외상성 뇌손상의 마우스 모델에서 비강내 중간엽 줄기 세포 전달

초록

출처: Shahror, RA et. al., 외상성 뇌손상 쥐 모델에서 비강내 전달 후 MRI를 사용하여 초상자성 산화철 표지 중간엽 줄기 세포 추적. J. Vis. 경험. (2019년)

이 비디오는 마우스 모델에서 비강내 중간엽 줄기 세포(MSC) 전달을 보여줍니다. 중간엽 줄기세포는 비강 조직에 흡수되어 사이토카인 신호를 통해 뇌로 이동하며 손상 부위에서 신경영양 인자를 분비하여 신경 복구를 위한 신경 치료 가능성을 제공합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 초상자성 산화철(SPIO) 나노입자로 중간엽 줄기 세포(MSC)를 표지

하기

1. 위해 6mL의 표지 배지(태아 소 혈청(FBS)가 없는 Dulbecco의 변형 이글 배지(DMEM)에 25μg/mL의 SPIO)를 중간엽 줄기세포(80% 합류)가 포함된 T75 플라스크에 추가합니다.
2. 흔들지 않고 CO₂ 인큐베이터 (37 °C, 5 % CO₂)에서 라벨링 배지와 함께 세포를 배양합니다. 24시간 후, 진공 장치에 플라스틱 팁이 부착된 멸균 파스퇴르 피펫을 사용하여 라벨링 매체를 부드럽게 제거합니다. 6mL의 인산염 완충 식염수(PBS)로 세포를 단층으로 2배 세척하여 내재되지 않은 SPIO의 흔적을 제거합니다.
   1. 세포가 성공적으로 라벨링되었는지 확인하려면 SPIO가 형광단으로 태그가 지정된 경우 형광 현미경 또는 공초점 현미경으로 라벨링된 세포를 확인하십시오(즉, 여기에 사용된 것과 같이; 그림 1B, C).
3. 3mL의 트립신으로 처리하여 부착 세포를 수확하고 37°C에서 배양합니....

결과

그림 1: 프로토콜의 개략적인 순서도 및 MSC에 의한 SPIO 흡수의 시험관 내 확인. (A) MSC를 라벨링을 위해 SPIO와 함께 24시간 동안 배양했습니다. 그런 다음 표지된 MSC를 비강내(IN) 경로를 통해 TBI 마우스 모델로 전달했습니다. 표지된 중간엽 줄기세포를 추적하기 위해 서로 다른 시점에서 MRI를 수행했습니다. SPIO 나노입자가 FITC로 태그되었기 때문에 SPIO에 의한 중간엽 줄기세포의 충분한 표지는 (B) 형광 현미경 및 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
세포 배양 용품(플라스틱)	ThermoFisher Scientific	다양	소스로 교체 가능
일회용 마이크로톰 블레이드	VWR	95057-832
D-MEM/F-12 (1X) with GlutaMAX	GIBCO	10565-018
동결 조직 표본용 포매 배지(O.C.T.)	사쿠라 파인텍	4583
소 태아 혈청(FBS)	GIBCO	12662-029
형광 야생 현미경	올림푸스	올림푸스 BX43
겸자	파인 사이언스 도구	11293-00	수술용
겐타마이신(10mg/mL)	GIBCO	15710-064
이발기	애완동물 클럽	PC-400
두부 외상 타박상 장치	정밀 시스템 및 계측	모델 TBI-0310
소 고환의 히알루로니다제	MilliporeSigma	H3506
케타민(Ketavet)	화이자	778-551
마우스	국립 실험 동물 센터, 대만	C57BL6	사용되는 야생형 마우스 균주 연구
Microdrill	Nakanishi	NE50	뼈 창 생성을 위한 버와 결합
톰	라이카	RM2265
마우스(C57BL/6) 중간엽 줄기세포	GIBCO	S1502-100
MRI 스캐너	Bruker Biospec
인산염 완충액 식염수(PBS)	Corning Cellgro/ThermoFisher	21-031-CV
포비돈 요오드 7.5%	퍼듀 제품 LP		수술용 스크럽
가위	정밀 과학 도구	14084-08	수술
정위 프레임	Kopf Instruments	모델 900
초상자성 산화철(SPIO) 나노 입자	BioPAL	Molday ION EverGreen, CL-50Q02-6A-51	을 사용한 생체 내 추적을 위한 줄기 세포 라벨링
			봉합사
타이머	Wisewind		모든 소스로 교체 가능
TrypLE	GIBCO	12604-013
자일라진(롬푼)	바이엘	QN05 cm92

모든 에 마이크로 MRI 봉합사 모노필라멘트 Ethicon G697