교모세포종 쥐 모델 생성

초록

출처: Bolcaen, J., et. al., 마이크로 조사기를 사용한 교모세포종 쥐 모델의 PET 및 MRI 유도 조사. J. Vis. Exp. (2017)

이 비디오는 뇌종양을 유발하는 교모세포종 세포를 전전두엽 피질에 정위 주사하여 교모세포종 쥐 모델을 확립하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. F98 GB 쥐 세포 모델

1. Dulbecco의 변형된 Eagle Medium, 10% 송아지 혈청, 1% 페니실린, 1% 스트렙토마이신, 1% L-글루타민 및 0.1% 암포테리신 b를 사용하여 ATCC에서 얻은 F98 GB 세포를 배양하고 CO₂ 인큐베이터(5% CO₂ 및 37 °C)에 넣습니다.
2. 암컷 Fischer F344 쥐(체중 170g)의 뇌에 있는 신경교종 세포를 접종합니다.
   1. 멸균 기구를 사용하고 항상 멸균 장갑을 착용하십시오.
   2. 인슐린 주사기(1mL, 29G)로 74mg/kg 케타민과 11mg/kg 자일라진의 혼합물을 복강내(IP)로 주입하여 쥐를 마취합니다. 사지의 철수 반사에 대한 반응이 없는 것으로 마취를 확인합니다. 코와 귀에 대한 고정 지점을 사용하여 정위 장치에서 쥐를 고정시킵니다. 마취 상태에서 눈의 건조를 방지하기 위해 카보머 아이 젤을 바르십시오.
   3. 쥐를 눈높이에서 두개골 뒤쪽까지 면도하고 포비돈 요오드로 피부를 소독합니다.
   4. 2cm의 두피 정중선 절개를 통해 두개골을 노출시키고 오른쪽 전두엽 반구의 브레그마에 대해 뒤쪽 2mm, 옆으로 2.5mm의 1mm 구멍(다이아몬드 드릴)을 만듭니다.
   5. 정위 유도 인슐린 바늘(29G)을 삽입하고 마이크로 주사기 펌프 컨트롤러(설정: 주입(I50), 속도 1nL/s(001 SDN))를 사용하여 5μL 세포 현탁액(20,000 F98GB 세포)을 3mm 깊이로 주입합니다.
   6. 주사기를 천천히 빼내고 뼈 왁스로 절개 부위를 닫습니다. 피부를 봉합하고 포비돈 요오드로 소독한다.
   7. 빨간 램프를 사용하여 수술 후 동물의 체온을 안정화합니다. 쥐가 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 쥐가 깨어 있는지 모니터링합니다. 완전히 회복될 때까지 동물을 다른 동물과 함께 반납하지 마십시오. 모든 동물을 환경적으로 통제된 조건(12시간 정상 명암 주기, 20-24°C, 40-70% 상대 습도)에서 음식과 물을 자유롭게 제공하십시오. 동물의 체중, 음식, 수분 섭취량, 활동 및 정상적인 행동을 모니터링하여 동물을 면밀히 따르십시오. 체중이 20% 감소하는 것이 관찰되거나 정상적인 행동이 심각하게 악화되는 경우(예: 그루밍 부족) 동물을 안락사시키기 위해 치사량의 펜토바르비탈 나트륨(160mg/kg)을 사용합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
GB RAT model
F98 교모세포종 세포주	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
입체 프레임	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame
Diamond drill	Velleman	vthd02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
뼈 왁스	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
인슐린 주사기 Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19mm