운동은 면역 세포의 apoptosis를 유도 할 수있다. 다양한 측정 한계는 특히 사전 심사에 혈액 샘플을 분리하고 치료하는 데 필요한 시간의 양을 관련된있다. 보여주는 운동 유발성 림프구의 apoptosis의 분석을위한 신속하고 법으로서 절차입니다.
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방법 논문
운동 유발성 Apoptosis 림프구의 결정을위한 손가락 - 스틱 혈액 샘플링 방법론
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
운동은 면역 세포의 apoptosis를 유도하는 수있는 생리적 자극이다. 지금까지 다양한 제한은 특히 이전에 세포 죽음의 평가에 혈액 샘플을 분리하고 치료하는 데 필요한 시간의 양을에 관한,이 현상의 측정과 확인되었습니다. 이 때문에 면역 세포 apoptosis에보고 증가가 시스템에 대한 운동의 실질적인 효과에 기여하거나, 결국이 측정을 얻기 위해 필요한 시간과 처리를 반영 아르 될 수 있는지 여부를 확인하기가 어렵습니다. 이 문서에서 우리는 운동 유발성 apoptosis 림프구의 분석을위한 신속하고 법으로서 절차를 보여줍니다. 다른 기법과는 달리, 전체 혈액 샘플을 취득 즉시 항체 패널에 추가됩니다. 잠복기에 따라, 적혈구는 lysed 및 샘플 분석 준비입니다. 손가락 - 스틱 샘플링 절차의 사용은 필요한 혈액의 볼륨을 감소하고, 주제에 대한 불편을 최소화합니다.
프로토콜
1. 손가락 - 스틱 혈액 샘플링
- 전체 혈액의 컬렉션은 일반적으로의 정지 다음 (일반적으로 1~3시간에서 동안 기준 측정 (보통 10-15 분 앉아 휴식을 다음) 또는 즉시 운동 시합에 따라, 그리고 사후 운동 기간 동안 휴식을 취해 운동).
- 유니버설주의를 사용하면, 먼저 70% 이소 프로필 알코올로 손가락을 소독.
- 다음 찔린 자동 첨두 또는 유사한 장치를 사용하여 사이트입니다. 우리가 주제 편안함을 제공하는 30 게이지 랜싯를 사용하지만, 더 큰 게이지 주사 바늘을 이용 할 수 있습니다.
- 혈액의 첫 번째 드롭을 닦아 후 응고 방지하기 위해 리튬 헤파린 취급 모세관 튜브 또는 microvettes에 혈액을 수집합니다.
2. 세포 Phenotyping 및 Apoptosis의 스테 이닝
- 250 μL 바인딩 버퍼에 titred 항체 패널 (표 1 배선도 참조) 10 μL heparinized 전체 혈액을 추가합니다. 우리는 성공을 1시 20분 희석 계수를 사용해야하지만, 각각의 실험실이 최고의 작업 솔루션을 결정하기 위해 시약을 titre해야합니다.
백혈구 집합에서 운동 유발성 apoptosis의 결정에 대해 표 1....
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토론
법으로서 샘플 수집 과정 및 후속 분석 운동 유발성 apoptosis 림프구의 조기 늦게 두 단계의 분석에 대한 증명입니다. 그것은 명확하게 괴사 및 apoptotic되지 않은 그 세포를 제외하는 것도 가능합니다. 이 절차 동안, 이전에 여러 시간 지점에서 antecubital 지역에서 침략 venipuncture와 관련된 단점과 불편을 극복하고, 즉시 운동 후 또는 운동 시합 기간 동안 카테터를 확보. 조사의 측면에서, 이러한 절차는 일반적으로 모든 개인이 가지고 정맥 절개, 전문 교육을 필요로합니다. 하나가 존재하는 경우뿐만 아니라, 주제 모집 및 유지이 절차를 사용하여 향상된 것으로 예상된다는, 따라서 큰 영향을 찾을 가능성 통계 능력을 증가.
venipuncture 혈액 샘플링을 채용 이전 조사는 전체 lymphocytes을위한 휴식 및 사후 운동 가치를보고있다. annexin V, 심슨 외 있습니다. 활용하면 휴식을 약 1.2 % apoptotic l.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 연구는 웨스턴 켄터키 대학에서 학부 장학금위원회에서 새로운 교수 부여에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 유세포 분석 결합 완충액 | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| 적혈구 용해 완충액 | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| 채혈기 | Accu Check Soft Touch | Roche Group | ||
| 모세관 | 헤파린 처리 모세관 | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| 원심분리기 | GmC Lab | Gilson, Inc. | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC 접합체 | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE 접합체 | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE 접합체 | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE 접합체 | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD 생존능 염색 용액 | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC 접합체 | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| 유세포 분석기 | C6 | Accuri |
참고문헌
- Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
- Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K.
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재인쇄 및 허가
