이식 동맥 경화에 대한 마우스 모델

요약

우리는 우리의 마우스 이식 arteriosclerois (GA) 같은 근친 교배 균주의받는 사람에 마우스 선박 세그먼트의 개재를 포함 모델에 대한 프로토콜을 설명합니다. 용기 기증자에 추가 유전자 변화를 교잡에 의해, 모델은 GA에 특정 유전자의 효과를 평가할 수 있습니다.

초록

또한, 이식 혈관라고 이식 arteriosclerois (GA)은 전체 이식 혈관 트리의 확산, 원주 협착을 특징으로 장기 이식의 수 개월에서 수 년에 걸쳐 개발 병리학 적 병변이다. 조지아 발병의 가장 중요한 구성 요소는 내막에서 부드러운 근육과 같은 세포의 증식이다. 인간의 관상 동맥 세그먼트 면역 결핍 생쥐의 인프라 신장 aortae에 개재 될 때 intimas은 동맥 기증자 또는 외인성 인간 IFN-γ 인간 T 세포의 부재합니다.에 동종 adoptively 전송 인간의 T 세포에 대한 응답으로 확장 될 수있다 이 마우스 모델에서 급성 세포 성 거부 반응이 완전히, 둘, 셋 내에 이식에서 모든 기증자 파생 된 혈관 세포를 제거하기 때문에 다른 마우스 긴장 수신자로 한 긴장에서 마우스 대동맥의 개재는 인간의 만성 거부 반응에 대한 모델로 제한됩니다 주. 우리는 최근 두 개의 새로운 M을 개발했습니다이러한 문제를 회피하기 위해 모델을 여러개. 첫 번째 모델은 남성 마우스에서 동일한 근친 변형 (C57BL/6J)의 여성받는 사람에 혈관 세그먼트의 개재을 포함한다. 이 경우 이식 거부는 Y 염색체 (남성에 존재하지만 여성되지 않음) 몇 주 동안 기증자 파생 된 평활근 세포를 유지하기 위해 충분히 나태한입니다 벌어진다 것을 거부 반응에 의해 인코딩 된 작은 조직 적합성 항원에 대해서만 전달됩니다. 두 번째 모델에 대한 수용체 부족 같은 긴장과 성별의 호스트 마우스로 야생 유형 C57BL/6J 마우스 기증자로부터 동맥 세그먼트를 개재 포함 IFN을-γ 마우스의 투여에 의해 다음 IFN-γ (마우스의 감염을 통해 전달 아데노 바이러스 벡터 간. 기증자와받는 사람의 쥐가 모두 동일한 변형 및 성별 있지만 호스트 유래 세포에 대한 수용체가 부족한 상태 기증자 평활근 세포는 사이토 카인에 대한 응답으로 증식이 경우에는 거절이 없습니다이 사이토 카인은 응답이다. 용기 기증자에 추가 유전자 변화를 교잡으로 두 모델은 GA의 진행에 특정 유전자의 효과를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 여기에, 우리는 우리의 마우스 GA 모델에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다.

서론

또한, 이식 혈관라고 이식 arteriosclerois (GA)은 전체 이식 혈관 나무 ^7의 확산, 원주 협착을 특징으로 장기 이식의 수 개월에서 수 년에 걸쳐 개발 병리학 적 병변이다. 초기 단계에 따라서 더 밀접하게 기존의 죽상 동맥 경화증에서 볼 협착을 닮은 동맥에서보다 분명 편심 및 초점 협착의 원인이 될 수 있습니다. 때문에 호스트 T 세포와 대 식세포의 침윤에 특히 세포 외 기질의 축적과 부드러운 세포가 근육처럼에 내막 확대에 이식 혈관 결과의 루멘 손실이 부적절하게 보상 이식, 호스트 또는 둘 모두 ^{5, 13, 19,} 유래 외부 혈관 리모델링 있습니다. 심장 이식에서 가장 임상 적으로 중요한 병변은 심 외막 및 심근 내 관상 동맥에있는 사람입니다. 궁극적으로, 관상 동맥의 GA는 허혈성 심장 고장의 원인이 될 수 있습니다. GA 늦게 심장 GR의 주요 원인입니다선미 손실. GA의 협착 강하게 그 병인에 이식 alloantigens에 대한 호스트 응답을 고발하고 우리가 만성 거부 ^3의 형태로 GA를 분류하는 선도 봉합 라인을 중지합니다. 그러나 동맥 손상의 다른 형태의 손상의 순 부담 증가를 통해 또는 강화 및 / 또는 동종 응답 변조에 의해 하나, GA의 위험을 증가시킬 수 있습니다. 이식 동맥의 내피 세포 (EC) 안....

프로토콜

마우스 이식 및 동계 이식 이식 모델

모든 동물 연구는 예일 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 동종 모델, 남성 4-5 주 이전 WT (C57BL/6J) 또는 IFN-γR-KO 생쥐에서 흉부 대동맥의 세그먼트는 엔드 - 투 사용하여 여성 수신자 8-12 주 오래된 WT의 복부 대동맥에 개재되었다 엔드 미세 문합 기술 (자세한 내용은 다음을 참조하십시오). 동계 이식 모델, 남성 4-5 주 오래된 WT 생쥐에서 흉부 aortae의 세그먼트가 남성의 복부 aortae에 개재 된 오래된 8~12주는 IFN-γR1-KO는 엔드 - 투 - 엔드 미세 문합 기술을 사용. 수술 후 1 주, 동물은 1 × 10 ⁹ PFU에서 Ad5.CMV 마우스 IFN-γ 또는 Ad5.CMV-LacZ (Qbiogene)와 IV를 접종 하였다. 혈청 마우스 IFN-γ 농도가 1에서 ELISA (eBioscience)로 측정되었고, 오주 아데노 바이러스 투여 후. 일부 동물은 BrdU의를 받았다희생로부터 2 주 (시그마 - 알드리치) 100에서 MG / kg SC.

엔드 - 투 - 엔드 미세 문합 기술 (비디오가이 부분에 대해 수행됩니다) :

결과

마우스를 이식 동맥 경화증 (GA) 모델 :이 모델에서는 남성 기증자의 대동맥 호스트에 표현 사소한 Y 항원 (남성 특정 작은 조직 적합성 항원 HY)에 alloreactive T 세포 매개 동종 반응을 유도하도록 여성의받는 사람에 이식되어 이식 ¹² 차례 차례로 T 다른 동종 이식 모델 ^2에서 관찰로 IFN-γ 드라이브 VSMC 확산 ^{20, 6, 8-10, 14} 셀 생산. 기증자 남성의 흉부 대동맥의 세그먼트는 수술 여성받는 사람의 복부 대동맥에 개재되고, 대동맥은 사주 이식 후 (그림 1A)에서 수확했다. 동맥 이식의 조직 학적 분석은 Elastica 밴 Gieson (EVG), H & E에 의해 수행 VSMC 마커 SMA 및 팬 백혈구 마커 CD45과 면역 염색 하였다. 더 이식 거부는 대동맥 이식 C57BL/6J 수컷 생쥐 사이에서 관찰되지 않았다. 여성 transplantat 남성백혈구와 VS.......

토론

설명 프로토콜은 마우스 GA 모델에 초점을 맞추고있다. 절차는 다른 이식 이식 모델에 적용 할 수 있습니다. 이러한 모델은 인간 답게 이종 이식 (즉, 인간의 관상 동맥 세그먼트 면역 결핍 생쥐의 인프라 신장 aortae에 개재), 그리고 급성 거부 마우스 GA 모델 (즉, 다른 유전자 변형 수신자로 한 유전자 변형에서 마우스 대동맥) 이용하실 수 있습니다. 우리의 기술 마우스 모델은 인간 GA 병변을 닫으 더 있습니다. 첫 번째 모델은 남성 마우스에서 동일한 근친 변형 (C57BL/6J)의 여성받는 사람에 혈관 세그먼트의 개재을 포함한다. 이 경우 이식 거부는 Y 염색체 (남성에 존재하지만 여성되지 않음) 몇 주 ^{2, 6을위한} 기증자 파생 된 평활근 세포를 보존하기 위해 충분히 나태한입니다 벌어진다 것을 거부 반응에 의해 인코딩 된 작은 조직 적합성 항원에 대해서만 감독 ^{, 8-10, 12, 14.} 두 번째 모델은 동맥 segme을 개재 포함IFN-γ (.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
C57BL/6J (H-2b)	Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)	000664	기증자(5주) 수혜자(8-12주)
케타민 염산염 주사	Hospira Inc.	NDC 0409-2053	스토리지 솔루션(50mg/ml) 작업 솔루션(5mg/ml)
자일라진 멸균 솔루션	Lloyd Inc.	NADA # 139-236	저장 용액 (100 mg / ml) 작업 용액 (1 mg / ml)
케토 프로펜	포트 닷지 동물 건강	NDC 0856-4396-01	저장 용액 (100 mg / ml) 작업 용액 -경구< > (0.027 mg / ml)
헤파린 나트륨	사젠트 Pharmaceticals	NDC 25021-400	저장 용액 (1000 U / ml) < br / > 작업 용액 (100 U / ml)
식염수 (멸균 0.9 % 염화나트륨)	CareFusion	AL4109
0.9% 염화나트륨 주입	호스피라	NDC 0409-4888-10	마취제
바셀린 안과 연고	Dechra 수의학 제품을	NDC 17033-211-38
요오드 준비 패드	Triad Disposables, Inc.	NDC 50730-3201-1
알코올 준비 패드	McKesson Corp.	NDC 68599-5805-1
현미경	Leica	MZ95
마이크로 가위	Roboz 수술 기구 (주)	RS-5693
봄 가위	F.S.T	15009-08	기증자 또는 수혜자의 대동맥을 절제하려면
Narrow Scissors	F.S.T	14088-10
바늘 홀더 / 집게	MICRINS	MI1542	바늘을 잡기 위해
미세 집게	F.S.T	11254-20
집게	F.S.T	11251-35
표준 패턴 집게	F.S.T	11000-12
집게	F.S.T	13011-12
랭커스터 눈 검경	Zepf 의료 기기	42-1209-07
마이크로 혈관 클립	Roboz 수술 기기 Co.	RS-6472
마이크로 클립 잠금 장치가 있는 집게	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5440
블랙 폴리아미드 모노필라멘트 봉합	ARO수술 기구 공사	Cat #T4A10Q07	10-0 봉합사, 바늘=70
블랙 모노필라멘트 나일론 봉합	Syneture (Covidien)	SN-1956	6-0 봉합사
부직포 Songes	McKesson Corp.	재주문 번호 94442000
1 ml 주사기	BD	REF 309659
3 ml 주사기	BD	REF 309657
10 ml 주사기	BD	REF 309604
18G 1 1/2, 피하 주사 바늘	BD	REF 305196
25G 7/8, 피하 주사 바늘	BD	REF 305124
27G 1/2, 피하 주사 바늘	BD	REF 305109
30G 1/2, 피하 주사 바늘	BD	REF 305106
Hearting Pad	Sunbeam	Z-1228-001
트리머	Wahl	9854-500
표 2. 특정 시약 및 장비.

제조하려면 Extra 적용 사 미크론 사