체외에서 시스템

요약

체외 시스템에 수정 3 - D는 재구성 지하 막 여러 종양 세포 라인의 성장 특성 전이성 보조 사이트에서 종양 세포의 휴지 또는 proliferative 행위와 연관있는 제공됩니다 생체내에.

초록

유방암의 재발은 종종 암의 흔적이 없다는있는 긴 잠재 기간을 다음과 metastases는 기본 종양과 도움이되는 치료의 제거 후 수년 전까지는 임상적으로 명백한 될 수 없습니다. 이러한 현상의 가능성이 설명은 종양 세포가 전이성 사이트 씨앗 기존 치료에 저항하고, 시간이 ^1-4 오랜 기간 동안 휴면 남아있다는 것입니다.

보조 사이트에서 휴지 암세포의 존재는 둘 다 분아 따위에 의해 번식하지 않으며 apoptosis가 ^5-7 받아야 정지 독방 세포로 이전에 설명되었습니다. 또한, 이러한 고독한 세포는 질병의 진행의 ^80-10의 초기 단계에서 기본 종양에서 보급하고 환자의 골수, 혈액, 림프절 ^1,4,11에서 성장 체포 거주 보여왔다. 따라서, proliferative 상태로 휴면 또는 스위치를 조절 메커니즘을 이해하는 것은 질병 재발을 방지하기 위해 새로운 목표와 중재를 발견하기위한 중요합니다. 그러나, 전이성 종양 성장에 휴면에서 스위치를 조절 메커니즘을 분열하는 것은 가능한 모델 시스템의 부족에 의해 방해되었다.

생체내 및 종양 세포의 전이성 진행을 공부하기 전 생체내 모델 시스템에서 이전에 설명한 ^{1,12-14되었습니다.} 그러나 이러한 모델 시스템은 실시간 및 전이성 질환으로 세포 분열 따위에 의해 번식하는 고독한 휴면 종양 세포의 출현을 트리거 무엇으로 높은 처리량 방식의 기계론의 통찰력에서 제공하지 않았습니다. 우리는 최근 (D2A1, MDA - MB - 231, K7M2) 중 휴면 (D2.OR, MCF7, K7M2 - AS.46) 또는 proliferative 전이성 동작을 세포의 생체내 성장 특성 모델 체외 시스템에서 3D를 개발 생체내 인치 우리는 전이성 사이트에서 생체내의 휴면을 전시 종양 세포가 3 차원 (3D) 지하 막 추출물 (BME)에서 양식 때 생체내 높은 전이성 세포가 쉽게 변수 후 3D 문화 분아 따위에 의해 번식하는 반면, 정지 남아 있지만, 상대적으로 짧은 것을 보여주 정지의 기간. 중요한 시험 관내 모델 시스템에서 3D를 이용하여 우리는 ECM 성분이 휴면 종양 세포가 proliferative 상태로 전환되며, 생체내 연구 ^{15-17에서에서} 이것을 확인했는지 여부 조절에 중요한 역할을하는 처음으로 보여주었다. 따라서이 보고서에서 설명하는 모델 시스템 모델 종양의 휴면을 체외 방식의를 제공하고 microenvironment에 의해 유도된 proliferative 성장로의 전환을 공부합니다.

프로토콜

1. 휴지 및 전이성 종양 세포 라인의 세포 배양 관리

1. Dulbecco의 수정된 이글의 중간 (DMEM) 높은 포도당와 10 % 태아 소 혈청을 (포함 10cm 문화 접시에 휴지 (D2OR / MCF7/K7M2-AS.46) 및 전이성 종양 세포를 (D2A1 / MDA - MB - 231 / K7M2) 성장 FBS)과 항생제. 세포 70-80%의 합류에 도달하면, 다음과 같은 assays로 진행합니다.

2. 휴지 (정지)과 전이성 (proliferating) 종양 세포의 세포 증식 분석은 3D - BME 시스템에 교양

3D 시스템에 Culturing 휴지 / 전이성 세포

1. 분석을 수행하기 전에 4 해동 Cultrex 성장 인자 - 감소 지하 막 추출 (BME)는 ° C 냉장고 밤. BME가 항상 얼음에 처리되어야합니다.
2. 다음날, 판상 후드 안에 얼음 트레이에 96 잘 접시를 놓으십시오. 주사기와 디스펜서를 사용하여 얼음 차가운 BME 50 - 100μl와 코트 각각 잘. 더 거품이 우물에 형성되지 있는지 확인합니다. 30 분 37 5 % CO ₂ humidified 인큐베이터에 BME와 코팅 96 ....

토론

전이성 성장하기 위해 전환에 휴면 상태 또는 결과 종양 세포를 전파 관리 기본 메커니즘은 크게 알려지지 않은 상태로 유지됩니다. 이러한 현상은 인간의 환자 ^4,12 그리고 몇 잠복기 모델이 문제를 해결하기 위해 개발되었습니다에서 공부하는 것은 매우 어려운되었습니다. 그럼에도 불구하고, 생체내 및 종양 휴면에 대한 전 생체내 모델 시스템의 일부 ^(1,12에서 검토) 특징되었습니다. 그러나, 종양이 휴면에 대한 생체내 모델은 주로 종양 휴면을 규제하는 잠재적인 메커니즘을 검증하기 위해 이용하지만, 실시간으로 하나의 전파 휴면 종양 세포의 생물학을 탐구 의무가 없습니다 수 있습니다.

3 - D 시스템이 처음으로 독방에 종양의 휴면과 체외 모델 시스템에서 전이성 성장을 스위치 여기 모델 제시. 모델링 종양의 휴면 (정지)와 3D 시스템의 확산로의 전환에 대한 확산 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM 높은 포도당	Invitrogen	11965-118
DMEM 낮은 포도당	Invitrogen	11885-092
태아 소 혈청 (FBS)	Invitrogen	10091-148
성장 인자 - 삭감 3 - D Cultrex의 지하 막 추출	Trevigen 주식 회사		14-15mg/ml 간의 단백질 농도
D2.0R 및 D2A1 세포 라인			5,19
K7M2 및 K7M2AS1.46 세포			20
MCF - 7과 MDA - MB - 231 유방암 세포	ATCC
8 챔버 유리 슬라이드 시스템	(랩 - 테크, 써모 과학)	177402
셀 Titer 96 수성 한 솔루션 세포 증식 분석 키트	Promega	G3580
VECTASHIELD는 DAPI로 미디어를 장착	벡터 연구소 주식 회사	H - 1200
일반 당나귀 혈청	잭슨 ImmunoResearch	017-000-121
엘리사 플레이트 리더	바이오 테크		기록 490nm
공촛점 현미경	자이스 혈구 - LSM - 510		확대 x63