마우스 폐 삽관 법의 간단한 방법

요약

본 논문은 폐 기능 측정 또는 쥐가 복구 나중에 시간에 공부를 할 수 있습니다 폐 기지에 대한 쥐를 intubating의 striaghforward하고 효율적인 방법을 설명합니다. 절차는 직접 기관을 비춰 저렴한 fiberoptic 광원을 포함한다.

초록

폐 기능 측정을위한 쥐를 intubate하는 간단한 절차 제한된 숫자 나 값 비싼 동물과 세로 방향의 연구에 몇 가지 장점을 얻을 수 있습니다. 이 더 정기적으로 수행되지 않는 이유 중 하나는이 그것을 달성 할 수있는 방법을 설명하는 여러 출판 연구 임에도 불구하고, 상대적으로 어려운 것입니다. 이 논문에서 우리는이 삽관과 관련된 주요 장애물 중 하나 삽관 법의 전체 시간 동안기도를 시각화의를 제거하는 절차를 보여줍니다. 방법은 마우스 기관에 삽관 법의 캐뉼라를 직접 할 수있는 소개 자 역할을하는 0.5 mm fiberoptic 광원을 사용합니다. 우리는 적어도 몇 주 시간 과정을 통해 개인의 쥐 폐 기계를 측정하는이 절차를 사용하는 것이 가능하다는 것을 보여줍니다. 기술은 비교적 적은 비용과 전문 지식을 설정할 수 있습니다, 그리고 그것은 정기적으로 상대적으로 약간의 훈련을 수행 할 수 있습니다. 이 MAK해야합니다이 가능한 연구실은 정기적으로함으로써 이에 필요한 마우스의 수를 최소화하고 자신의 제어로 각 마우스를 사용하여 통계 전력을 증가, 개인 마우스의 종 방향 연구를 수 있도록,이 삽관 법을 수행 할 수 있도록 전자.

서론

1999 년 브라운 외이 있습니다. 마우스 폐 ¹ 삽관하는 방법을 설명하는 논문을 발표했다. 이러한 기술은 종 방향 연구 ² 개인 마우스에 반복 폐 기능 또는 bronchoalveolar 세척을하고있어서 상당한 유틸리티가 있습니다. 그 원래의 종이 있기 때문에, 마우스 삽관 ^3-9에 다른 방법을 설명했습니다 몇 가지 다른 논문도했습니다. 이러한 방법의 모든 성공적으로 사용할 수 있지만, 그들은 일반적으로 상당한 훈련 또는 비용이 필요합니다. 이러한 삽관과 주요 문제 중 하나는 삽관 법의 캐뉼라 방식으로 기관 중 삽입 가까워 것입니다, 캐뉼라 자체가 빛과 따라서이 가야 할 곳의 시각화를 차단합니다. 따라서, 삽입은 가장 중요한 시간에 맹인이된다. 이 논문에서 우리는 간단하고 저렴한 비용으로함으로써 상대적으로 약간의 훈련 또는과 성공적인 삽관을 확보,이 시각화 문제를 제거하는 방법을 보여줍니다경험.

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프로토콜

1. 절차 준비

하나는 먼저 획득하고 다음 항목을 준비해야합니다 :

1. 캐뉼라. 20-35g 마우스의 삽관을 위해, 우리는 긴 1 또는 1.5 인치, 20 게이지 IV 카테터를 (BD Insylte, 스파크, MD 또는 Jelco Optiva, Carlsbad, CA)을 사용합니다. 새로운 멸균 카테터는 각 마우스에 사용할 수 있지만, 카테터는 하루 아침에 70 %의 에탄올에 몸을 담글 수에 의해 살균 후 재사용 할 수 있습니다. 마우스의 인두 나 기관도는 멸균 장갑과 악기의 사용을 포함한 멸균 적절한 청결 절차이지만, 준수해야합니다.
2. fiberoptic 케이블. 우리 오빠 광학에서 0.5 mm 광학 케이블의 ≈ 70cm를 사용하지만, 길이가 중요하지 않습니다. 이 레이저와 길이로 케이블을 절단 한 후, 에지가 상대적으로 좌회전되기 때문에 섬유, 그 가장자리 부드럽게이 있는지 확인하는 것이 중요합니다, 그것은 tracheal 벽 피어스에 많은 노력을하지 않습니다. 그러나, 전s은 (는) 매우 간단 1,000 그릿 멀리 종이를 (의 비디오 및 그림 1의 데모를 볼 터치 끝의 가장자리에 끝에서 2cm에 대한 섬유를 개최 한 후 몇 초 동안 작은 원을....

결과

방법의 평가, 우리는 27.7의 평균 중량 (± SEM) ± 0.40 g없이 네 20주 세의 남자 BALB / C 마우스를 사용했습니다. 이전 ¹¹ 설명 된대로 폐 저항이 시스템을 사용하여 측정 된 곳들은, 다섯 경기를 연속으로 주를 공부했다. 각 마우스 IP 주입을 통해 케타민 (100 μg / g BW) 및 염분의 xylazine (15 μg / g BW)와 anesthetized했습니다. 위에서 설명한대로 그들은 그 다음 intubated되었습니다. 캐뉼라가 기관이 아닌 식도에 있는지 여부를 의심이있는 경우, 이것은 작은 치과 미러를 사용하여 유효성을 검사 할 수 있습니다. 냉동고에 거울을 유지하고, 카테터의 Luer 허브의 앞에 장소를 필요로 할 때. 카테터가 기관에 있으면 exhaled 호흡이 거울에 보이는 응축수를 형성합니다.

삽관 후, 우리는 마우스는 2 Hz의 속도와 0.2 ML의 갯벌 볼륨과 통풍이 된 환풍기 및 측정 폐 저항에 마우스를 연.......

토론

여기에 설명 된 절차는 몇 가지 장점이 있습니다. 먼저 장치 간단하고 상대적으로 저렴 .. 장치의 제조는 특별한 도구 나 비싼 장비가 필요하지 않습니다. 카테터의 사용은 또한 광원이 하나가 소개 자의 tracheal 개방에 접근로 tracheal 개방의 시력을 잃게 없다는 의미입니다 소개합니다. 0.5 mm의의 소개 자 사용은 큰 캐뉼라의 초기 삽입으로 발생할 수있는 충격을 최소화하는 역할을한다. 우리는 유사한 광학 프로브는 상업 벤더 (Braintree 과학, Braintree, MA)에서 사용할 수 여기에 유의하십시오. 그들의 장치는 배터리 전원 광원 및 광학 섬유를 사용합니다.

현재 작업에서 우리는 폐 역학의 반복 측정과 절차를 테스트하지만, 이러한 삽관 법은 그냥 간단하게 LPS ^(12)의 반복 배달 설명 된 바와 같이, 폐에 화학 물질이나 세포를 심어하는 데 사용할 수 있습니다. 또한,보다 원시적 인 삽관 법 절차와 사전 보고서는 개별 마우스

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
자료	회사	# 카탈로그를	논평
삽관 법의 캐뉼라	BD Insylte, 스파크, MD 또는 Jelco Optiva, Carlsbad, CA		1 인치 길이, 20 게이지 정맥 주사 (IV) 카테터
광섬유 케이블	에드먼드 광학, 배 링턴, NJ	# NT02-542	약 2 피트 0.5-mm 광섬유의 길이 (통신 학년 플라스틱 섬유). 기관에 삽입되는 섬유 끝의 가장자리가 부드럽게 1000 그릿 모리 용지에 몇 초 동안 팁을 드래그 ≈ 2cm 끝에서 섬유를 개최하고 작은 원을 만들어 둥글게해야합니다.
광원	Volpi	NCL-150	우리는 훨씬 낮은 와트와 150 W 할로겐 광원, 이와 동등한 광원을 사용하지만사용할 수 있습니다.
실리콘 고무 마개			# 1 실리콘 고무 마개는이 예제에 사용되는 광원에 맞는. 다른 광원는 다른 크기를 필요로 할 수 있습니다.
작은 실리콘 고무 튜브	콜 - 팔머	EW-96410-13	실리콘 고무 튜브의 ≈ 1.5 cm 피스 (0.8 내부 직경 4mm 외경)
각진 지원 스탠드			우리는 플렉시 글라스에서 constucted되어 있지만, 스레드 또는 와이어 거의 수직 각도로 마우스를 잡아 부착 할 수 있습니다에 대한 어떤 자료를 사용할 수 있습니다.