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방법 논문

실험실 규모의 합성 거미의 실크 생산

27.6K 조회수

DOI:

10.3791/4191

2012년 7월 18일

이 논문에서

요약

거미 실크 옷의 뛰어난 기계적 및 생화 학적 특성에도 불구하고,이 재료는 종래의 방법으로 대량 수확 할 수 없습니다. 여기 차세대 biomaterials 같은 거미 실크의 생산과 사용을 공부 수사관을위한 중요한 과정입니다 인공 거미 실크 섬유를 스핀하는 효율적인 전략을 설명합니다.

초록

사회가 진행하고 자원 scarcer되기 때문에, 새로운 기술을 육성하는 것이 점차 중요 해지고 고성능 특성을 가진 엔지니어 차세대 biomaterials니다. 이러한 새로운 구조 재료의 개발 비용 효율, 빠른이어야하며 처리 방법과 환경 친화적이고 지속 가능한 제품을 포함해야합니다. 거미는 biomimicry 그 라이벌 최고의 인조 및 천연 재료를위한 차세대 엔지니어링 재료의 풍부한 소스를 제공하고, 다양한 기계적 특성과 서로 다른 파이버 유형의 수많은 스핀. 자연 거미 실크의 대량의 컬렉션 허무이기 때문에, 합성 실크 생산이 스레드의 무제한 공급에 대한 액세스와 과학자를 제공할 수있는 능력을 가지고 있습니다. 스피닝 프로세스가 간편하고 완벽하게 될 수 있습니다 따라서, 인공 거미 섬유 갑옷에서부터 애플 리케이션의 광범위한, 수술 봉합에 대한 잠재적인 사용을초, 로프 및 케이블, 타이어, 악기를위한 문자열, 그리고 항공 및 우주 항공 기술에 대한 복합 재료. 합성 실크 생산 과정을 진행하고 회전하는 스핀에서 그들의 물질적 속성에서 낮은 편차를 표시할 수 섬유를 양보하기 위해, 우리는 박테리아, 정화 및 단백질의 농도에서 재조합 거미 실크 단백질의 표현을 통합 젖어도 회전하는 프로토콜을 개발 , 섬유 압출 및 기계적 이후 스핀 치료로 따라갔다. 이것은 실험실 규모의 인조 실크 섬유를 돌려서 분석 단계별 프로세스를 보여 최초의 시각적 표현이다. 또한 동일한 회전 마약에서 냈지 섬유 간의 다양성의 도입을 최소화하기 위해 세부 사항을 제공합니다. 이하 이러한 방법은 자연 거미 실크 옷을 능가하는 높은 품질의 섬유로 이어지는, 인조 실크 생산의 공정을 추진합니다.

서론

거미 실크는 고장력 강판, 방탄과 나일론을 포함한 밖으로 몇 가지 인공 물질을 수행 놀라운 기계적 성질을 가지고 있습니다. 1 거미들은 다양한 기계적 특성을 표시하는 적어도 6-7 가지 섬유 종류, 인장 강도와 확장성의 다양한 양의 설계된 각 스핀 특정 생물 학적 작업을 수행합니다.이 연구 과학자들은 급속하게 때문에 식인의 3,4. 때문에 그들의 뛰어난 기계적 특성, 그들의 biocompatibility, 그들의 무독성과 녹색 - 재료 자연의 차세대 biomaterials 같은 거미 실크 옷의 사용을 추구하고있다 그의 거미들도 악의에 찬 성격은 농업을 통해 거미 실크 옷을 수확하는 것은 산업 규모의 제조에 필요한 요구 사항을 충족하기위한 실용적인 전략이 아닙니다. 따라서 과학자들은로부터 합성 섬유의 방적 체외에서 결합 유전자 변형 생물체에 재조합 실크 단백질의 생산으로 향했다했습니다SE 정화 단백질이 있습니다. 전체 길이 재조합 거미 실크 단백질의 5-8 표현들은 고도로 반복적인 자연과 물리적 길이를 (> 15킬로바이트) 등이 자신의 유전자 시퀀스의 본질적인 속성, GC 풍부한 컨텐츠 주어진 기술적으로 곤란했던과 편견되었습니다 알라닌과 글리신 코돈 사용. 날짜 9-11, 대부분....

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프로토콜

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그래픽 개요 : 방적 공정 Biomimicry

자연 거미 실크 생산 경로의 Biomimicry :. 합성 실크를 생산하는 경로는이 이미지는 골든 오브 위버, Nephila clavipes, 천연 실크 생산 (흰색 텍스트) 활용 구성 요소에서 주요 ampullate 글랜드를 보여줍니다. 꼬리 지방은 ampulla, 스피닝 마약에 대한 저장 영역으로 수송되는 실크 단백질의 대량 합성. 이 농축 마약이 솔루션은 이전에 섬유 압출에 이온 교환 및 탈수가 발생하는 회전 덕트를 통해 압출입니다. 저희 연구실에서 사용 biomimetic 프로세스는 빨간색 텍스트로 표시됩니다. 재조합 실크 생산은 크로마 토그래피를 이용한 단백질 정제 이어 유전자 변형 박테리아를 사용하여 생성됩니다. 그 다음 정제 단백질은 하위이다자료를 집중할 lyophilization에 ject. 마지막으로, 단백질은 HFIP에 다시 용해 및 이소프로판올 욕조에 주사기 바늘로부터 압출한다.

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토론

이 방법론에서 냈지 합성 섬유는 천연 섬유에 비해 크기의 순서에 기계식입니다. 스풀 링 및 게시물 스핀 추첨 프로세스를 mechanizing하여 인간의 오류의 양을 줄임으로써, 샘플 간의 실험 유사 콘텐츠를 더 많은 제어와 획기적으로 줄일 수 있습니다.

우리의 방법론은 거미 유전자 가족의 다른 구성원의 cDNAs에서 인코딩 재조합 단백질에서 돌다가있는 다른 섬유의 기계적 특성을 조사하기위한 가능성을 제공합니다. 잠재적으로, 그것은 피브로인 내에서, 또는 다른 피브로인 유형 간의 서로 다른 단백질 모듈의 기계적 역할을 결정할 수 있습니다. 23 개 이상의 실크 단백질이나 다른 분자가 결합하거나 추가할 수있는대로 또한, 복합 재료 등의 실크 섬유의 시험을 허용 와 단백질 혼합물로 불러 냈어요.

이 방적 방법론 appa으로 쉽게 따라 확장할 수있는 다른 실험실을위한 플랫폼입니다ratuses는 손쉬운 방식으로 건.......

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공개 사항

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

감사의 글

이 작품은 각각 NSF 루이 보조금 MCB-0950372와 DMR-1105310받을 권리를 가진다 "블랙 위도우 거미의 실크와 거미의 실크 접착제의 기계적 동작의 분자 특성화"에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
시약 / 장비 회사 카탈로그 번호 댓글
pBAD / TOPO ThioFusion 식 키트 Invitrogen K370-01
10X FastBreak 세포 용해 시약, Promega V857C
니켈-NTA 아가로 오스 Qiagen 30,210 버퍼에 대한 지침이 포함되어 있습니다
ProteoSilver 실버 얼룩 키트 시그마 - 올드 리치 PROTSIL1-1KT
FreeZone Lyophilizer Labconco 7,960,041 FreeZone 12Plus
Hexafluoroisopropanol (HFIP) 시그마 - 올드 리치 52,512
주사기 해밀턴 7657-01 250 μL
바늘 해밀턴 7780-01 26s 게이지, 무딘 끝 이동식 바늘
주사기 펌프 하버드 장치 702,208 11Plus
디지털 캘리퍼스 Carrera CP5906 0-150밀리미터 범위
스테인레스 스틸 포셉 세계 정밀 계측기 501,764 미니 뒤몽 # M5S
모터 자연 밀 7,090,529 12VDC, 2 RPM 속도
리니어 액츄에이터 워너 전기 01-D024-0050-A06-LP-IP65 24VDC, 6 인치 범위
현미경 해부 Leica 마이크로 시스템즈 Leica MZ16
디지털 microscope 카메라 Leica 마이크로 시스템즈 DFC320 소프트웨어 : Leica 애플 리케이션 스위트 v2.8.1
Vannas 가위 세계 정밀 계측기 500,260
Microtensometer 오로라 과학 310C 5N 듀얼 모드 시스템

참고문헌

  1. Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S., Savage, K. N. The mechanical design of spider silks: from fibroin sequence to mechanical function. J. Exp. Biol. 202, 3295-3303 (1999).
  2. Foelix, R. Biology of spiders. , Oxford University Press. New York. (1996).
  3. Vollrath, F., Knight, D. P.

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