동물 모델은 자주 뼈에 암 전이를 공부하는 활용하고 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 뼈 전이 연구에 대한 종양 접종의 일반적인 두 가지 방법을 설명하고 간략하게이 모델을 모니터링하고 정량화하기 위해 이용 분석의 일부를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
뼈 metastases 유방, 전립선 및 폐 등 여러 malignancies에서 일반적으로 발생합니다. 일단 뼈 년에 설립 된, 종양이 중요한 병적 상태와 사망률 1 책임이 있습니다. 따라서, 뼈에 종양의 설립, 성장과 활동을 제어하는 분자 메커니즘을 이해하는 중요한 필요가있다. 생체 모델의 일부는이 사건을 연구하기 위해 설립 각은 특정 혜택과 제한 사항이 있습니다되었습니다. 가장 일반적으로 사용되는 모델은 직접 athymic (누드) BalbC 마우스의 동맥 혈액 공급에 종양 세포의 intracardiac 접종을 활용합니다. 이 절차는 여러 가지 종양 유형 (PC-3 전립선 암, 폐 암, 및 마우스 유방 지방 패드의 종양 포함)에 적용 할 수 있지만,이 원고에서 우리는, MDA-MB-231 유방암 모델에 초점을 맞출 것이다. 이 모델에서 우리는 원래 산 안토니오 (San Antonio) 2 박사 Mundy의 그룹에 파생 매우 뼈 선택 클론을, 활용이 H이후 GFP를 표현 transfected과 그룹 3 다시 복제되고 있습니다. 이 클론은 osteotropism의 높은 속도와 폐, 간, 또는 부신 분비에 거의 전이가있는 전이성 뼈 변형입니다. intracardiac 주사가 가장 일반적으로 특정 경우에 뼈 전이 2, 연구에 사용하고 있지만 4 intratibial 또는 유방 지방 패드 주사가 더 적합합니다. , 뼈에 체포 생존, 세포 분열 따위에 의해 번식, 암 유발 뼈 질환으로 발전 종양을 설정하는 데, 특히 암 세포의 능력을 전이 이후 단계를 모니터링의 목적으로 인간의 종양 세포를 사용하는 경우 Intracardiac 주사는 일반적으로 수행됩니다. 종양이 설립 전이성 뼈 질환에 약 상호 뼈에 metastasized 한 후 암 세포와 뼈의 관계에 초점을 경우 Intratibial 주사가 수행됩니다. 색전증 및 항목도 이러한 모델 recapitulates의 전이성 과정에서 초기 단계 이전순환에 종양 세포의. 뼈에 기본 사이트에서 차 종양의 성장이나 전이를 모니터링한다면, 유방 지방 패드의 예방 접종은 일반적으로 선호되지만, 거의 종양 세포 라인은 지속적으로, 4T1 뼈 우대 클론과 함께 주요 사이트에서 뼈 유방 마우스를 metastasize합니다 암, 예외 5,6된다.
이 원고 내용을 접종 절차 및 게시물 접종 분석의 주요 키 단계. 특히, 그것은 세포 배양, intracardiac 및 intratibial 예방 접종에 대한 종양 세포 접종 절차뿐만 아니라 X 선, 형광 및 histomorphometric 분석하여 매주 모니터링에 대한 간략한 정보가 포함되어 있습니다.
프로토콜
1. 셀 유지 보수
- MDA-MB-231의 많은 뼈 전이성 subclones는 뼈 식민과 성장을위한 변수 성향을 가지고 그 존재합니다. 실험을 위해 우리는 UTHSCA 2 개발 GFP 태그 MDA-MB-231에서 파생 된 복제를 사용합니다. 이 특정 하위 클론이 사주의 희생으로 약 3 주 후 접종에서 볼 수 osteolytic 뼈 병변을 형성합니다.
- DMEM이 5~8% 2 7 CO에서 37 ° C 10 % FBS와 0.1 MG / ML 페니실린 - 스트렙토 마이신을 포함하는으로 세포를 유지하고 있습니다.
- 1시 10분 희석에 80-90%의 합류와 재 판의 항로 세포 (이 세포 유형과 크기 판에 따라 다릅니다. T-75의 MDA-MB-231 세포의 경우이 약 6x10 5), 그 대략 72 시간입니다.
- MDA-MB-231 세포는 수많은 pseudopodia와 일반적으로 fibroblastic을 유지합니다. 모든 반올림는 인구 과잉 또는 기타 바람직하지 않은 스트레스를 나타내는,이 때문에 피해야한다생체 내 전이성 잠재력에 영향을 미칠 수 있습니다.
- 이상적으로, 세포가 접종 (우리가 미만 한 주를 추천하거나 실험에 충....
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토론
종양 유발 뼈 질환의 연구 가장 일반적으로 사용되는 두 intracardiac 및 intratibial 예방 접종되어있는 여러 동물 모델에 의존하고 있습니다. 대부분의 경우 intracardiac이 뼈에 전이를 공부를위한 최선의 방법입니다, 그러나, 전체 전이성 과정을 의미하지 않으며, 따라서 유방 지방 패드 나 다른 orthotopic 주사가 이상적으로 그 끝으로 사용해야합니다. 종양 세포는 인간의 세포를 사용하여 대부분의 연구의 기본 사이트에서 쉽게 metastasize하지 않으며,이 경우 사람들은 주로 폐에 metastasize. 4T1 세포의 일부 변종은 뼈 5,6에 metastasize되지만, 병변이 정할 더 어렵습니다, 작은 있으며, 세포가 아니라 인간보다 손쥐 있습니다. 또한 GFP 표현은 4T1 클론이 자주 장기 전이 연구 12을 복잡하게 할 수 사용되는 면역 능력이 모델에서 면역 반응을 유도 할 수 있습니다. 종양 유발 뼈 질환의 다른 모델은 골수종과 같은 꼬리 정맥 in.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
P01CA040035 (FE / JAS)과 VA 경력 개발 상 (JAS) : 저자는 다음과 자금 소스를 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| MDA-MB-231 인간의 유방암 세포 | 원래 ATCC - 내부적으로 복제 및 선택 | ||
| DMEM | GIBCO | 11,885 | |
| PBS | Mediatech 주식회사 | 21-040 - CV | |
| FBS | 아틀라스 생물 | F-0050a | |
| 트립신 | GIBCO | 15,400 | |
| Faxitron | Faxitron | ||
| 거장 | CRi | ||
| μCT 스캐너 | Scanco | ||
| Athymic 누드 마우스 | 할렌 | 폭스 뉴 - / - | |
| 인슐린 주사기 (300 μl, 28.5 g) | Becton 디킨슨 | 309300 | |
| IVIS | 캘리퍼스 | ||
| 방사능 쥐 다이어트 | Teklad | 2920x |
참고문헌
- Sterling, J. A., Edwards, J. R., Martin, T. J., Mundy, G. R. Advances in the biology of bone metastasis: how the skeleton affects tumor behavior. Bone. 48, 6-15 (2011).
- Yoneda, T., Sasaki, A., Mundy, G. R. Osteolytic bone metastasis in breast cancer. Breast Cancer Res. Treat
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재인쇄 및 허가
