우물의 바닥에 살균 둥근 유리 coverslip를 놓습니다.
- 합류 150cm 두 플라스크에서 HFFs을 수확하려면, 1X PBS로 두 번 술병을 씻어 0.025 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 2.5 ML를 추가합니다. ° C 50~10분에 대한 37 휴대용 술병을 품어.
- 손바닥에 대한 술병의 측면을 감청하는 것은 술병에서 세포를 분리에 도움하실 수 있습니다. 일단 세포가 술병에서 발표했습니다 HFF 중간 150 ML (Dulbecco의 수정된 이글 매체 [DMEM]이 10% FBS와 2 MM L - 글루타민,, 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신)과 그 술병을 씻어 수집 매체를 사용을 추가 세포.
- coverslips 잘 당 세포의 1 ML 하는걸.
- 세포가 37 ° C 5 % CO 2 합류가 될 수 있습니다.
2. BMC 개발 L929 에어컨 매체 (CM)를 준비
- L929은 confluency 오랜 기간 후에 요소를 자극 대식 세포 콜로니를 secretes ....
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토론
T.의 bradyzoite 개발의 메커니즘은 완전히 이해되지 않지만, 분자 유전 분석 조직 문화 gondii 단계 변환 bradyzoite의 낭종 형성 2,3,4에 관련된 유전자의 발견되었다. 분석은 또한 일부 bradyzoite 마커가 활성화 macrophages 5,6 성장 등 다른 장기 응력 조건에서 표현되는 관찰되었다. 위의 방법은 T. 성장하는 방법을 설명합니다 gondii와 유도 발전 BMCs과 HFFs 모두에서 DBA 양성 낭종 벽 구조. 낭종 개발 경로가 다른 스트레스 자극에 의해 유도된 수 있습니다 이러한 결과는 강조 표시합니다.
때문에 T. gondii는 온혈 호스트에서 거의 모든 nucleated 셀에 성장할 수 많은 세포 유형은 T. 성장하는 데 사용할 수 있습니다 체외에서 gondii. 그들이 접촉 .......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 위스콘신 - 매디슨 허먼 I. 샤피로 탁월한 연구 원정대 (CMT), NIH 수상 AI072817 (AMP)와 미국 심장 협회 수상 0840059N (LJK)의 대학에 의해 지원되었다.....
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 소 혈청 알부민(Bovine serum albumin) | Sigma-Aldrich | A7906 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) | GIBCO, by Life Technologies | 11960-051 | |
| 태아 송아지 혈청 (FBS) | Atlanta Biologicals | S11150 | 열 불활성화 |
| Rhodamine Dolichos biflorus 응집소 | Vector Laboratories | RL-1032 | |
| 포름알데히드 (16%) | Polysciences, Inc. | 18814 | |
| 글리신(Glycine) | Fisher Scientific | BP381-5 | |
| HEPES | Fisher Scientific | BP310-1 | |
| IFNγ | PeproTech Inc | 315-05 | 1회 분량씩 분주하여 보관 |
| L-글루타민 (200mM) | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| 지질다당류 (LPS) | Sigma-Aldrich | L4391-1MG | 1회 분량씩 분주하여 보관 |
| 현미경 커버 글라스 | Fisher Scientific | 12-545-80 12CIR-1 | |
| 페니실린-스트렙토마이신 | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| RPMI medium 1640 분말 (L-글루타민 함유, 중탄산염 제외) | GIBCO, by Life Technologies | 31800-022 | |
| Triton-X-100 | Fisher Scientific | BP151-500 | |
| Trypsin-EDTA (0.25%) | GIBCO, by Life Technologies | 25200 | |
| DAPI 함유 VectaShield 봉입제 | Vector Laboratories | H-1200 |
참고문헌
- Tomida, M., Yamamoto-Yamaguchi, Y., Hozumi, M. Purification of a factor inducing differentiation of mouse myeloid leukemic M1 cells from conditioned medium of mouse fibroblast L929 cells. J Biol Chem. 259 (17), 10978-10980 (1984).
- Matrajt, M., Donald, R. G., Singh, U., Roos, D. S.
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