코에서 뇌로 약물 전달을 위한 피펫 및 역캐뉼라 삽입을 통한 마우스의 비강내 약물 투여

초록

출처: Kanazawa, T., et al. 코에서 뇌로 약물 전달을 평가하기 위한 흡입 마취 하에 비강내 투여를 위한 새로운 방법. J. Vis. 경험. (2018년)

이 비디오는 코에서 뇌로 약물 전달을 달성하기 위해 마취된 마우스에 방사성 표지 약물을 비강내 투여하는 방법을 보여줍니다. 약물이 비강 상피를 통과하고 신경 경로를 통해 뇌에 도달하는 방법과 모양체 운동이 약물 보유 및 제거에 어떤 영향을 미치는지 설명합니다. 또한 비디오에서는 식도를 통해 캐뉼라를 삽입하여 모양체 운동에 반대하여 약물을 전달하고 유지력을 높이고 수송 효율성을 향상시키는 대체 역 캐뉼라 삽입 방법에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 흡입 마취 하에 비강내 투여에 사용되는 동물

1. 실험용 마우스를 12시간의 빛/암흑 주기(오전 8:00-오후 8:00)에 따라 스테인리스 스틸 케이지에 수용하고, 온도는 23 ± 1°C, 습도 50% ± 10%로 유지되며 음식과 물에 대한 임의의 접근
.
2. 실험 전에, 4% 농도로 개시 한 후 2% 이소플루란의 흡입을 통해 마우스를 마취합니다. 표면 교정의 소실을 확인하여 필요한 마취 수준을 확인합니다.

2. 투여액의 준비

[

1. ¹⁴C]-이눌린(마우스당 50 μM, 마우스당 0.5 μCi/mL)의 투여 용액을 인산염 완충 식염수에 희석하여 제조하고, 사용할 때까지 4°C에서 보관한다.

3.

1. 일시적으로 열 수 있는 흡입 마스크를 사용한 마우스 마이크로피펫 방법에 대한 비강내 투여(그림 1)
   1. 2% 이소플루란으로 흡입 마취 하에 사지를 테이프로 붙여 코르크판에 누운 자세로 마우스를 고정합니다(그림 1A).
   2. 마우스가 흡입 마취 하에 고정되는 동안 왼쪽 및 오른쪽 콧구멍에 번갈아 투여되는 1 내지 2μL 용량을 통해 30초 간격으로 각 마우스에 총 부피의 25μL 투여 용액을 투여합니다(그림 1B 및 C).
   3. 참고: 폐마취 가스는 마스크를 열 때 능동 수단(연기, 경질 덕트 생물 안전 캐비닛, 진공 등)으로 청소되고 닫을 때 수동 수단(폐 마취 가스 캐니스터)으로
청소됩니다.
2. 기도 측에서 식도를 통한 역캐뉼라 삽입 방법(그림 2)
   2
   1. % 이소플루란으로 흡입 마취 하에 팔다리를 테이프로 붙여 코르크판에 누운 자세로 마우스를 고정합니다.
   2. 목의 털은 베타딘 또는 클로르헥시딘을 도포하여 면도하고 준비한 다음 알코올로 헹굽니다.
   가
   3. 위로 작은 절개(1.5cm)를 한 후 집게로 목구멍 아래 피부를 확장하여 기관과 식도를 노출시킵니다.
   가
   4. 위를 사용하여 기관에 절개(1mm)를 합니다.
   5. 캐뉼라(내경: 0.58mm, 외경: 0.965mm)를 1.2cm 길이로 삽입하고 캐뉼라의 반대쪽 끝을 흡입 마스크 안쪽에 부착합니다.
   가
   6. 위를 이용하여 식도를 절개(1mm)하고 캐뉼라(내경: 0.28mm, 외경: 0.61mm)를 비강 후방 쪽으로 1.4cm 길이로 삽입하고 결찰합니다(그림 2A 및 B). 참고: 절차 3.2.2 내지 3.2.4는 ×10 배율의 입체 현미경으로 수행되었습니다.
   7. 투여액이 채워진 1mL 주사기에 바늘(27G × 1/2)을 부착하고 프로그래밍 가능한 마이크로 주사기 펌프에 연결합니다.
   8. 위의 바늘을 3.2.5에서 식도에 삽입된 캐뉼라에 연결합니다(그림 2C).
   9. 총 부피 25μL[^14C]-이눌린 용액을 일정한 속도(5μL/min)로 투여합니다(그림 2C 및 2D).

결과

그림 1: 일시적으로 열 수 있는 흡입 마스크와 함께 마이크로피펫을 사용한 비강내 투여. 투여 전 닫힌 마스크를 착용한 고정된 마우스 (A), (B) 클로즈업, (C) 피펫을 사용하여 비강내 투여 중 열린 마스크의 전체 모습을 보여주는 사진.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
ddY 마우스 일본	SLC, Inc.		남성, 4-6주, 20-30g
이소플루란	화이자	v002139
이소플루란 셋업	SHINANO manufacturing CO., LTD.	SN-487-OTAir, SN-489-4
이소플루란 마스크	SHINANO 제조 주식회사		소형 설치류용
소플루란 마스크(Opneable 타입)	SHINANO 제조 주식회사		특별 주문
마취 박스	SHINANO 제조 주식회사	SN-487-85-02
동물 실험 가위-1	나츠메 제작소 주식회사	B-27H
동물 실험 가위-2	나츠메 제작소 주식회사	B-13H
핀셋-1	파인 사이언스 툴즈 주식회사	11272-30	Dumont #7 Dumoxel
핀셋-2	NATSUME SEISAKUSHO CO., LTD.	A-12-1
캐뉼라 튜브(PE-50)	Becton, Dickinson and Company.	5069773	내경: 0.58mm, 외경: 0.965mm
캐뉼라 튜브(SP-10)	나츠메 제작소 주식회사	KN-392	I.D.: 0.28 mm, O.D.: 0.61 mm
면도기	MARUKAN, LTD.	DC-381
실체 현미경	올림푸스 주식회사	SZ61
바늘 27G 1/2 in 13mm	테루모 주식회사	NN-2738R
1mL 주사기	테루모 주식회사	SS-01T
주사기 펌프	신경 과학	NE-1000
마이크로 주걱	즈 아키라 주식회사	91-0088
마이크로피펫(0.5-10uL)	Eppendorf AG	Z368083
피펫 칩	Eppendorf AG	0030 000.811
테이프	TimeMed 라벨링 시스템, Inc.	T-534-R	마우스 고정용
[¹⁴C]-Inulin	American Radiolabeled Chemicals Inc.	ARC0124A	0.1 mCi/mL
EtOH	Wako Pure Chemical Industries, Ltd.	054-00461

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