방법 논문

Drosophila 애벌레 Segmental Axons 이내 시냅틱 Vesicles의 생체내 시각화에

DOI:

10.3791/2151

⸱

2010년 10월 15일

 , 
1Department of Biological Sciences, SUNY-University at Buffalo

이 논문에서

요약

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이 프로토콜은의 라이브 절개를 설명 Drosophila 애벌레.

초록

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axonal 수송의 메커니즘을 Elucidating하면 장거리 수송의 결함은 다른 신경 질환에 미치는 영향에 대해 결정에서 매우 중요하다고 표시했습니다. 이 필수 과정에서 결함의 연결 기능 및 개발에 해로운 영향을 미칠 수 있습니다. 우리는을 폭로하기 위해 설계되었습니다 해부 프로토콜을 개발했습니다

프로토콜

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1. 시약의 준비

  1. 7.2 및 필터 소독 128 MM NaCl, 1mM EGTA, 4 MM MgCl 2, KCl 2mM, 5mM HEPES, 1000 ML, PH 36 MM의 자당 다음 화합물을 추가하여 해부 버퍼 준비를 준비합니다.

2. 해부를위한 준비

  1. Siligard 큐브 : 겔은 약 인치 와이드, 1 인치 길이 높이 약 1cm로 잘라입니다. 겔 큐브는 절개 중에 유리 슬라이드에 배치됩니다. 큐브는 두 번 이상 사용할 수 있습니다.
  2. 핀 : 해부에 사용되는 핀 짧게 추가해야합니다. minutien 핀의 날카로운 아래 부분 절개에서 최상의 상태로 작동합니다.
  3. 한 날카로운 microdissection 스프링 가위가 필요합니다.
  4. 이 좋은 밀고 포셉 필요합니다.

3. 애벌레 수집

  1. GFP 태그 소포 단백질을 표현 아르 제 3 instar의 애벌레를 방황하는 것은 배양 접시에 저장됩니다.
  2. 애벌레는 모든 음식을 없애 탈이온수에 씻어 수 있습니다.

4. 애....

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토론

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Drosophila 애벌레 segmental 신경 사이 시냅스 소포 수송의 생체내 이미징에서 axonal 교통의 메커니즘을 연구를위한 강력한 도구입니다. 우리는 이전 반복의 확장은 소포 수송 3 역학에 미치는 영향 명료하게하다 확대 polyQ 반복을 표현 애벌레 신경 내에 전송 역학을 평가하기 위해이 프로토콜을 사용하고 있습니다. 이 프로토콜을 사용하는 것은 소포 운동의 속도는 kymograph에 비디오 스트림을 변환하여 결정하실 수 있습니다. 유전학 사용하여 GFP의 소포 운송은 GFP의 표현을 드라이브에 특정 GAL4 드라이버를 사용하여 단일 축삭 내에서 또는 여러 axons 이내 시각하실 수 있습니다. 또한 교통의 역학은 또한 특정 유전자에 대한 변이를 들고 유충에서 볼 수 있습니다. 또한 다른 GFP 변종 (CFP 또는 RFP)로 태그가이 vesicles 동시에 시각하실 수 있습니다.

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공개 사항

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관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

감사의 글

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SG는 버팔로의 뉴욕 주립 대학에서와 존 R. Oishei 재단 기금에 의해 지원됩니다.

MK는 UB의 CURCA하여 학생 연구 수상에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
미세 해부 가위 1개Fine Science Tools스프링 가위 – 날 길이 6mm. 팁 직경 0.125 mm
포셉 2개Fisher ScientificFisherbrand 해부용 Micro-Adson 톱니형 팁 포셉
해부용 핀 한 박스Fine Science ToolsMinutien 핀 직경 0.1mm

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
  2. Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron dise....

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재인쇄 및 허가

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태그

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