방법 논문

초음파 타겟 Microbubble 파괴 기술 소개

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DOI:

10.3791/2963

2011년 6월 12일

이 논문에서

요약

초음파 타겟 Microbubble의 파괴 (UTMD)가 같은 마음으로 간 초음파 검사에 액세스할 수 기관을 대상으로, 치료 유전자를 포함 bioactive 분자의 특정 사이트 게재를 직접하는 데 사용할 수 있습니다 1-6.

초록

이러한 관심의 유전자를 인코딩 부정 청구 플라스미드 DNA를 벡터로 UTMD, bioactive 분자에서, 지질 microbubble 대비 요원 7-9의 양이온 포탄에 추가됩니다. 생쥐에서 이러한 벡터 운반 microbubbles는 심장의 좌심실 자에게하거나 직접 관리하실 수 있습니다. 큰 동물에 그들은 또한 카테터를 통해 주입 intracoronary 수 있습니다. 순환에서 대상 기관에 대한 후속 배달 microbubbles의 공진 주파수에서 음향 캐비테이션에 의해 발생합니다. 그것은 기계적 에너지 또는 대상 지역 10 microvasculature의 내피 세포 사이의 과도 기공 형성에 microbubble 파괴 결과에 의해 생성되는 가능성이 보인다. 이 sonoporation 효과의 결과로로와 내피 세포에 걸쳐 transfection 효율이 향상되며, transgene 인코딩 벡터는 주변 조직으로 입금됩니다. 순환에 남아 플라스미드 DNA는 신속하게 추가로 이외의 sonicated 조직에 전달 가능성을 감소하고 매우 구체적인 목표 - 장기 transfection로 연결 혈액에 nucleases로 저하됩니다.

프로토콜

1. Microbubble 주식 준비

  1. 10 PBS의 MLS는 1g의 포도당 200 MG 1,2 - dipalmitoyl - SN - glycero - 3 - phosphatidylcholine 50 MG 1,2 - dipalmitoyl - SN - glycero - 3 - phosphatidylethanolamine를 섞는다.
  2. 피펫은 5 분마다 혼합, 끓는 물 목욕 20~30분의 혼합물을 가열.
  3. 솔루션은 최대 6 개월까지 4 ° C에 저장할 수 있습니다.

2. Microbubble 준비

  1. 40 준비 microbubble 재고 솔루션과 부화 ° 15 분 C의 250 μl를 가져가라.
  2. 미리 예열 microbubble 솔루션은 다음 글리세롤의 50 μl를 포함하는 1.5 ML의 microtube로 전송됩니다.
  3. 표현이 관심의 유전자 (4mg/ml의 최적 농도로 Qiagen 내독소 무료 MegaPrep 키트, Qiagen, 제르, MD에 의해이 예제에서 정화)에 대한 건설 인코딩 플라스미드 DNA를 정화 1-2 MG. 2.4) 인산 버퍼 호수 500 μl의 최종 볼륨에 추가됩니다. 내독소 무료 Qiagen의 maxipreps은 불....

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토론

UTMD은 유전자 전달에 대한 새로운 접근 방식을 나타냅니다. 플랫폼 기술로 그것은 조직 특이성의 높은 수준을 원하는 것입니다 bioactive 분자의 무수한를 제공하기 위해, 많은 잠재적인 유전자 치료 전략의 결합 수 있습니다. 기술의 주요 생물 학적 한계는 transfection의 낮은 효율성이다. 또 다른 중요한 고려 사항은 현저하게 뼈 또는 공기를 개입 감소 수있는 초음파 검사로 대상 기관의 접근이다. 기술은 조직 손상을 11 증가 효율성을 제한, 대상 조직 11 기반 기술의 최적화뿐만 아니라 음향의 기본적인 이해를 필요로합니다. 그러나, 그것은 조직을 특정 transgene 표현의 효과를 평가하기 위해, 저렴한 신속하고, 반복적인 접근 방식을 제공하며, transgene 표현의 낮은 수준 도움이 될 수있는 질환에 대한 효과적인 치료를 제공합니다.

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공개 사항

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

감사의 글

그랜트 지원 NHLBI HL080532, NHLBI HL073449, NCRR RR16453, 그리고 그랜트 -에 도움이 수상 (RVS)를 AHA 국가를 포함하고 있습니다. 특별 감사는 비디오 제작과 함께 자신의 지원 거리 코스 설계 및 컨설팅 (DCDC) 그룹 dcdcgroup.org,하고 DCDC를 설립 교육 부여 번호 P336C050047 미국 이민국에 연장됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
시약 / 장비 이름 회사 카탈로그 번호 댓글
1,2 - dipalmitoyl - SN - glycero - 3 - phosphatidylcholine 시그마 - 알드리치 P - 5911 microbubble 지질 껍질 성분
1,2 - dipalmitoyl - SN - glycero - 3 - phosphatidylethanolamine 시그마 - 알드리치 P - 3275 microbubble 지질 껍질 성분
포도당 시그마 - 알드리치 G5400 microbubbles을 안정 생각
생리 인산염 버퍼 시그마 - 알드리치 P5368
글리세린 시그마 - 알드리치 G5516 coalescing에서 microbubbles을 방지하기 위해 믿고
Octafluoropropane 가스 AirGas N / A 임상 응용에 사용되는 불활성 가스
VialMix 치과 amalgamator 브리스톨 - 마이어스 Squibb N / A
1 MHz 이상, 13mm, 산만 변환기 올림푸스 A303S - SU
20 MHz의 기능 / 임의 파형 발생기 애질런트 33220A
전력 증폭기 크론 - 하이트 (주) 모델 7500
수중 처음기 브루엘 및 Kjaer 유형 1803
충전 앰프 브루엘 및 Kjaer 유형 2634
500 MHz 이상 오실로 스코프 르크로이의 9354L
34 MHz의 변환기와 VisualSonics 'Vevo 2100 이미징 시스템 VisualSonics 2100
27G 반장님 꼬리 정맥 카테터 VisualSonics N / A
지니 플러스 주입 펌프 켄트 과학 요정

참고문헌

  1. Bekeredjian, R., Chen, S., Frenkel, P. A., Grayburn, P. A., Shohet, R. V. Ultrasound-targeted microbubble destruction can repeatedly direct highly specific plasmid expression to the heart. Circulation. 108, 1022-1026 (2003).
  2. Bekeredjian, R., Katus, H. A., Kuecherer, H. F.

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재인쇄 및 허가

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