Macrophages는 항상성의 중심 역할을하고 여러 조직의 병리. 여기에 제시된 프로토콜은 macrophages를 파괴하는 방법을 설명합니다 생체내에서, 골수 aspirates에서 편광 macrophages를 파생하고 adoptively 생쥐에 macrophages를 전송. 이 기술은 편광 macrophages 건강과 질병에서 재생하는 역할의 결정을 허용합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Macrophages는 타고난 면역 반응을 시작하고 후천성 면역 반응을 지시 전염성 도전이나 부상으로 타고난 면역 반응에서 중요한 선수입니다. 대식 세포 기능 장애는 적절한 면역 반응을 마운트 무능력으로 이어질 수 있으며, 같은, 염증성 장 질환 등 많은 질병 프로세스에 연루되었습니다. Macrophages는 크게 두 가지 범주로 나누어집니다 편광 phenotypes를 표시합니다. 고전 활성화 macrophages는 IFNγ 또는 LPS로 자극에 의해 활성화, 해상도 또는 활성화 macrophages 반면, IL-4 또는 IL-13에 의해 활성화, 소기 파편과 조직 리모델링에 참여하고 연루되어 세균의 도전에 대한 응답으로 중요한 역할을 염증의 위상. 생체내의 염증 반응 동안, macrophages는 면역 세포를 침투의 복잡한 혼합물 속에서 발견되고 exacerbating 또는 resolvin으로 참여할 수g 걸렸다. 전체 동물 모델에서 현장에서 macrophages의 역할을 정의하려면, 그것은 복잡한 환경에서 macrophages을 파괴의 효과를 조사할 필요가 있습니다. 현장에서 대식 세포의 표현형의 역할에 관한 질문을하려면 phenotypically 정의된 편광 macrophages는 골수 aspirates에서, 전직 생체내를 얻을 수와 함께 또는 macrophages의 사전 파괴하지 않고, 다시 생쥐로 추가했습니다. 프로토콜에서 clodronate 함유 liposomes 여기를 제시, 대 PBS 주입 제어, dextran 나트륨 황산 (DSS) 유발 생쥐의 대장염 동안 colonic macrophages를 고갈하는 데 사용되었다. 또한, 편광 macrophages는 전직 생체내를 파생되었으며 정맥 주사에 의해 생쥐로 전학 왔어. 이 방법에 주의해야 할 점은 그 clodronate 함유 liposomes 너무 고갈에 의해 관찰 효과는 대식 세포 관련, reconstitution O한지 돌기 세포 및 macrophages 모두를 포함한 모든 전문 phagocytes을 고갈이다macrophages의 입양 전송에 의한 F의 표현형이 필요합니다. 생쥐의 조직 대식 세포 고갈도 CD11b-DTR 배경에 backcrossing 마우스에 의해 달성될 수있는이 훌륭한 보완적인 접근 방법입니다. clodronate 함유 리포좀-매개 고갈의 장점은 backcrossing 마우스에 관련된 시간과 비용을 요구하지 않으며 그것에 관계없이 생쥐 (C57BL / 6, BALB / C, 또는 혼합된 배경의 배경 생쥐에서 사용될 수있다는 것입니다 ).
프로토콜
1. Clodronate 함유 Liposomes 이용 파괴 Macrophages
- Liposomes는 4 ° C.에 저장됩니다 두 시간 전에 주사로, 그들은 상온 (18 ° C)에 적응하도록 냉장고에서 clodronate 함유 liposomes, PBS 함유 liposomes, 또는 무균 PBS (분사 제어)를 제거하십시오.
- 1 ML의 주사기에 200 μl를로드하기 전에도 유통을 보장하기 위해 liposomes에게 8-10 번 들어있는 튜브를 반전. 주사기의 상단에 26 게이지 바늘을 연결합니다.
- 단지 아기의 머리와 사지를 고정하기 위해 충분한 피부를 잡고 귀를 아래 왼손, 비듬에게 마우스를 사용합니다.
- 내부 장기가 복부의 오른쪽 아래 사분면에 위치하고 있으며 주사 사이트에서 떨어져 움직일 수 있도록 아기의 머리가 땅에 향해 약간 수 있도록 마우스를 기울이십시오.
- 손바닥 사이에 주사기를 올리고 사출에 고르게 이전 리포좀 솔루션을 배포하는 데 그것을 6 회로 바꾸란. <리> 30-40도 각도에서 마우스 복부 하단 오른쪽에 바늘을 삽입합니다. 리포좀 용액 또는 PBS 200 μl를 주입.
- 유도된 염증 모델 중에는 DSS 유도된 대장염처럼 처음 침투 macrophages를 고갈하....
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토론
Macrophages가 면역 체계에 중요한 역할을 phagocytic 세포입니다. 그들은 타고난 면역 반응을 시작하고 후천성 면역 응답을 감독 책임이 있습니다. 일반적으로 고전적인 활성화 macrophages는 IFNγ 또는 LPS에 의해 활성화하고 병원균을 제거하고 염증 반응 1을 장착 책임이 있습니다. 반대로, 또는 활성 macrophages는 IL-4 또는 IL-13에 의해 활성화되고 염증 1 해상도 동안 소기 파편의 역할과 조직 리모델링을 재생합니다. 뱃속에있는 전문 macrophages는 bactericidal 활동을 유지하지만 프로 염증 반응 2를 탑재하지 않습니다. 유익한 식물 및 식품 항원이 관용은 소재의 통관을 허용 그 위반 부적 절한 잠재적으로 병적인 면역 반응 3 시작하지 않고 상피 장벽. 이소성 colonic 대식 세포 기능 기여할 수염증성 장 질환, 과민성 대장 증후군 및 대장암 3-5 포함한 병리 학적 조.......
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공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
이 작품은 Gastroenterology / 캐나다 보건 연구 / Crohn 's의 협회 및 캐나다의 새로운 탐정 수상의 대장염 재단의 캐나다 협회에서 지원하는 LMS에 Crohn의과 캐나다의 대장염 재단에서'연구 보조의 부여 '에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| Clodronate 함유 liposomes | Clodronateliposomes.org | ||
| PBS 함유 liposomes | Clodronateliposomes.org | ||
| 멸균 PBS pH7.4 | Invitrogen | 14,190 | |
| IMDM | Invitrogen | 12,440 | |
| 소태아 세럼 (FCS) | Invitrogen | 12,483 | |
| 초산 | BDH Aristar | BDH3092-500MLP | |
| Monothioglycerol (MTG) | 시그마 | 96-275 | |
| Recombinant murine MCSF | Stemcell 기술 | 02,951 | |
| GM-CSF 재조합 murine | Stemcell 기술 | 02,935 | |
| 재조합 murine IL-3 | Stemcell 기술 | 02,903 | |
| 재조합 murine IFNγ | Stemcell 기술 | 02,746 | |
| 재조합 murine IL-4 | Stemcell 기술 | 02,714 | |
| 세포 분리 버퍼 | Invitrogen | 13150-016 | |
| anti-F4/80 항체를 밀고 | AbD Serotec | MCA497GA | |
| 마우스 방지 ArgI 항체 | BD의 형질 도입 연구소 | 610,708 |
표 1.이 프로토콜에서 사용되는 특정 시약.
참고문헌
- Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).
- Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance. <....
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재인쇄 및 허가
