신생아와 성인 중추 신경계에서 배양 소교 세포

요약

우리는 신생아 대뇌 피질 성인 척수 가능한 미세 아교 세포의 효율적이고 신속한 분리 / 문화 방법을 설명합니다. 대뇌 피질의 미세 아교 세포의 해부 및 도금은 초기 박리 다음 장소 ~ 10 일을 복용 이후 미세 아교 수확으로 90 분 이내에 수행 할 수 있습니다.

초록

미세 아교 같은 같은 CNS 개발의 성숙, 다발성 경화증, 척수 손상 등의 생리 및 병리 과정에서 중요한 역할을 가지고, 중추 신경계 (CNS)의 주민 대식 세포와 같은 호텔입니다. 미세 아교 세포가 활성화하고 MS 또는 뇌졸중으로 인한 허혈성 뇌 손상에서 볼 축삭 손상과 같은 신경 손상이나 자극에 의​​해 행동을 모집 할 수 있습니다. CNS의 이러한 면역 멤버도 아닌 병적 인 상태에서 시냅스 가소성의 역할을하는 것으로 생각된다. 우리는 다른 CNS 세포의 종류와 세포 배양 파편의 존재 등의 혼란 변수를 최소화하면서 가능한 세포 수를 극대화하기위한 것이다 신생아 및 성인 조직에서 배양 미세 아교 세포에 대한 프로토콜을 사용합니다. 우리는 전체 프로세스가 가능하고 재현하게 크고 쉽게 뚜렷한 CNS 구성 요소 (예를 들어, 피질 척수 세그먼트), 사용합니다. 성인 세포의 사용많은 병리는 주로 출생 후 척수에 영향을 미칠 공부로들, 신생아 뇌 미세 아교 세포의 사용에 적합한 대안이다. 이러한 문화 시스템은 또한 어느 억제 또는 아교 활성화를 촉진 할 수 화합물의 효과를 테스트하는 데 유용합니다. 미세 아교 활성화가 성인 CNS의 질병의 결과를 형성 할 수 있기 때문에, 신생아 및 성인 미세 아교 세포는 배양하고 연구 할 수있는 생체 시스템이 필요하다.

서론

미세 아교 세포에 가장 가까운 구조와 기능 ¹ 말초 대식 세포를 닮은 CNS의 주민 면역 세포입니다. 그것은 최근 출생 미세 아교 세포가 원시 골수 전구 세포에서 파생 출생 조혈 전구 세포는 성인 뇌의 ² 미세 아교 세포의 근원이라는 기존 개념을 upending, 배 발생의 여덟 번째 날 이전에 생성 된 것을 증명하고있다. 그들은 여러 신경 질환의 주요 역할을 담당하고 신속하게 프로 염증 또는 항 염증성 사이토 카인에게 ³ 출시하여 감염이나 부상에 응답 할 수 있습니다. 따라서 미세 아교 세포는 질병의 진행에 영향을 조작 할 수 CNS의 독립형 장치를 포함. 분리하는 강력하고 재현 방식과 문화 신생아 또는 성인 미세 아교 세포를 개발하는 것은 미래의 연구에 중요합니다.

미세 아교 세포는 뇌 병변의 수가 중요한 선수로 알려져있다. 더 최근에, ROLES는 해마 ^{1, 4의} 이가있는 이랑의 미세 아교 세포 phagocytose 초과 신경 전구 세포의 정상적인 두뇌 발달과 기능에있는 셀에 등장하고있다. 미세 아교 세포는 또한 MS와 같은 척수에 영향을주는 여러 가지 신경 학적 상태, 신경 병증 성 통증, 척수 손상 ^5-7를 조절 할 수 있습니다. 척....

프로토콜

1. 해부 (0 일)

1. 저체온증을 가진 P0-2 마우스 새끼로 마취를 유도. 조직을 소독하기 위해 70 % 에탄올에 담가 Kimwipe와 새끼의 머리를 닦습니다.
2. 10cm 배양 접시 당 4 새끼을 사용하여 가위로 머리를 제거합니다. 얼음처럼 차가운 행크의 버퍼를 포함하는 페트리 접시에 머리를 놓습니다.
3. 눈 소켓을 통해 곡선 집게를 사용하여 머리를 고정하고 조심스럽게 똑바로 microforceps와 두개골을 덮고있는 피부를 제거합니다.
4. 구멍을 뚫거나 손상 피질을에주의를 사용하여 직선 microforceps와 두개골 뼈를 제거합니다. 가장 효과적인 방법은이 영역이 삭제됩니다로서, 머리의 기지에 위치한 소뇌 근처부터 제거를 시작하는 것입니다.
5. 작은 주걱으로 두뇌를 제거하고 얼음처럼 차가운 행크의 버퍼를 포함하는 새로운 배양 접시에 (4) 머리를 놓습니다.
6. 이 시점에서 모든 단계 microforceps를 활용들이 상자에서 수행됩니다ction의 현미경. 두뇌의 복부 측면에서 시작 소뇌을 잡고 조직을 고정하고 중뇌의 양쪽에 두 개의 작은 절개를합니다. 피질이 지역에서 중뇌 덮개로 조직을 통해 모든 방법을 절단하지 않도록주의해야합니다.
7. 조심스럽게 두 피질에서 한 조각의 중뇌와 소....

결과

휴식 및 활성화 미세 아교 세포의 예는 그림 1에 표시됩니다. 미세 아교 세포는 도금 후 24 시간을 시각화 (그림 1a)과를내는 (휴식) 형태를 전시 하였다. 프라이밍 시약에 노출되면 세포와 같은 아교 형태의 변화 그람 음성 세균의 세포벽 성분 인 lipopolysaccharide (LPS) 결과 (그림 1b)가 활성화 될.

도금 세포를 계산의 예는 그림 2에 표시됩니다. 세포 파편의 존재로 인해, DAPI Fluoromount은 (대신 판 블루)의 세포 현탁액의 동일한 볼륨에 추가 및 ^4에 설명 된대로 계산 ^{셀 13} 혈구에 배치되었다. DAPI 양성 세포는 형광 현미경을 사용하여 시각화 하였다. 현재 셀 (그림 2)의 정확한 수를 촉진 시야 설정에 사용합니다. ^5<.......

토론

미세 아교 세포는 중추 신경계에게 정상적인 기능뿐만 아니라 다양한 병리에 염증 반응을 조절. 미세 아교 세포에 의하여 기능적인 시냅스 리모델링 정상적인 뇌의 항상성 ^(15)의 유지 보수에 연루되어있다. 신경성 놓기 동안 그들은 해마 ^{4, 16} 이가있는 이랑의 신경 전구 세포의 정리에 참여할 수 있습니다. 따라서, 미세 아교 세포가 여러 개별 기능을 갖고 걸쳐 개발 및 성인의 광대 한 넓은 길을 다룰 것이다 신생아와 성인 미세 아교를 공부하는 문화 시스템을 개발하는 것이 필요하다. 우리는 성인 척수 및 신생아 뇌 문화 미세 아교 세포에 신속하고 효율적인 방법을 설명했다. 우리는 70 % 성상 세포로 구성된 나머지 비율이 미세 아교 세포와 100 %에 접근 신생아 미세 아교 조제품의 순도했다 어른 세포의 준비를 얻을 수 있었다.

역할 그쪽으로 주어진T는 성상 세포는 미세 아교 ^17-19의 활성화 상태를 조절, 그것은 문화.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
EDTA, 5mM	Invitrogen	15567-028
Lidocaine, 60mM	Sigma	L-5647
Trypan Blue	Sigma	T8154
Trypsin/EDTA	Cellgro	25-052-CI
DMEM, 1X	Cellgro	10-017
피루브산 나트륨	Cellgro	25-000-Cl
Gentamycin Sulfate	Biowittaker	17-518Z
35 x 10mm 조직 배양 접시	Falcon	353001
Poly-D-Lysine, 100 μ g/ml			희석 1:20
HBSS, 1X	Cellgro	20-023-CV