마우스 뇌의 양쪽 반구에서 국소 자기장 전위(Local Field Potential)의 기록

초록

출처: Chen, Y., et al. 마우스의 2차 운동 피질에서 양측 국소 전위 기록을 통한 반구 측방화 평가. J. Vis. Exp. (2019).

이 비디오는 마우스 뇌의 양측 M2 영역에서 LFP(Local Field Potential)의 생체 내 기록을 보여줍니다. 마취된 마우스가 고정되고 절차를 위해 준비됩니다. LFP를 기록하려면 복잡한 운동 움직임을 담당하는 양측 M2 영역의 목표 좌표에 미세 전극을 삽입합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물 마취 및 수술

1. 지역 동물 관리 위원회에서 승인한 마취 요법으로 마우스의 무게를 측정하고 마취하십시오.
2. 수술 전에 깊은 마취를 확인하기 위해 집게로 꼬리 또는 발가락 꼬집을 수행합니다.
3. 마우스를 입체 장치에 놓고 머리를 고정합니다.
4. 양쪽 눈에 안연고를 발라 촉촉하게 유지한다. 수술 전후 진통제에 관한 지역 동물 관리 지침을 따르십시오.
5. 수술용 이발기를 사용하여 수염을 면도합니다. 노출된 수술 부위 중앙을 가위로 작게 절개합니다(12-15mm). 집게를 사용하여 두피를 정중선에서 부드럽게 당겨 빼냅니다.
6. 피부를 부드럽게 분리하고 잔여 조직을 제거합니다. 과산화수소로 코팅된 면봉을 사용하여 두개골을 청소합니다.
7. 두개골의 왼쪽과 오른쪽 양쪽에 반경이 1.0-1.5mm인 두 개의 작은 구멍을 뚫어 기록 미세 전극이 실체 현미경 아래의 M2 영역에 삽입될 수 있도록 합니다(그림 1A).
   메모: 양측 M2의 입위택시 위치: 브레그마 전방 1.94mm, 정중선 전방 1.0mm, 경막 측방 0.8-1.1mm.
8. 텅스텐 바늘로 경막을 조심스럽게 제거합니다.
9. 유리 붕규산 마이크로피펫(외경: 1.0mm)을 1-2MΩ의 저항으로 미세 전극을 기록하는 것으로 당깁니다.
10. 기계식 미세 조작기를 사용하여 0.5M NaCl로 채워진 두 개의 별도 기록 미세 전극을 구멍에 삽입합니다(60°에서, 그림 1B).

2. 마우스의 양측 M2에서 LFP 녹음

1. 왼쪽 및 오른쪽 유리 전극을 양측 M2의 적절한 좌표로 천천히 내립니다(그림 1C).
2. 품질 관리를 위해 LFP를 캡처하기 전에 차동 증폭기를 사용하여 각 전극의 저항을 테스트하십시오.
3. 1,000배 증폭으로 0.1Hz 고역 통과 및 1,000Hz 저역 통과로 녹음 프로세스를 설정합니다.
4. 마취 상태에서 초당 2회의 호흡 속도로 쥐가 고르게 호흡하는 안정적인 상태에서 최소 60초의 자발적 활동에 대한 디지털화된 원시 LFP 데이터를 수집합니다.
5. 기록 후 뇌에서 전극을 천천히 들어 올린 다음 빠른 경추 탈구로 쥐를 안락사시킵니다.
6. 데이터를 저장하고 오프라인에서 분석합니다.

결과

그림 1 : 동시 LFP 기록 절차의 다이어그램. (A) 좌우 M2에서 LFP의 생체 내 양측 기록을 위해 두개골이 노출되고 경막이 제거된 입체성 마우스. (B) 동시에 뚫린 구멍의 피질 표면과 접촉하는 두 개의 유리 미세 전극. (C) 미세 전극 및 Ag/AgCl 와이어를 적절한 위치에 배치된 기준 전극으로 기록합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
AC/DC 차동 증폭기	A-M 시스템	모델 3000
아날로그 디지털 컨버터	케임브리지 전자 디자인 회사	마이크로1401
유리 붕규산 마이크로피펫	난징 봄 교육 실험 장비 회사	161230	외경 : 1.0mm
미세 전극 풀러	나리시게	PC-10
염화나트륨	광저우 화학 시약 공장	7647-14-5
핀 미세 전극 홀더	월드 정밀 기기, INC.	MEH3SW10
스파이크2	케임브리지 전자 디자인 회사
실체현미경	자이스	435064-9020-000
입체택시 장치	RWD 생명 과학	68045
우 레 탄	시그마-알드리치	94300