유도만능줄기세포 유래 인간 미세아교세포를 마우스 뇌로 경비강 이식

초록

출처: Parajuli, B., et.al. 비침습적 경비강 경로를 통한 면역 적격 마우스 뇌에 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 미세아교세포의 이식. J. Vis. 경험. (2022).

이 비디오는 유도 만능 줄기 세포 유래 인간 미세아교세포(iPSMG) 세포를 마우스 뇌로 경비강 이식하는 방법을 보여줍니다. 히알루로니다아제는 미세아교세포가 고갈된 마우스의 콧구멍에 적용되어 투과성을 향상시킵니다. iPSMG 현탁액을 비강 내로 투여하고 마우스를 회복시킵니다. 성장 인자가 풍부한 배지는 뇌 조직에서 iPSMG 생존을 지원하기 위해 정기적으로 투여됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포 배지, 이식 배지 및 마취 혼합물의 준비

1. Dulbecco의 변형 이글 배지(DMEM)에 10% 소태아 혈청과 0.1% 페니실린/스트렙토마이신을 첨가하여 세포 배지를 준비합니다.
2. 인간 콜로니 자극 인자 1 또는 hCSF1(250ng/mL) 및 인간 형질전환 성장 인자 베타 1 또는 hTGF-β1(100ng/mL)을 세포 배지에 첨가하여 이식 배지를 준비합니다.
생
3. 리 식염수 11.8mL에 메데토미딘 염산염 0.45mL, 미다졸람 1.2mL, 타르타르산부토르파놀 1.5mL를 혼합하여 복강내 주사용 마취 혼합물을 준비합니다.

2. 유도만능줄기세포 유래 인간미세아교세포(iPSMG) 세포의 제조

참고: 냉동 iPSMG(Table of Materials)는 사용할 때까지 -80°C에서 보관하였다.

1. 37°C 수조에서 냉동 세포를 빠르게 해동합니다. 눈에 보이는 모든 얼음이 녹을 때까지 샘플을 소용돌이칩니다.
2. 해동된 유도만능줄기세포 유래 인간 미세아교세포(iPSMG)를 37°C로 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)	Thermo Fisher Scientific	10566
AIN 93G	Oriental Yeast Co
소 태아 혈청	GE Healthcare Life Sciences	SH30070.03
냉동 iPSMG	시오노기 &., 주식회사		약 발견 및 질병 연구 연구소
인간 콜로니 자극 인자 1(hCSF1)	PeproTech	300-25
히알루로니다제	Sigma-Aldrich	H-3506
메데토미딘 염산	메이지 세이카	VETLI5
미다졸람	아스텔라스	18005A2
파라포름알데히드	와코 순수 화학 산업	162-16065
페니실린/스트렙토마이신	써모 피셔 사이언티픽	15140-122
피펫	에펜도르프	3120000011
펫 팁	에펜도르프	30076028
PLX5622	Amadis Chemical	A930097
형질전환 성장 인자-β1(Tgf-b1)	PeproTech	100-21

신염 피