방법 논문

망막 안료 상피의 전체 마운트를위한 마우스 아이의 해부

50.6K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/2563

⸱

2011년 2월 27일

 , 
1UT Health Science Center at San Antonio, Greehey Children's Cancer Research Institute and Department of Cellular and Structural Biology

이 논문에서

요약

마우스 눈 해부의 정식 데모는 망막 안료 상피의 전체 마운트의 결과.

초록

망막 안료 상피 (RPE)는 단지 photoreceptors을 (막대 및 원뿔)이 들어있는 신경 망막, 아래, 포유 동물 눈의 뒤쪽에 자리잡고 있습니다. RPE는 밀접하게 그냥 위에있는 신경 망막과 색소 세포 cuboidal과 동료의 monolayer입니다. 이 협회는 망막 질환을 공부하고 연구하기 위해 큰 관심의 RPE를합니다. RPE는 상동 - 감독의 DNA 수리, P 유엔 분석의 생체내 분석에의 사이트입니다. 작은 크기로 인해 해부하다 (직경 3.5mm 정도)와 구면 모양 마우스 눈 특히 어렵습니다. 이 문서 상세 RPE의 전체 마운트에 발생하는 안구의 해부를위한 절차를 설명합니다. 이 절차에서는, 우리는 눈 구면 구조에 대해 함께보다는 일을하는 방법을 보여줍니다. 간단히, 결합 조직, 근육, 그리고 시신경이 안구의 뒤쪽에서 제거됩니다. 그런 다음, 각막과 렌즈가 제거됩니다. 다음 전략적 상처가 남아있는 조직의 중요한 평평화에 결과를 만들 수 있습니다. 마지막으로, 신경 망막은 부드럽게 여전히 기본 맥락막과 공막엔에 첨부되어 그대로 RPE를 공개, 해제 해제됩니다. 이 모든 마운트는 P 유엔 분석 또는 RPE 조직의 immunohistochemistry 또는 immunofluorescent 평가를 수행하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

1. 눈 밖에서 관계없는 조직을 제거

  1. 35mm 접시의 뚜껑에 1X PBS 하거라. 수준은 뚜껑의 입술 아래에 있어야합니다.
  2. 35mm 접시에 저장 튜브에서 바로 포셉, 전송 아이 (들)을 사용합니다. 1 : 눈이 두 가지 이유로 PBS에 빠져들 수 있습니다. 당신이보고 쉽게 제거 2 수 있도록 외부 조직의 눈을 멀리 "떠"것입니다. 정지 상태에서 해부하는 동안 눈을 자연스럽게 당신은 반대보다는 이런 형상 작업 수 있도록, 자사의 구형 형태를 유지합니다.
  3. 직각 포셉 (45 ° 15 °)의 두 쌍을 이용하여 부드럽게 (각막쪽으로 IE) 성미 조직을 떼어, 가능한 한 많은 근육과 결합 조직으로 제거합니다. 일부 결합 조직은 남아있게됩니다. 노력 가능한 거의 같은 눈알을 쥐어 짜기로하여야한다.
  4. 스프링 가위에 대한 15 ° 포셉을 무역. 45 °의 집게와 함께 지속적인 눈을 가지고 있지만, 나머지 근육 및 결합 조직뿐만 아니라 시신경을 떼어 버리기 봄 가위를 사용합니다. * 도움말 : 트림 다음 성미 조직을 밀어 가위의 바깥쪽 가장자리를 사용하여 (corneo - scleral 나누어 방향)합니다. 모든 외부 조직이 눈에에서 제거되었습니다 때까지 계속합니다.

2. 각막과....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

RPE는 상동 - 감독 수리 생체내 분석에서 P 유엔 분석의 사이트입니다. P 유엔 분석은 상동 - 감독 수리의 주파수에서 다른 DNA의 손상의 효과 1,2 및 DNA 손상 신호 및 복구 유전자 3,4,5을 연구하는 데 사용되었습니다. 이 분석은 RPE 1 단일 셀 이벤트를 감지, 매우 민감합니다. 또한 개발 6 중 상동 - 감독 복구 이벤트의 타이밍의 차이를 감지할 수 있습니다. murine 눈은 시신경 7 바깥쪽 반경 개발 및 따라서, 시신경의 머리에서 이벤트의 상대적인 거리들이 발생하는 개발 시간을 연결합니다.

RPE는 또한 망막 개발이나 망막 질환을 연구하는 사람들에게 관심이있다. RPE 세포 교양 수 있지만, 이렇게하기 위해 중요한 제한이 있습니다. 성인 RPE 세포를 게시할 - mitotic

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

감사의 글

이 작품은 환경 건강 과학의 국립 연구소에 의해 지원되었다 [K22ES012264에 AJRB]와 미국 암 협회 InstitutionalResearch 그랜트 [ACS - IRG - 00 - 173-04] 조종사 projectaward [AJRB에]. 우리는하지 말아야 할 걸의 예를 들어, 원고 특히 비디오와 아담 브라운에 대한 의견의 중요한 독서에 대한 주교의 실험실의 구성원을 또한 감사드립니다. 우리는 우리에게 해부 비디오 촬영을위한 카메라 설정 그의 해부 범위 / 비디오의 사용을 허용을위한 Greehey 어린이 암 연구소의 박사 도널드 맥유언 감사합니다. 우리는 선명하게 우리의 microdissection 도구의 수리를 위해 코르테 악기에서 Daron 브라운 감사합니다.

....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
직형 포셉Roboz Surgical Instruments Co.RS-4903팁: .08 x .04 mm 재질: INOX
45° 포셉Roboz Surgical Instruments Co.RS-5005팁: .05 x.01 mm 재질: INOX
15° "up" 포셉Roboz Surgical Instruments Co.RS-5045A팁: .1 x.06 mm 재질: INOX
스프링 가위Roboz Surgical Instruments Co.RS-5604결합 팁 너비 0.3mm 절단면 길이 3mm 재질: 스테인리스강
양안 해부 현미경Carl Zeiss, Inc.Discovery V.8반사 광원 사용
팔로이딘InvitrogenA22283Alexa Fluor 546

참고문헌

  1. Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice. Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).
  2. Reliene, R. H. lavacove, Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

PBS

관련 논문