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방법 논문

심장 스트레스 테스트 Dobutamine에 의해 유도와 마우스의 심장 Catheterization에 의해 모니터링

17.7K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/50050

⸱

2013년 2월 10일

 ,  , 
1Instituto de Ciencias, Facultad de Medicina, Clínica Alemana Universidad del Desarrollo

이 논문에서

요약

우리는 dobutamine에 의해 유도 및 일반 마우스의 심장 catheterization에 의해 모니터링 심장​​ 스트레스 테스트를 수행 할 수있는 프로토콜을 설명합니다. 또한 높은 지방 다이어트 유발 비만 마우스에 subclinical 심장 질환 가면을 벗어 라하기위한 응용 프로그램을 보여줍니다.

초록

Dobutamine은 동맥 (β 2)로 표현 수용체에 비해 심장 (β 1)로 표현 수용체에 대한 높은 친화력이있는 β-아드레날린 작용제입니다. 체계적으로 관리 할 때, 심장 수요를 증가시킵니다. 따라서, dobutamine 가능성이 경색의 위험이 비정상적인 리듬이나 허혈성 영역을 unmasks.

심장 스트레스 테스트 중에 심장 기능의 모니터링은 ecocardiography 또는 심장 catheterization에 의해 수행 할 수 있습니다. 후자는 전자의 침입하지만, 더 정확하고 유익한 기술입니다.

심장 박동 (HR), 수축기 혈압, 이완기 압력, 최종 이완기 압력, 최대 긍정적 인 압력 : 심장 스트레스 테스트 dobutamine에 의해 유도 여기에 설명 된대로 성취 심장 catheterization에 의해 모니터링는 단일 실험, 다음 hemodynamic 매개 변수의 측정에 수 개발 (DP / dtmax) 및 최대 부정적인 보도우레 개발 (DP / DT 분), 기본 조건에서와 dobutamine의 증가 복용 이하.

예상했던대로, 정상 마우스에서 우리는 HR, DP / DT 맥스와 DP / DT 분의 dobutamine 복용 관련 증가를 관찰했다. 또한, 가장 높은 복용량에서 높은 지방 다이어트 유발 비만 마우스의 심장 보상 작용의 상실이 가면을했습니다 (12 NG / g / 분) 테스트.

프로토콜

프로토콜은 Facultad 드 Medicina 임상 Alemana - Universidad 델 Desarrollo의 윤리위원회에 의해 승인되었습니다.

I.는 Dobutamine 주입을 준비

  1. 500 μg / ML의 dobutamine의 주식 솔루션을 취득하기 위해서는 불임 distillated 물 20 ML에 dobutamine의 10 MG를 해산. -20 ° C.에서 나누어지는 및 매장 이 솔루션은 3 개월 이상에서 사용할 수 있습니다.
  2. 상온에서 dobutamine 재고 솔루션의 나누어지는을 해동.
  3. dobutamine (μg / ML) = 체중 X 0.2 : 수식을 사용하여 계산 농도 dobutamine 작업 솔루션을 취득하기 위해서는 불임 0.9 % NaCl에서 dobutamine 재고 솔루션을 희석.
  4. dobutamine 작업 솔루션 1 ML의 주사기 29Gx1 / 2 "을 입력합니다.
  5. 20cm PE-10 관에 주사기의 바늘을 삽입합니다.
  6. 제조업체 지침에 따라 주입 펌프에 주사기를 조정합니다.
  7. 단계에서 램프 주입을 설​​정6 단계에, 각 단계를위한 10 μl / 분 증가 형식 - 투 - 단계.

II. 압력 센서를 준비

  1. 적어도 15 분 동안 37 ° C에서 멸균 물에 신호 드리프트 잠수함 압력 센서를 최소화합니다. 그 수압은 압력 센서에 영향을 미치는 것을 방지하기 위해 이상 0.5 cm 깊이 카테터를 발라하지 마십시오.
  2. 전자 25 100 mmHg에 압력 센서를 보정. 전기 입력 (볼트)는 압력 신호 (mmHg)로 변환된다.
  3. 2 K / s의 샘플링 속도를 설정하고는 100 Hz에서 잘라와 필터 낮은 패스를 사용합니다. 압력 신호 제로 mmHg로 설정합니다.
  4. 끝에서 카테터 15mm를 선택합니다. 소개 점에서 마음에 도달 할 먼은 왼쪽 ventricule에 카테 테르의 존재를 검출, echocardiography에 의해 추정되었다.

III. Catheterization에 마우스를 준비

  1. 무게 C57BL / 6 남자 마우스, 주 된 30-32.
  2. intraperitoneally 60 μg / kg 케타민, 4 μg / kg xylazine 1 주사. 참고 : 다른 anesthetics 예를 들어, 사용할 수 있습니다 : 350-450 μg / kg avertin, 50 μg / kg pentobarbital 1.5 - 2퍼센트 isoflurane 2-3.
  3. 전기 면도기로 목을 면도.
  4. 예열 등온 가열 플레이트에 위로 향한 위치에 anesthetized 마우스를 놓습니다. 종이 테이프와의 사지를 고정합니다.
  5. 완전한 진정 작용을 확인하기 위해 발가락 핀치을 수행합니다.
  6. 부드럽게 체온을 모니터링하기 위해 직장 프로브를 삽입합니다. vaselinized 프로브를 사용하는 것이 좋습니다.
  7. 몸의 온도가 37과 다른 경우 ° C ± 0.5 ° C, 가열 플레이트를 통해이를 조정할 수 있습니다.
  8. 산소 공급 근처에 마우스 주둥이를 놔.
  9. stereomicroscope에서 마우스 목 지역을 놓으십시오.

IV. 데이터 수집

  1. LabChartPro 7 소프트웨어에서 압력 등록 하나의 채널과 심장 박동을위한 하나의 채널 (HR)을 선택등록. 후자의 경우, 옵션 "순환 측정"와 속도 등의 설정 측정을 선택합니다.
  2. 0-150 mmHg : 압력 채널에 대한 스케일 범위를 설정합니다.
  3. 200-600 BPM : 들어 HR 채널은 규모의 범위를 설정합니다.
  4. 등록을 시작하려면 시작 키를 누릅니다.
  5. 절차 예를 들어, 수행 나타내는 코멘트를 삽입 마취 관리는 변경 사항을 호흡, dobutamine 주입, dobutamine 농도 시작합니다.

V. 심장의 Catheterization 4,5

  1. 턱 근처의 오른쪽에 작은 절개를 수행합니다. 가위는 피부 근육 결합 조직을 별도의.
  2. 기관의 오른쪽에 - 세로 절개 (2cm 1.5) 수행합니다. 기관 근처의 오른쪽 경동맥을 노출하기 위해, 곡선 포셉과 결합 조직, 지방과 근육을 분리합니다.
  3. 경동맥을 노출 할 수있는 동물 오른쪽에 확장기를 놓습니다. 맥이 뛰는심장에 의해 생성 된 압력은 동맥의 식별을 용이하게한다. 어두운 빨간색 목 정맥은 오른쪽에 있습니다.
  4. 곡선 포셉과 인접 조직에서 동맥을 분리합니다. 흰색 스레드 유사 미주 신경은 동맥을 따라 자리 잡고 있습니다.
  5. 6 / 0 실크 스레드와 "를 더블"의 20cm 조각을 잘라 버릴거야.
  6. 왼쪽에서 오른쪽으로 동맥 아래의 "더블"스레드를 전달합니다. 별도의 종료를 얻기 위해, 스레드를 잘라.
  7. 동맥 아래 삼분의 일 목록 (10cm)를 전달합니다.
  8. 머리에 가까이에 배치 스레드에 꼭 매듭, 그리고 더 말초 스레드에서 느슨한 하나를 묶어주세요.
  9. 중간 스레드에서 느슨한 매듭을 묶었하고, 종이 테이프로 가열 패드에 중간 스레드의 오른쪽 끝을 해결할 수 있습니다.
  10. 멸균 0.9 % NaCl을 삽입하여 경동맥이 촉촉하세요. 면이 눈에 액체의 초과를 말린다.
  11. hemostat 클램프와 낮은 스레드를 스트레칭.
  12. P에 의해 hemostat의 가위의 위치를​​ 고정혈액의 흐름을 막다하기 위해, 복부의 피부를 인칭 위의 스레드를 스트레칭. 동맥 주위에 결합 조직이 제거되었는지 확인합니다. 동맥 혈액의 전체 수 및 펄스을 박탈해야합니다. 동맥의 토크 힘을 생산에서 스레드를 방지합니다.
  13. Vannas 마이크로 가위로 동맥의 하단에 단면 닉합니다. 혈액 방울 흘됩니다.
  14. 경동맥에 카테터를 삽입합니다. 전체 압력 센서를 도입해야합니다. 더 혈액 손실이 없습니다 있는지 확인합니다.
  15. 부드럽게 장소에 카테 테르를 개최하기 위해 중간 스레드 매듭을 조정합니다. 너무 많이 압축하지 말고, 압력 센서는 매우 약한 것입니다.
  16. 동물의 복부에서 hemostat 가위를 놓습니다.
  17. 혈액 손실을 방지하기 위해 손으로 카테터를 잡고 중간 스레드를 누르십시오. 참고 : 동맥이 피를 가득해야합니다.
  18. 녹화 압력 신호를 시작합니다.
  19. 카테터 안에되면,동맥 압력 신호가 60-70 100-120 mmHg로 변동. 압력 신호의 모양은 그림 1.A. 주에 표시됩니다 : 당신이에 관심이 있다면 신호가 적어도 5 분 동안 안정적 경우,이 시점에서 당신은 동맥 압력를 기록 할 수 있습니다. HR 값은 기록 신호의 30 초의 간격을 고려 압력 파형에서 얻은되었습니다. 이 조사 목표에 따르면, HR 직접 측정을 위해 또한 ECG 방법을 사용할 수 있습니다.
  20. 부드럽게 압력 신호 (그림 1.B)의 모양 변화를 관찰하기 위해 카테터를 밀어. 카테터가 왼쪽 심실 안에서되면, 압력 신호는 0 100-120 mmHg로 변동. 이 카테터를 밀어하기 어려운 경우, 두 손가락으로 동물의 가슴을 찔러.
  21. 지속적인 호흡 속도, 체온, 마취 수준 및 압력 신호를 제어합니다. 그들 모두는 안정적으로 유지해야합니다.

VI. Dobutamine의 주입

  1. 경정맥 정맥 cannulation위한 천공을 방지하기 위해, 정맥 주위를 벗기 지방 조직해야합니다. 정맥 폐색의 수술 절차는 경동맥에 표시되는 절차와 비슷합니다.
  2. 정맥에 PE-10 관을 소개합니다. 그 혈액의 흐름을 확인하는 것은 뒤로 주사기 플런저를 이동 차단되지 않습니다.
  3. Dobutamine 주입은 10 μl / 분으로 시작 60 μl / 분으로 마무리하는거야. 모든 단계에서 주입 요금은 2 분 6 유지됩니다.
  4. 마지막 dobutamine 투여 후, 마취의 약물로 동물을 안락사시켜야.

VII. 데이터 분석

  1. 데이터 분석을 위해, 여러분의 흥미에 기록 된 데이터의 섹션을 선택합니다. 압력 신호가 안정적있는 시간 간격을 고려하십시오.
  2. 혈압 모듈의 설정 아이콘을 선택합니다. 압력 신호의 선택된 유형을 나타냅니다.
  3. 자동 LabChartPro 7 소프트웨어 디스플레이 말은, 최대그리고 HR에 대한 최소 값, 수축기 압력 (P 최대), 이완기 압력 (P 분), 최종 이완기 압력 (EDP), 최대 긍정적 인 압력 개발 (DP / dtmax) 및 최대 부정적인 압력 개발 (DP / DT 분). 또한, 심장 매개 변수는 압력 추적에 묘사 할 수 있습니다.

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결과

동맥 압력 신호는 수축기 및 이완기 압력에 의해 정의됩니다. 압력 센서는 왼쪽 심실 내부에있는 경우, 그 압력 (LVP)이 파형은 이완기 압력의 영에 드롭하고 심실 수축하기 전에 왼쪽 심방 수축 (그림 1)의 모습이 특징입니다. 기본 상태에서 케타민-xylazine anesthetized 일반 마우스는 280 HR ± 24, 107의 P 최대 ± 8, 5 P 분 ± 1, 14 EDP ± 2, DP / 6081의 DT 최대 ± 365 및 DP / DT 분했다 의 5,230 ± 526.

그림 2에서와 같이 일반 마우스에 LVP 및 HR 점점 dobutamine 주입 따라 증가하고, 주입을 중지 한 후 표준화. 예상대로, 모든 hemodynamic 매개 변수는 dobutamine 복용에 의존 방식 (그림 3) 증가...

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토론

dobutamine에 의해 유도와 심장 catheterization에 의해 모니터링 심장​​ 스트레스 테스트는 힘든 것입니다. 그럼에도 불구하고, 여기 프로토콜을 따르면 설명 및 교육의 짧은 시간, 그것은 하나의 실험 마지막 약 한 시간에서 6 hemodynamic 매개 변수를 평가 할 수 있습니다.

제시 여기에 프로토콜의 중요한 단계는 혈관의 cannulations입니다. 경동맥의 cannulation에 대해서는 수행 절개은 세 조직 동맥의 레이어와 카테터의 통로를 허용 할 수있을만큼 큰을 깰 정도로 깊은 있어야합니다. 출혈의 위험이 낮은 반면, 경정맥 정맥의 cannulation에 관한 정맥 폐색의 가능성이 높아집니다. 따라서, 프로토콜 재현성이 충분히 사용 nicking 전략의 표준화에 달려있다.

마취, 저체온증과 hypoxia의 우울 효과의 영향을 방지해야 최소화하고, 필요한 경우 correc하려면테드. 깊은 또는 불...

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공개 사항

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

감사의 글

우리는 박사 힐리오 살가도, 레 나타 Lataro와 마우로 드 올리베이라, 프로세스의 집합 기간 동안 관대 한 지원을 Ribeirão Preto, 상 파울로와 박사 벤 Janssen, 심혈관 연구소 마스 트리 히트, 마스 트리 히트 대학, 대학의 의과 대학 감사드립니다.

이 작업은 보안 데이터 커넥터에 FONDECYT 보조금 N ° 11090114에 의해 지원되었다

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
시약
PE-50/10 워너 악기 64-0752
실크 스레드 6 / 0 HR17 Tagum SN0713K
Xylacin 20 MG / ML Laboratorio의 Centrovet
케타민 100 MG / ML 드래그 제약
나트륨 염화물 0.9 % 연구소 샌더슨 SA
Dobutamine 하이드로 클로라이드 시그마 - 알드리치 D0676
주사기 U-100 인슐린 29G X ½ " Terumo 의료 (주)
마이크로 11.5 cm 스타일 7 해부 집게 로턴Medizintechnik 09-0959
Graefe 집게 CVD 0.7mm 7cm 로턴 Medizintechnik 62-0263
클램프 Dieffenbach 불독 망할 CIA의 STR 38mm 로턴 Medizintechnik 60-010
Vannas 가위 8cm STR FH 로턴 Medizintechnik 63-1400
장비
SPR-671 MiKro - 팁 압력 카테터 밀라 악기 840-6719
PCU-2000 압력 제어 단위 밀라 악기 880-0129
PowerLab 30분의 4 ADinstruments PTY (주) ML866
LabChartPro 7 ADinstruments PTY (주) MLU260 / 7
Legato200 주입 펌프 KdScientific KD-KDS210P
TCAT - 2LV 온도 컨트롤러와 등온 가열 플레이트 PhysiTemp 악기 주식회사
의료 산소 공급 Indura
직장 프로브 ADinstruments PTY (주) MLT1404
Trinocular 현미경, 축 조명 LW 과학 Z2B-TRI-ETNE, ILP-1502-LTS1, ILP-1502-DGGF

참고문헌

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  3. Lorenz, J. N. A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 282, R1565-R1582 (2002).
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  9. Reddy, A. K., et al. Cardiac function in young and old Little mice. J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1319-1325 (2007).
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