쥐 모델에서 재조합 아데노 관련 바이러스 벡터의 정맥 투여

초록

출처: Grames, MS, et al. 쥐에게 아데노 관련 바이러스의 정맥 투여 방법 및 팁 및 중추신경계 형질도입 평가. J. Vis. 경험. (2017년)

이 비디오는 쥐에서 재조합 아데노 관련 바이러스(AAV)의 꼬리 정맥 주사를 보여줍니다. 외측 꼬리 정맥에 주입된 후 바이러스는 혈류로 들어가 심장을 순환한 후 뇌에 도달하여 뉴런으로 들어가 신경 치료 응용을 위한 표적 단백질 생산을 촉진합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. rat

산
1. 소를 최대 1L/min으로 돌리고 이소플루란 마취를 5%로 설정합니다. 모든 연결 호스와 마개 방향을 확인하여 가스 마취가 유도 챔버로 흐르고 있는지 확인하십시오.
2. 쥐가 반응하지 않을 때까지 약 3분 동안 가스 마취 유도실에 쥐를 넣습니다.
3. 발가락을 꼬집어 적절한 마취 깊이를 보장합니다. 발가락을 꼬집은 후 발이나 다리에 움직임이 없어야 합니다.
4. 유지 관리를 위해 이소플루란 마취를 2%로 줄이고 마취가 마취 마스크로 흐르도록 마개를 조정합니다.
5. 쥐의 코를 마취 마스크에 넣고 쥐가 옆으로 눕도록 조정합니다.
6. 측면 꼬리 정맥을 식별하십시오.
   참고: 측면 꼬리 정맥은 약 10시와 2시 방향에 있으며 꼬리의 등쪽 상단은 12시 방향에 있습니다. 쥐가 옆으로 누워 있는 상태에서 측면 꼬리 정맥이 위를 향해야 합니다.
7. 알코올 준비 패드로 주사 부위를 닦습니다. 주사 부위는 꼬리 길이의 3분의 2 아래에 있습니다.

2. vector

측면
1. 꼬리 정맥 바로 위에 한 손가락으로 주입 영역 약간 위의 꼬리를 단단히 잡으면 정맥이 확장됩니다.
2. 베벨이 위를 향하도록 바늘을 보이는 꼬리 정맥과 같은 방향으로 정렬합니다.
3. 다른 손이 꼬리를 잡고 꼬리 정맥을 누르지 않도록 각별히 주의하면서 꼬리 정맥 위의 피부를 뚫습니다.
4. 정상적인 혈류를 허용하기 위해 꼬리 정맥의 압력을 해제합니다.
5. 바늘을 정맥으로 옮깁니다. 바늘이 꼬리 정맥에 구멍을 뚫었는지 확인하려면 플런저를 약간 뒤로 당깁니다. 바늘이 정맥에 있으면 혈액이 바늘로 흘러 들어갑니다.
   1. 필요에 따라 바늘의 위치를 변경합니다. 그런 다음 바늘을 안정시키려면 주사 부위 위의 손을 주사 부위 아래로 이동하고 주사기 끝을 꼬리에 대고 있습니다.
6. 벡터를 꼬리에 천천히 주입합니다(약 20μL/s).
   참고: 벡터가 정맥을 통과할 때 정맥의 색상이 손실될 수 있습니다. 용액이 정맥 외부로 주입되었다는 징후로는 물돌, 피부가 희게 되거나 벡터를 주입할 때 저항이 있습니다. 연습을 통해 혈관 외 노출을 최소화할 수 있습니다.
7. 벡터를 투여한 후, 쥐에게서 바늘을 제거하고 거즈 패드를 주사 부위에 대고 눌러 30 - 60초 동안 출혈을 멈추도록 돕습니다.

3. 청소

1. : 이소플루란 마취와 산소를 끕니다. 쥐가 의식을 되찾을 때까지 모니터링한 다음 새장으로 돌려보내십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1mL 주사기	BD	309626	25g 바늘이 부착된 상태로 제공됩니다. 주사용 바늘 27-30g 바늘로 교체
30g 바늘		305106
이소플루란	피라말 헬스케어	66794-013-25	이소플루란 USP 250mL
마취 마스크	Kopf Instruments	906
거즈	Henry Schein	100-2524	2" x 2" (5 cm x 5 cm)
가스 마취 기화기	SurgiVet	4214322	클래식 T3
가스 마취 제거제	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
가열 패드	Sears	17280
70% 에탄올	Decon Laboratories, Inc.	2401	140 프루프
70% 이소프로판올	VWR	89108-160

BD