직접 intrahippocampal microinjection에 의해 hippocampally에 의존 공간 작업 기억의 변조는 함께하고 다음 생체 내 microdialysis.
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이 논문에서
요약
초록
포도당 대사는 2 deoxyglucose 및 기능 자기 공명 영상과 같은 방법의 기초를 형성, 지역 신경 활동에 유용한 표시입니다. 그러나, 동물 모델에서 이러한 방법 중 하나를 사용하십시오 마취가 필요하며 따라서 모두 뇌의 상태를 변경하고 행동 조치를 방지 할 수 있습니다. 다른 방법은 깨어 억제 동물 포도당, 젖산, 관련 metabolites의 뇌 세포 외액 농도의 연속 측정을 할 생체 microdialysis에서의 사용이다. 특정 뇌 영역 및 / 또는 급성 약리 조작에 의존하도록 설계 작업과 결합 할 때이 기술은 특히 유용합니다, 예를 들어, 공간 작업 기억 과제 (자연 교대) 동안 hippocampal 측정은 젖산의 세포 포도당과 상승에서 수영을 표시 강화 작용의 1,2, 그리고 intrahippocampal 인슐린 행정의 암시는 메모리를 향상시키고 hippocampal 글리콜을 증가 모두ysis 3. 이러한 인슐린과 같은 물질 metabolites를 측정하는 데 사용되는 동일한 microdialysis 프로브를 통해 해마에 전달 될 수 있습니다. hippocampal 함수의 조치로 자연 교대의 사용은 작업 성능과 신진 대사를 모두 변경할 수있는 모든있는 스트레스 동기 부여 (예 : footshock), 규제, 또는 보상 (예 : 식품)에서 모든 혼란을 방지하도록 설계되어,이 작업은 또한을 제공합니다 치료의 특이 현상 효과에 대한 제어를 허용하는 모터 활동 측정합니다. 결합,이 방법은 행동을 규제 neurochemical과 신진 대사 변수의 직접 측정을 허용합니다.
프로토콜
1. 수술 준비
- 처리. 동물 (마취에 대한 예를 들어 가장 많이 쥐 또는 마우스, 행동 테스트와 microdialysis 및 조합에 대한 방법은 크게 필요로하는 필수 종의 특정 적응과 일반 하나입니다 있지만은) 적어도 10 분 / 일의 최소 처리됩니다 수술하기 전에 이틀 이요. 광범위한 처리가 가능한 혼란 2,4,5을 피하고 테스트시 강세 상태에서 동물을 떠날 표시되었습니다. 우리는 예를 들어 종으로이 프로토콜을 통해 쥐를 사용합니다. 이것은 가장 시설 수의사 및 직원 건강 관리와 상담에 맨손을 사용하여 달성 될 수있다 : 처리가 예 : 라텍스 또는 니트릴 장갑에서 모피를 당기는으로 인한 스트레스없이 수행되어야합니다. 이 불가능할 경우, 부드러운면 장갑은 쥐 '모피 당겨 방지하기 위해 장벽 장갑 위에 착용해야합니다.
- 멸균 필드 준비. 전에 수술을 시작 surgic에야외 공간은 쥐의 체온을 유지하기 위해 사용되는 가열 패드를 덮고, stereotaxic 장치 및 장치에 걸쳐 배치 무균 드레이프 주위에 준비를 살균 필드를 준비가되어 있습니다. 정확한 온도 조절과 순환 온수 패드는 동물의 과열 방지하는 데 사용됩니다.
- 마취 유도. isoflurane vaporizer는 isoflur....
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결과
쥐가 수술에서 빠르게 회복하고 마취의 30 분 다음에 정지에서, 경고 운동성 및 활성해야합니다. 수술이 정상적으로 수행되고 최소한의 치과 시멘트가 사용되는 경우 캐뉼라 캡의 영향을 최소화해야합니다. 감염의 흔적이 수술 모니터링 중에 발견, 또는 쥐가 실험을 종료 즉시 고통 또는 불편의 흔적을 보여주는 어떠한 방법에 경우,이 매우 드문해야합니다. 이전 테스트에 처리하는 동안, 동물은 경고 자유롭게 운동성, 친절하고 호기심이 있어야합니다. 잘 처리 동물 수술, 후 수술 회복, 또는 실험의 존재에서 남아 본질적으로 더 관찰 스트레스를주지 않습니다, 이것은 플라즈마 스트레스 호르몬의 측정에 의해 필요한 경우 확인 (에피네프린, glucocorticoids) 및 / 또는 포도당 2,4 될 수 있습니다 5.
뇌 ECF 포도당은 범위 0.5에 일반적 - 1.5 MM, 뇌 지역에 따라 변화, 높은 값 비록당뇨병 동물에서 볼 수 있습니다, 해마에 기준 .......
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토론
microdialysis에 사용 된 모든 솔루션은 0.2 μm 필터를 사용하여 즉시 사용 전에 필터링해야합니다. 가이드 캐뉼라로 프로브의 삽입 후, 그 흐름이 unimpeded입니다 및 샘플 수집이 발생 확인 관찰합니다. 흐름이 삽입 한 후 중지하면, 가능성이 가장 높은 원인은 삽입에 충분한 치료로 인한 프로브 막에 손상이며, 새로운 프로브 대체해야합니다.
위에서 언급으로,이 방법에 장점이 깨어 자유롭게 움직일 동물 행동 및 neurochemical 모두 조치를 허용, 혼란이 없다는 것입니다 :이 활용하기 전에 테스트에 다양한 핸들링은 동물이 기간 동안 스트레스가없는 것을 위해 필수적입니다 측정. 평균 기간은 일반적으로 안정적으로 신진 대사 기준을 제공하기에 충분하지만, 동물에 걸쳐 균일 한 혈당 수준을 보장하기 위해 필요한 경우 식품은 테스트 전에 1-2 시간이 삭제 될 수 있습니다.
일전자 샘플링 기법 등 MD의 두 가장.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
이 작품은 NIH / NIDDK (ECM에 DK077106)에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
시약의 대부분은 표준 실험실 학년과 선택의 공급 업체에서 구할 수 있습니다. 마찬가지로, 주사기 펌프 및 배관 등의 장비는 여러 제조업체의에서 사용할 수 있습니다. 자세한 내용은 중요하는 여기 사용되는 특정 항목은 다음과 같습니다 : | |||
| CMA 12 microdialysis 프로브 | CMA / Microdialysis | CMA-12-XXX | 다음은에서 특정 코드로 표시 다양한 막 길이와 단절에서 사용할 수 있습니다 'XXX.' |
| 인간 인슐린 (Humulin) | 엘리 릴리 (Eli Lilly) | N / | |
| 액체 회전 | Instech | 375/D/22QM | 이 특정 회전은 매우 낮은 토크 및 내부 볼륨뿐만 아니라 nonrea이ctive 석영 안감. |
참고문헌
- McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (6), 2881(2000).
- McNay, E. C., Gold, P. E.
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