초음파와 발광 생물 이미징에 의한 intravesically 전달 saRNA 및 모니터링 종양 성장의 antitumor 효과를 평가하는 orthotopic 방광 종양 모델을 수립.
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방법 논문
Orthotopic 방광 종양 모델 및 Intravesical saRNA 트리 트먼트의 평가
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
우리는 orthotopic 이종 이식 마우스 방광 종양 모델에서 intravesically 배달 작은 활성 RNA (saRNA)로 방광 암 치료를위한 새로운 방법을 제시. 마우스 모델은 흡입된 일반적인 마취하에 요도 catheterization에 의해 설립되었습니다. 화학 화상 그러면 방광 glycosaminoglycan 계층을 혼란 intravesical 실버 질산염 용액을 사용하여 방광 점막을 소개하고 세포 첨부할 수 있습니다. 멸균 물, 인간의 방광 암 구-7-luc2-GFP 세포와 여러 세차장에 이어 2 시간 머물지 방광에 카테터를 통해 얻은됩니다. 방광 종양의 후속 성장 생체내 방광 초음파와 발광 생물 이미징에 의해 확인하고 감시하고 있습니다. 종양 그러면 saRNA은 지질 nanoparticles (LNPs)에 공식화와 intravesically 처리됩니다. 종양 성장 초음파 및 bioluminescence으로 감시하고 있습니다. 이 절차의 모든 단계가 수반 비디오에 증명하고 있습니다.
프로토콜
동물 과목과 관련된 절차는 캘리포니아 샌프란 시스코 대학의 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 셀 준비
- 인간의 방광 암 세포주 구-7-luc2-GFP는 (캘리퍼스 생명 과학, Hopkinton, MA) 10 % 태아 소 혈청 및 50 μg / ML gentamicin과 보완 RPMI-1640 미디어에서 재배된다.
- 문화는 37에서 유지됩니다 ° C, 매체와 CO 2는 모든 2-3일 변화 5 %.
- 세포는 트립신의 소화에 의해 수확과 hemocytometer를 사용하여 계산되었다. 50 μl 2 X 10 6 세포의 단일 세포 현탁액은 인산염으로 준비되었다 염분 버퍼 얼음에 보관.
2. Orthotopic 방광 종양 모델
- 8~10주 옛 여자 누드 (뉴 / 뉴) 생쥐 (시몬 슨 연구소, Gilory, CA)을 사용 하였다.
- 를 제공하기 위해 가열 패드를 통해 무균 드레이프를 배치SA 외과 플랫폼입니다. 멸균 윤활 젤리, 탐침의 바늘, 실버 질산 용액 및 멸균 물 24 게이지 카테터는 준비가되어 있습니다.
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토론
우리는 transcriptional 활성화를 위해 p21 CIP1/WAF1 (p21)의 발기인을 대상으로 LNP 책정 saRNA와 종양의 intravesical 치료 다음에 마우스 orthotopic 이종 이식의 방광 종양 모델의 구축을위한 프로토콜을 제시한다. 2, 3 결과 종양이 될 수 있습니다 발광 생물 이미징 및 방광 초음파로 확인 및 모니터링. Orthotopic 모델은 소변과 밀접 내생 방광 암 대략 것을 urothelium의 환경을 제공함으로써 intraperitoneal, 피하 또는 정맥 주사 모델 우수 수 있습니다. orthotopic 마우스 방광 종양의 종류는 모두 직접 방광 벽 주입뿐 아니라 intravesical 떨어뜨림를 사용하여 설립되었습니다. 종양의 4-8 Intravesical 떨어뜨림은 여기를 시연으로, 더 자세히 점막 상피에서 피상적 시작하고 깊은 성장 인간의 방광 종양을 모방한 것이었 그들 진행으로. blad을 수용하기 위해 은을 질산.......
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공개 사항
LCL은 캘리포니아 샌프란 시스코 대학에서 제기한 및 Alnylam 제약 회사에 허가되었습니다 saRNA에 관련된 특허 출원이 보류에 관한라는 발명가이다.
감사의 글
이 연구는 AACR 헨리 쉐퍼 방광 암 연구 그랜트 (09-60-30-LI)에 의해 자금 지원을하고 있습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 (옵션) |
| 구-7 룩-GFP 세포 | 캘리퍼스 | 128,091 | |
| thymic 누드 마우스 (뉴 / 뉴) | 시몬 슨 실험실 | 6~7주 이전 | 그렇소 : (NCR) 뉴 / 뉴 fisol |
| 초음파 장치 | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 프로브 |
| Bioluminescence 단위 | 캘리퍼스 | IVIS 스펙트럼 | |
| Exel safelet의 카테터 | 어부 | 14-841-21 | 24G X 잡았다 " |
| 실버 질산염 | 시그마 | S8157 | |
| 해밀턴 주사기 | 해밀턴 공동mpany | 80,301 | |
| LNP-saRNA | Alnylam 제약 |
표 1. 특정 시약 및 장비.
참고문헌
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United St....
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재인쇄 및 허가
