Bhattarai, P., et al. 성인 제브라피시 뇌의 아밀로이드-β42 독성 및 신경 퇴행 모델링. J. Vis. 특급 (2017).
이 비디오는 알츠하이머병에서 볼 수 있는 신경 손상을 모방하여 아밀로이드 독성을 생성하기 위해 성인 제브라피쉬의 전뇌에 단량체 아밀로이드 펩타이드를 주입하는 절차를 보여줍니다
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방법 논문
아밀로이드 펩타이드 주입을 통한 제브라피시 뇌의 알츠하이머병 모델 확립
1.5K 조회수
⸱
2025년 7월 8일
이 논문에서
초록
프로토콜
1. Aβ42 펩티드의 제조
- 자동화된 고체상 펩타이드 합성기의 커플링 시약으로 표준 9-플루오레닐 메톡시카르보닐(Fmoc) 화학을 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로노ium헥사플루오르포스페이트(HBTU)와 합성하여 펩타이드(표 1 참조)를 합성합니다. 합성 스케일은 100 μmol이었다.
- 자동 펩타이드 합성기에 500mg의 Fmoc-protected 수지를 고체상으로 로드합니다(0.2mmol/g의 로딩 용량). 용존 Fmoc으로 보호된 아미노산을 필요한 부피로 0.5M의 농도로 로드하고 각 synthesizer에 대해 계산된 대로 로드합니다.
메모: 계산은 각 Fmoc으로 보호된 아미노산을 두 번 결합하고 각 구성 요소의 5배를 수지에 결합할 수 있도록 수행됩니다. - 펩타이드 합성에 필요한 시약을 디메틸포름아미드(DMF)에 용해시킵니다. 예를 들어, 0.48M, 45% v/v N-메틸모르폴린(NMM)(염기) 및 5% v/v 무수아세트산(캡핑 혼합물)의 농도로 활성제 HBTU를 준비하여 비반응 아미노기를 캡핑합니다.
- 트리플루오로아세트산(TFA): 트리이소프로필실란(TIS): 물: 90(v/v)에....
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결과
표 1: Aβ42와 TR-Aβ42 펩티드 순서.
| 펩타이드 | 펩타이드 서열 | MW (g/몰) |
| Aβ42 | DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA | 4514.1 |
| TR-Aβ42 | GWTLNSAGYLLGKINLKALAALAKKILDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA | 5919.8 |
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공개 사항
선언된 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
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| N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)육불화우로인산우로늄(HBTU) | IRIS Biotech GmbH (독일 마르크트레드비츠) | RL-1030 | 활성 |
| 옥시마 | IRIS Biotech GmbH (독일 마르크트레드비츠) | RL-1180 | Racemization 억제제 |
| N, N- 디 이소 프로필 에틸 아민 | IRIS Biotech GmbH (독일 마르크트레드비츠) | 솔-003 | 기지 |
| 디메틸포름아미드 | IRIS Biotech GmbH (독일 마르크트레드비츠) | 솔-004 | 용매 |
| N-메틸모르폴린 | Thermo Fisher (Kandel) GmbH, 독일 | A12158 | 기지 |
| 1-하이드록시벤조트리아졸 수화물(HOBT) | Sigma-Aldrich Co. LLC. (미국 미주리주 세인트루이스) | 157260 알드리치 | 활성 |
| 피페리딘 | MERCK KGaA (독일 다름슈타트) | 822299 | Fmoc 탈보호제 시약 |
| 디클로르메탄(DCM) | MERCK KGaA (독일 다름슈타트) | 106050 | 용매 |
| 포름산(FA) | MERCK KGaA (독일 다름슈타트) | 100264 | HPLC용 완충액 성분 |
| 트리플루오로아세트산(TFA) | MERCK KGaA (독일 다름슈타트) | 808260 | Clevage 혼합물 시약 |
| 트리이소프로필실란(TIS) | MERCK KGaA (독일 다름슈타트) | 233781 알드리치 | Clevage 혼합물 시약 |
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