동시에 오른쪽 심장 기능, 폐 염증 및 면역 반응을 조사하기 위해 구체적이고 빠른 프로토콜은 학습 도구로 설명되어 있습니다. 비디오 및 그림은 큰 규모의 연구에 작은에 사용할 수에 적용 할 수 있습니다 조직 팀 접근 방식에서 생리학 및 microdissection 기술을 설명합니다.
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방법 논문
폐 마우스의 면역 조직 샘플의 수확과 함께 오른쪽 심실 수축기 압력 측정
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
오른쪽 심장의 기능은 따라서 오른쪽 심장 생리학과 폐동맥 혈관 생리학을 연결 폐를 통해 혈액을 펌프하는 것입니다. 염증 세포 침투, 크린 시토 킨과 성장 요인의 생산을 elaborating 의해 리모델링 프로세스에게 1 시작하여, 마음과 폐 기능의 일반적인 변형입니다.
왼쪽 심실에 비해 우심실 압력의 변화는 비교적 좁은 영역에서 작동하는 저압 펌프입니다. 증가 폐동맥 압력은 폐 혈관 침대 및 폐 고혈압 2 증가 압력과 연결되어 있습니다. 폐 고혈압은 종종 염증성 폐 질환, 예를 들어 만성 방해하는 폐 질환, 또는 면역 질환 3 연결됩니다. 폐 고혈압은 생명과 수명의 품질에 대한 나쁜 예후 (豫 后)를 수여하기 때문에, 많은 연구는 그 미그 메커니즘을 이해하는쪽으로 지향된다HT는 의약품 개입 4 타겟이 될. 폐 고혈압에 대한 효과적인 관리 도구의 개발을위한 주요 과제는 분자 및 세포 오른쪽 가슴의 변화, 폐, 면역 시스템의 동시 이해의 복잡성 남아 있습니다.
여기, 우리는 마우스의 오른쪽 중심에 압력 변화의 신속하고 정확한 측정을위한 절차 흐름과 심장, 폐, 면역 조직에서 샘플의 동시 수확을 제시한다. 방법 먼저 폐동맥 5-13의 압력 대리 조치로 1990 년대 후반에 개발 된 근접 chested 마우스의 경정맥 정맥,를 통해 우심실 직접 catheterization를 기준으로합니다. 조직 팀 접근 방식은 매우 빠른 오른쪽 심장 catheterization 기술을 용이하게한다. 이렇게하면 저절로 방 공기를 호흡 마우스에서 측정을 수행 할 수 있습니다. 서로 다른 업무 영역에서 작업 흐름의 조직시간 지연을 줄이고 동시에 생리학 실험 및 수확 면역, 심장과 폐 조직을 수행 할 수있는 가능성을 엽니 다.
여기에 설명 된 절차 흐름이 큰 약물 검사 assays에, 작은 타겟이 실험에서 실험 설정 및 연구 디자인의 다양한 적용 할 수 있습니다. echocardiography 5,14-17과 심장, 폐와 면역 조직의 수확을 포함하도록 확장 할 수 있습니다 심장 생리학 데이터의 동시 인수 앞으로 과학 지식 기반을 이동 데이터를 얻기 위해 필요한 동물의 수를 줄일 수 있습니다. 여기에 제시된 절차 흐름은 또한 면역, 폐 및 심장 기능을 연결하는 네트워크에 대한 지식을 얻기위한 이상적인 기반을 제공합니다. 여기에 설명 된 동일한 원칙은 필요에 따라 다른 또는 추가적인 장기를 공부하도록 구성 할 수 있습니다.
프로토콜
1. 준비하기
- 다음과 같이 다음과 같은 솔루션 및 튜브 (표 1) 준비 :
- 행크스 솔루션, 아니 칼슘, 마그네슘 또는 표시 페니실린과 (100 U / ML) / 스트렙토 마이신 (100 MG / ML).
- 인산염은 염분 (PBS), 1X, 아니 칼슘, 마그네슘 노 버퍼.
- 에탄올, 70 %, 500 ML을합니다.
- 포름 알데히드 버퍼, PBS로 7~10%는 500 ML을합니다.
- Anaesthesia 솔루션 :
- Avertin. 조심스럽게 2,2,2 - Tribromoethanol의 5g에 2 - 메틸 -2 - 부탄올 5 ML을 추가합니다. 일단 용해, 어둠 속에서 실온에서 재고 솔루션을 유지. 주식 솔루션의 0.25 ML를 타고 유리 하단 병에 1xPBS의 10 ML로 희석. 37 알루미늄 호일, 장소와 병을 감싸 ° C 해산 한 후 나누어지는 5 ML의 폴리 프로필렌 튜브에, 냉장고에 보관까지. 실험의 아침에 하나 나누어지는을 따뜻하게.
- 바르비 투르 산염. 2.6 %에게 바르비 투르 산염 솔을주고 PBS로 주식 솔루션을 희석ution. 폴리 프로필렌 튜브에 3-4 ML의 aliquots를 놓습니다.
....
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결과
오른쪽 심장 압력 곡선을 얻기위한 기본 결과는 오른쪽 심장 카테 테르의 정확한 위치에 의해 달성된다. 오른쪽 심실의 카테 테르 내부의 정확한 위치는 (그림 4) 압력 고원의 결과 때문에 압력 시간 곡선의 모양이 중요합니다. 뾰족한 곡선은 대신, 오른쪽 심실의 벽 호흡이나 심장 박동 운동에 의해 이동 카테터를 나타냅니다. 동물의 생존의 무대 잠재적 인 문제를 감지하려면 ΔP의 표준 편차, 그리고 심장 박동이 계산해야합니다. 두 값은 치료 그룹 사이에 크게 차이가 될 것으로 예상된다. 또한, 기대는 ΔP 값과 심장 박동이 녹화 시간에 걸쳐 드리프트를 표시하지 않는 것입니다. 예를 들어, 천천히 ΔP 값을 늘리면 hypoxic 폐 혈관 수축 18-20을 나타냅니다. 심장 박동를 낮추면 indicat 것마취의 수준은 동물의 죽음으로 이어지는 너무 높은 것을 전자. 저희 연구실에서 다른 사람들이 절차를 수행합니다. 마우스의 모든 그룹에 걸쳐 우리는 정기적으로 오른쪽 심실 압력 데이터.......
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토론
여기에 설명 된 실험 흐름은 폐, 심장과 쥐의 면역 시스템에서 응답의 분석에 적합한 심실 수축기 압력과 샘플 수확의 신속하고 동시 측정 할 수 있습니다. 절차는 심장 생리학 측정, 마이크로 해부 및 라이브 세포 연구, 조직 학적 분석, 또는 조직의 omics 분석을위한 후속 조직의 수확이 조화를 이루고 있습니다. 전체 절차는 마우스 당 미만 20 분 정도 소요됩니다. 때문에 업무 영역이 주관하는 워크 플로를, 2-3 동물 동시에 공부를 할 수 있습니다. 따라서 절차는 작은 실험실에서 큰 제약 연구에, 설정의 다양한에서 수행 작고, 대상 실험 12 대형 화면에 적합합니다.
심장 생리학 측정 및 조직 수확의 조합 폐, 생물 네트워크 해당 컨트롤을 검색하거나 심장를 동기화하기위한 분석을 수행 할 수있는 가능성을 열어유전자 변형과 KO 마우스 자원을 활용 차 면역 기능. 동시 절차 흐름의 중요한 장점은 연구에 따라 필요한 동물 수의 감소입니다. 이 절차 워크 플로.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
R01HL082694 (JW), 미국 심장 협회, 설립자 제휴 (0855943D, GG),이 작품은 건강 1R21HL092370-01의 국립 연구소 (GG), 1R01 HL095764-01 (GG)에 의해 재정 지원되었다 스토니은 고원 - 허버트 기금, 뉴욕 (SHP).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 코멘트 (선택 사항) |
| 시약 | |||
| 2 - 메틸 -2 - 부탄올 | 시그마 - 알드리치 | 152463 | |
| 2,2,2 - Tribromoethanol | 시그마 - 알드리치 | T48402 | |
| 살균제 비누 (적용 범위 스프레이 TB 플러스 Steris) | 피셔 과학 | 1629-08 | |
| 에틸 알콜, 200 증명서, 절대, 무수 ACS / USP 등급 | PHARMCO - AAPER | 111000200 | 증류수와 70 %를 희석 |
| 포름 알데히드 용액 | 시그마 - 알드리치 | F1635-500ML | 7~10% 견적에 희석PBS 재고 솔루션과 물을 사용하여 1X의 PBS 농도에서 ldehyde 농도 |
| 행크스 솔루션, 아니 칼슘, 마그네슘 | 피셔 과학 | 21-022 - CV | |
| 10월 | 조직 - 테크 | 4583 | |
| 페니실린 (10,000 U / ML) / 스트렙토 마이신 (10,000 MG / ML) 솔루션 | 열 과학 | SV30010 | |
| 인산염은 염분 (PBS), 아니 칼슘, 아니 마그네슘, 1X 및 10X 솔루션을 버퍼 | 피셔 과학 | ||
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| 압력 제어 단위 | 밀라 악기, Inc의 | PCU-2000 | |
| 소프트웨어, Labchart - 프로 V.7 | AD에서struments |
참고문헌
- Price, L. C., et al. Inflammation in pulmonary arterial hypertension. Chest. 141, 210-221 (2012).
- Olschewski, H., et al. Cellular pathophysiology and therapy of pulmonary hypertension. J. Lab. Clin. Med. 138, 367-377 (2001).
- Hassoun, P. M., et al.
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