메추라기 - 병아리 키메라 배아에서 조류 신경 능선 세포의 마이 그 레이션 및 최종 운명을 분석을위한 접근 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 unmanipulated 여자의 배아 내에 구별하기 어렵습니다 별도로 마이 그 레이션과 차별화하는 동안 신경 능선 세포를 추적하는 단순하고 간단 기법입니다.
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이 논문에서
요약
초록
조류 배아는 난자 내에서 배아의 쉬운 접근으로 인해 많은 척추 발달 과정을 연구하기위한 독특한 플랫폼을 제공합니다. 메추라기의 공여 조직을 비켜에서 여자의 배아에 이식되는 배아 키메라 조류는 조류 배아에 의해 수여 조작의 용이성과 세포 인구의 씻을 수없는 유전 라벨의 파워를 결합.
메추리 - 여자는 chimeras 1-3 철새 신경 능선 세포 (NCCs)를 추적하는 고전적인 도구입니다. NCCs는 개발 신경 튜브 4 지느러미 지역에서 발생한 배아에서 세포의 과도 철새 인구입니다. 그들은 mesenchymal 전환으로 상피를 받아야하고 이후 그들이 연골 5-13, melanocytes 11,14-20, 뉴런과 glia 21-32 등 다양한 세포 유형으로 차별 배아의 다른 지역으로 마이 그 레이션. NCCs는 multipotent 있으며, 그들의 궁극적인 운명은 influ입니다1) 그들은 배아 11,33-37, 2 rostro - 꼬리 축을 따라 발생한하는 신경 튜브 지역) 그들은 38-44을 마이 그 레이션으로 인접 세포로부터 신호를, 그들의 궁극 3) microenvironment에 의해 enced 배아 45,46 이내 도착. 배아 내에서 그들의 최종 위치와 운명에, 신경 튜브의 원산지 그들의 관점에서 이러한 세포를 추적, patterning 및 organogenesis 조절 발달 과정에 중요한 통찰력을 제공합니다.
기증자 신경 튜브 (접목 homotopic) 또는 기증자 신경 튜브 (접목 heterotopic)의 다른 지역의 상호 보완적인 지역의 이식은 rostro - 꼬리 축 2,47 함께 NCCs 사전 사양의 차이를 밝힐 수 있습니다. 이 기술은 더 이상 한쪽은 기증자의 조직에서 파생되는 이러한 신경 튜브의 일방적인 구획을 이식하기 위해 적응하고, contralateral 사이드 유적 호스트 배아, 이순신에 교란되지 않은 수동일한 샘플 2,47 내에서 내부 통제를 elding. 앞부분은 신경 튜브 47 폐쇄되면 또한, HH10 후, 나중에 태아의 뇌 세그먼트의 이식을위한 적응하실 수 있습니다.
여기 신경 튜브의 이산 세그먼트에서 파생된 철새 NCCs의 추적을 허용 신경 튜브 이식를 통해 메추라기 - 여자는 chimeras 창출을위한 기술을보고합니다. 메추라기 특정 QCPN 항체 48-56 가진 기증자 파생 세포의 종 특정 레이블은 연구자가 실험 종료 시점에서 기증자와 호스트 세포를 구별할 수 있습니다. 이 기술은 저렴, 간단하고, 운명 - 매핑, 추적 세포 혈통, 그리고 rostro - 꼬리 축을 따라 45 미리 patterning 이벤트를 식별하는 등 많은 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 때문에 조류 배아에 대한 접근의 용이성으로 인해 메추라기 - 여자 그래프트 기술을 포함한 다른 조작, 결합 수 있지만 렌즈 절제 4 국한되지0, 배아의 발달 프로그램의 perturbations에 NCCs의 특정 철새 스트림의 반응을 파악하기위한 억제 분자 57,58, 또는 표현 plasmids 59-61의 electroporation을 통해 유전자 조작의 주입. 또한이 접목 기술은 또한 조류 배아의 조작의 용이성과 함께 마우스 유전학의 전원을 결합하는 craniofacial morphogenesis, 또는 마우스 여자는 chimeras에 NCC의 공헌을 공부하고 같은 메추라기 - 오리 chimeras 등 다른 이종 간의 키메라 배아를 생성하는 데 사용할 수 있습니다 . 62
프로토콜
1. 원하는 단계까지 품어 병아리와 메추라기 달걀
HH9 배아 들어, 일반적인 배양 시간은 38 ° C. 63시 29~33시간 이르기까지 다양
- 미지근한 물로 달걀에서 모든 파편을 씻으십시오.
- 수평 트레이에있는 닭 계란을 마련. 연필 함께 직면하고있는 측면을 선택,이 배아는 현지 예정 지역에 해당됩니다. 메추라기 알을 뭉툭한 끝을 품어.
- 38 장소 ° C humidified 인큐베이터. 기능 락을를 켭니다.
2. 윈도우 및 해부를 위해 계란을 준비
- 인큐베이터에서 알을 제거하고, 70 % 에탄올로 정상을 소독. 그것은 에탄올에 뿌리와 달걀 껍질을 통해 에탄올의 흡수를 방지하기 위해 종이 타월이나 Kimwipe로 빨리 닦아 것이 가장 좋습니다.
- 개별 계란 홀더 (우리가 접힌 종이 타올이 줄지어 페트리 접시, 예를 들어, "Kimwipes"를 사용)쪽으로 장소 닭 달걀. AA의 포셉 사용하여 작은 홀 탭계란의 뾰족한 끝에 달걀 껍질의 위쪽 표면에 전자.
- 18시 G 피하 바늘 5 ML의 주사기와 닭고기 달걀의 알부민 빛의 1.5-3mL를 제거합니다. 그것은 ....
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토론
호스트 여자는 배아에 메추라기 신경 튜브 접목은 rostro - 꼬리 축 21,67-69 따라 여러 지역에서 냄새가 나는데 NCCs 마이 그 레이션의 특정 subpopulations를 추적을위한 간단하고 저렴한 기술이다 여기에서 설명한. 이 기술은 실험적으로 검토하기 위해, 조류 배아 (같은 포유류의 배아에 비해)에 대한 접근의 용이성 활용과 같은 표현 plasmids의 electroporation을 통해 조직 절제, 억제 분자의 주입, 또는 유전자 조작과 같은 다른 기술과 결합 수 있습니다 배아 47,69 내에서 서로 다른 발달 단서에 대한 구체적인 철새 NCC의 인구의 반응.
메추리 - 여자는 chimeras는 NCC 마이 그 레이션과 차별을 조사하고,이 기술은 신경 튜브 이외의 다른 조직의 이식을 포함하도록 적응 수를위한 강력한 도구입니다. 여자의 배아에 메추라기 조직 이식하는 것은 물론 창업 techniqu입니다신경 튜브의 작은 .......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
저자는 원고의 비판에 대한 Lwigale 실험실의 구성원 감사드립니다. SLG는 국립 안과 연구소 (F32 EY02167301)에서 루스 L. Kirschstein NRSA 원정대에 의해 지원됩니다. PYL은 국립 안과 연구소 (EY018050)에 의해 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 칙 달걀 | 종합 - 우리는 텍사스 A & M 대학의 가금류 과학학과, TX를 사용합니다. | ||
| 메추리의 계란 | 종합 - 우리는 Ozarks 에그 회사, MO를 사용합니다. | ||
| 에그 인큐베이터 (디지털 판독 1,502 운동가 인큐베이터 W / 습도 110-120 볼트 AC) | www.poultrysupply.com | 1502 | |
| 뒤몽 AA 포셉, Inox 에폭시 코팅 | 파인 과학 도구 | 11210-10 | |
| 스카치 테이프 | 어떤 사무실 공급 가게 | ||
| 곡선 아이리스 포셉 | 파인 과학 도구 | 11065-07 | |
| 나ndia 잉크 | 다른 예술 공급 가게 | ||
| 펜 / Strep (페니실린, 스트렙토 마이신) 솔루션 | VWR 인터내셔널 | 101447-068 | |
| 투명 포장 테이프 | 어떤 사무실 공급 가게 | ||
| 니들 당기는 장치 | Narashige, 일본 | PE-21 | |
| 아이고, 유리 바늘, 1.5-1.8 X 100mm borosilicate 유리 모세관 튜브로 만든 | 킴블의 추격 | 34,500 99 | |
| 5에서 만든 유리 피펫, 압니다 "파스퇴르 피펫을 뽑아 | 피셔 과학 | 13-678-6A | |
| 구강 피펫 장치 (보정 microcapillary 피펫을위한 흡인기 튜브 조립체) | 시그마 - 올드 리치 | A5177-52A | |
| 뒤몽 # 5 포셉 | 파인 과학 도구 | 11251-30 | |
| 용량 단위gsten 와이어, 0.1mm 직경 | VWR 인터내셔널 | AA10404-H2 | |
| 니들 홀더 (니켈 도금 핀 홀더) | 파인 과학 도구 | 26018-17 | |
| QCPN 항혈청 | 발달 연구 하이 브리 도마 은행, 아이오와 대학교 | QCPN | |
| 알렉사 형석 이차 항체 (예, 알렉사 형석 594 염소 항 마우스 IgG1) | Invitrogen | A21125 | |
울리는의 솔루션 (2L) :
| 피셔 과학의 모든 시약 |
|
참고문헌
- Le Douarin, G., Renaud, D. Morphologic and physiologic study of the differentiation in vitro of quail embryo precardial mesoderm. Bull. Biol. Fr. Belg. 103 (3), 453-468 (1969).
- Teillet, M. A., Ziller, C., Le Douarin, N. M. Quail-chick chimeras. Methods. Mol. Biol.
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