난소와 Oviducts의 3 차원 조직 문화 알긴산의 Hydrogels

요약

그들의 입체적인 맥락에서 정상 세포의 문화 세포 변형 및 tumorigenesis에 필요한 초기 이벤트를 연구하는 다른 방법을 나타냅니다. 이 방법은 난소암 형성 초기에 이벤트를 연구 정상 난소와 oviductal 세포를 성장하는 데 사용됩니다.

초록

난소암은 여성 암 사망의 다섯 번째 주요 원인이며, 미국 ¹ 63% 사망률이 있습니다. 난소 암에 대한 원산지 세포 유형은 문제가 여전히하거나, 난소 표면 상피 (오세) 또는 나팔관의 fimbriae ^2,3의 말초 상피 수 있습니다. 체외의 기본 문화로 정상 세포 Culturing 과학자함으로써 definitively 원산지의 세포 유형을 결정, 뚜렷한 상피에서 난소암으로 이어질 수도 있습니다 특정 변경 내용을 모델로 사용됩니다. 이것은이 질병을 대상으로보다 정확한 생체, 조직 특정 유전자의 변화와 동물 모델, 그리고 더 나은 예방 전략의 개발을하실 수 있습니다.

알지네이트요의 hydrogels에서 정상 세포를 유지하는 것은 자신의 입체적인 맥락에서 세포의 체외 배양에 단기을 촉진하고 플라스미드 DNA, siRNA, 작은 분자의 도입을 수 있습니다. 하나의 동물에서 실험의 수를 증가 하나 장기 생성하실 수 있습니다 메스, 여러 문화를 사용하는 전략 상처에서 파생됩니다 조각 culturing 기관에 의해. 이것은 난소암의 형성과 관련된 오세의 확산에 선도적인 배란의 모델 측면을 인하. 이러한 플라스틱 표면에 잘 성장하지 않는 오세으로 셀 형식은이 방법을 사용하여 교양과 정상 세포의 프로세스 또는 암 형성 ^4에서 가장 오래된 행사로 조사를 용이하게하실 수 있습니다.

알긴산의 hydrogels는 조직 ⁵ 다양한 종류의 성장을 지원하기 위해 사용할 수 있습니다. 알긴산은 손상 조직 ^6,7하지 않는 부드러운 겔화 작업의 결과, β - D - mannuronic의 산성과 칼슘 이온과 가교 수있는 α - L - guluronic 수 소산의 단위를 반복 구성된 선형 다당류이다. 같은 Matrigel 같은 다른 세 차원 세포 배양 매트릭스와 마찬가지로 알지네이트요 티슈에 대한 기계적 지원을 제공하지만, 단백질은 알지네이트요 매트릭스와 반응하지 않습니다, 따라서 세포가 ⁵ 신호 시작하지 않는 합성 세포외 기질로 알지네이트요 기능. 알지네이트요의 히드로겔 표준 세포 배양 매체 수레와 체외에서 조직 성장의 아키텍처를 지원합니다.

방법을 준비, 분리, 최대 2 주가에 대한 문화의 유지 수 알지네이트요의 hydrogels로 난소 및 oviductal 오르간 작품의 포함을 위해 제공됩니다. 장기 문화 단백질과 RNA 샘플의 분석을 위해 세포의 효소 출시도 설명합니다. 마지막으로, 기본 세포 유형의 성장은 생쥐에서 유전자 불멸화없이 가능하며 한방과 유전자 변형 마우스를 사용하는 수사관을 수 있습니다.

프로토콜

1. 난소 해부와 조직 분리

1. 나트륨 알지네이트요의 0.5 % (W / V) 솔루션을 준비, 프로토콜의 수정된 버전에서 준비 살균 PBS 37에 열을 ° C.를 사용하여 이전 ⁵ 설명 역전이나 락을로 믹스지만, 와동하지 않습니다. 25 G 바늘로 1 ML의 주사기에 알지네이트요를 그려 37에서 유지 ° C.
2. crosslinking 조직 캡슐에 알지네이트요 37에 따뜻한 ° C.에 대한 10mM CaCl ₂ 무균 용액 준비
3. 문화 매체 (αMEM + 5 단위의 페니실린 및 5 μg / ML 스트렙토 마이신) 당 잘 각 실험 24 잘 접시의 1mL를 준비합니다. 문화 매체의 다양한 약물, 펩티드, 또는 바이러스를 포함합니다. 이전 기관의 캡슐에 transfection을 위해, 37 ° C.에서 4 시간 동안 Lipofectamine 2000 및 플라스미드 DNA와 조직을 품어
4. 동물의 장기를 절개하다, 어떤 지방이나 잔여 조직을 제거 부드럽게 난소를 둘러싼 부르사 막 해내, 그리고 오르간을 bisecting × 4 조각으로 난소 또는 수란관 잘라. 동물은 자궁 경부 전위 다음 CO ₂ 질식에 의해 euthanized되었다. 수란관 들어, 부드럽게 연결 세포막을 분리 당....

토론

알지네이트요의 hydrogels를 이용한 3 차원 오르간 문화 시스템의 개발은 생물의 다양한에서 여러 가지 조직 유형을 분석하는 다양한 방법을 나타냅니다. 그것이 세포가 ¹¹ 성장할 수있는 발판을 제공과 같은 3D 문화의 사용은 조직 공학 및 재생 의학 분야로 확장될 수 있습니다. 현재, 저희 연구실은 인간의 난소와 나팔관 조직을 사용하여 초기 연구를 겪고 있지만, 인간이 아닌 인간 영장류 머리카락 문화 ^{12,13 설명했습니다.}

문화 organoids에 알지네이트요의 hydrogels의 사용은 이러한 통합 콜라겐, 섬유소, 또는 hyaluronic 산성 등 hydrogels 다른 유형의 여러 장점을 제공합니다. 젤 organoid ¹⁴ 캡슐로 실내 온도와 중성 산도에서 알긴산의 젤은 조직에 약간의 장애가 제공합니다. 알긴산은 조직의 성장 ⁵ 화학적으로 불활성 지원을 제공, 휴대 단백질과 반응하지 않.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사	카탈로그 번호	댓글 (옵션)
Leibovitz L - 15 배지	Gibco	11,415
αMEM 매체	Gibco	12000-022
나트륨 알지네이트요	Novamatrix
나트륨 cacodylate	시그마 알드리치	C0250
폴리 프로필렌 메쉬 섬유	맥매스터 카		45 "와이드 롤, 0.0041"오프닝
Lipofectamine 2000	Invitrogen	11,668
페니실린 / 스트렙토 마이신	Gibco	15070-063
알긴산의 lyase	시그마 알드리치	A1603
A1603	시그마 알드리치	C9697	클로 스트 리듐 histolyticum에서
소 혈청 알부민	MP의 Biomedicals	103700
태아 소 혈청	Gibco	Gibco
ITS 솔루션	로체	11074547001	인슐린 / 트랜스페린 / 나트륨 selenite
Cytokeratin 8 항체	발달 연구 브리 도마 뱅크	TROMA - 1	1:200에​​서 사용
DAPI	벡터 실험실	H1200
Bromodeoxyuridine	시그마	B50002 - 1G	최종 농도 10 μm의