Trichuris muris 감염은 모성 쥐가 보호 Th2 반응을 생성하고 민감한 쥐가 병적인 Th1 반응을 생성하는 Th2 면역의 창자 모델입니다.
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방법 논문
Trichuris muris 감염 : 굿에서 2 형 내성 및 염증의 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
Trichuris muris은 생쥐의 자연 병원체이며 인간과 가축 1 감염 Trichuris의 수종에 생물학과 antigenically 비슷합니다. Infective 달걀이 구두 gavage, 말초 소장에서 부화에 의해 부여됩니다, 라인 -이게 맹장과 근위 결장과 성숙시 crypts이 웜은 환경 1에 달걀을 풀어 그 창자 상피 세포 (IECs)를 침공. 이 모델은 요소를 검토하는 강력한 도구입니다 컨트롤 CD4 + T는 헬퍼 (TH) 세포 활성화뿐 아니라 창자 상피의 변화. 이러한 C57BL / 6 BALB / C와 같은 저항 근친 직전에 발생하는 면역 반응이 Th2 편광 크린 시토킨 (IL - 4, IL - 5, IL - 13)과 Th1 - 관련 크린 시토킨 동안 (IL 웜의 퇴학이 특징입니다 -12, IL - 18, IFN - γ) 유전자 취약 AKR / J 마우스 2-6에서 만성 감염을 추진하고 있습니다. Th2 크린 시토킨 신속 IECs의 매출, 고블렛 셀 차별화, 모집 및 상피 투과성 및 웜 퇴학 7-15에 연루되어 모든있는 평활근의 수축에 변화를 포함한 창자 microenvironment의 생리 변화를 추진하고 있습니다. 여기 자세히 후속 실험에서 사용할 수 Trichuris muris 달걀을 전파를위한 프로토콜을. 우리는 또한 이후의 감염 분석을위한 제안 샘플 실험의 수확을 제공합니다. 전반적으로,이 프로토콜은 위장관뿐만 아니라 IECs의 면역 이펙터 기능에 목 proclivity에 관한 질문을 해결하기 위해 사용할 수있는 Trichuris muris 마우스 감염 모델을 수행할 수있는 기본 도구와 연구자를 제공할 것입니다.
프로토콜
1. Trichuris muris 달걀을 전파
- (또는 유전자 취약 마우스 Trichuris muris 달걀의 새로운 배치를 생성하려면, 20-30 immunodeficient 생쥐를 감염 () 예 NOD.Cg - Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) 또는 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - - /) 예. 경구 gavage으로 약 300 Trichuris muris 달걀과 6~8주 된 AKR / J).
- 32-35일 후 CO 2 질식하여 쥐를 희생.
- 마우스의 복부 측면을 폭로하고 70 %의 에탄올과 함께 복부가 젖었어.
- 사용 포셉은 복부 피부를 파악하고 가위를 사용하여 작은 절개를합니다. 복부 내용을 노출 피부를 잘라.
- 이게 맹장과 근위 대장을 식별하고 그들을 제거합니다.
- 500 U / ML 페니실린, 500 μg / ML 스트렙토 마이신 (P / S)와 Dulbecco의 수정 이글 중간 (DMEM)을 포함 10cm 배양 접시에있는 맹장과 근위 대장를 놓습니다. 루멘과 벌레를 노출 열어이게 ....
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토론
이 프로토콜은 자세한 조사가 필요에 따라 수정할 수있는 표준 고용량 급성 Trichuris muris 감염합니다. 예를 들어, 마우스가 희생될 수 있으며, 조직은 다른 일 수확. 생쥐가 성공적으로 가득 벌레 부담을 설립한다는 결정하기 위해 그들은 모두 쥐가 약 200 벌레의 부담을 가지고해야하는 시점에서, 하루 14 희생하실 수 있습니다. 생쥐도 감지하는 웜이 성숙에 도달하고 그 삶의 기간 동안 호스트와 남아 것이 32일에 대한 감염 수 있습니다. 또한, 프로토콜은 만성 Trichuris muris 감염을 모델로 적용할 수 있습니다. 이렇게하려면 관리 계란 선량은 저용량 감염 (약 30 알)을 조정할 수 있습니다. 이 약을에서 정상적으로 모성 마우스는 보호 Th2 반응을 유도하지 않는 것이 아니라 Th1 반응을 생성하고 약 20 웜 17 부담을 유지합니다.
다른 감염 모델을 통해 Trichuris muris 감염
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공개 사항
동물 실험은 브리티시 컬럼비아 대학교에서 정한 지침과 규정에 따라 수행되었다.
감사의 글
이 작품은 건강 연구의 캐나다 연구소 (MSH - 95368, 청소 - 89,773 및 CZ하는 걸레 - 106623)과 혁신에 대한 캐나다 재단에 의해 지원되었다. SCM은 위장 박사 교제의 CIHR / 캐나다 협회의받는 사람입니다. CZ는 CIHR 새로운 탐정이다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
| 동물 먹이 니들스 (18 × 1 ½ ") | 포퍼 | 7912 | |
| 부드러운 곡선 집게 | Roboz | RS - 5047 | |
| DMEM | Gibco | 11,965 | |
| NOD.Cg - Prkdc scid Il2r gtm1Wjl / SzJ (NSG) | 잭슨 연구소 | 005557 | 이들은 우리가 사용 생쥐되며, 단, immunodeficient 마우스 또는 민감한 긴장이 작동합니다. |
| RNAlater | Qiagen | 76,104 | |
| 2 ML 튜브 | Axygen | MCT - 200 - C | |
| 15 ML 튜브 | 매 | 352096 | |
| 6 웰 플레이트 | 매 | 353046 | |
| Paraformaldehyde | 전자 현미경 과학 | 15,710 | |
| α - RELMβ 항체 | PeproTech 부동산 | 0694270Rb |
참고문헌
- Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
- Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cyt....
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재인쇄 및 허가
