DNBS / TNBS 유도 대장염은 다른 염증성 장 질환의 한테 진찰 Pathobiology을 연구하는 저렴한 방법을 제공합니다. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 생쥐와 쥐 대장염을 유도하는 DNBS의 성공적인 응용 프로그램을 설명 하나는 철저하게 호스트 매개 장 반응을 연구 할 수 있습니다.
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방법 논문
DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
크론 병 및 궤양 성 대장염 등의 염증성 장 질환 (IBD)는, 긴 유전 적 기초와 연결되었습니다, 그리고 더 최근의 미생물 및 환경 에이전트에 면역 반응을 개최했다. 디 니트로 벤젠 술폰산 (DNBS) 유도 성 대장염 하나는 스트레스와 다이어트, 잠재적 인 치료의 효과 및 기전 장내 염증과 점막 손상으로 IBD 관련 환경 트리거의 발병 기전을 연구 할 수 있습니다. 이 논문에서, 우리는 쥐의 DNBS 유도 대장염 대장 점막의 염증 반응에 대한식이 N-3, N-6 지방산의 효과를 조사 하였다. 모든 래트 [홍화유 (SO), 카놀라유 (CO), 또는 어유 (FO)], 셋째 주 전에 노광 DNBS을 직장 내하는 지방산의 다른 유형의 예외와 동일한 규정 식을 공급 하였다. 직장 내 에탄올 주어진 대조군은 DNBS 처리 쥐, 반면 공급 지질 다이어트 모든 로스, 5 일간의 공부에 무게를 얻고 계속FO 및 CO 쥐에 투여 한 48 시간과 72 시간으로 SO 쥐에 투여에 의해 유의 한 체중 감소를 보여 가진 t 무게. 체중 증가는 72 시간 포스트 DNBS 후 재개, 5 일 포스트 DNBS에 의해, FO 그룹은 SO 또는 CO 그룹보다 높은 체중을 가지고 있었다. 대장 섹션은 5 일 포스트 DNBS 처리가 초점 궤양, 토굴 파괴, 술잔 세포 고갈, 다이어트 그룹 사이 정도에 차이 급성 및 만성 염증 세포의 점막 침윤을 보였다 수집. SO 공급 그룹 CO 뒤에 가장 심각한 손상을 보였고, FO는 조직 손상의 온화한 정도를 보여 개 먹이. 마찬가지로, 대장 폐장 내 myeloperoxidase (MPO) 활동, 호중구 활동의 마커 FO 공급 쥐가 상당히 낮은 MPO 활성을 갖는, SO CO 먹인 쥐 다음에 유의하게 높았다. IBD의 병인에서 다이어트의 영향을 결정하기 위해,이 프로토콜에 기술 된 이러한 결과는, DNBS 유도 된 대장염의 사용을 보여준다.
서론
염증성 장 질환 (IBD)은 설사, 체중 감량 및 복부 통증의 증상의 결과, 위장 (GI) 관에 만성 재발 성 염증에 의해 특징된다. 궤양 성 대장염 (UC) 및 크론 병 (CD)은 IBD의 두 가지 주요 형태이며, 위장관 내에 염증의 위치에 의해 구별 될 수있다. UC 환자에서 염증은 일반적으로 항문을 포함하고 단지 표면 점막에 영향을 미치는 변수 범위에 대한 결장까지 연속적으로 연장된다. 그것은 주로 회장 및 맹장 영향을 미치지 만 대조적으로, CD는, GI 트랙트의 어떤 부분에 영향을 미칠 수있다. 전층 염증이 자주 육아종과 연관 (fistulizing) 질병을 협착 (fibrostenotic) 및 / 또는 관통 선도로 CD가 자주 나타난다. IBD의 원인이 애매 남아 있지만, 잘 IBD는 호스트 사이의 면역 체계, 유전 적 감수성과 respon을 상호 작용을 포함, 인성 것을 허용한다환경과 미생물 요인 SES.
현재까지, IBD의 다른 모델은 UC와 CD의 특성 다양한 임상 조직 학적 및 면역 반응을 표시하는 제안되었다. 가장 일반적으로 사용되는 모델은 유전자 변형 마우스 (IL-2, IL-10, SAMP / YIT), 감염에 의한 모델 (시트로 박터의 rodentium, 살모넬라 티피 뮤 리움), 입양 전송 모델 ....
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프로토콜
동물을 대상으로 한 절차 브리티시 컬럼비아 대학의 기관 동물 케어 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 설명 동물 관리 지침을 따르십시오.
대표적인 결과는 흰쥐에서 제출 될 것입니다 동안이 프로토콜에 언급 된 절차는 쥐와 생쥐 모두에 대해 설명한다.
1. DNBS 및 직장 내 관리의 준비
- 쥐 DNBS의 직장 점안를 들어, 갓 50 % 에탄올 DNBS/250 μL의 15 ~ 30 밀리그램을 준비합니다. 마우스의 경우, 50 % 에탄올 DNBS/100 μL의 2-6 밀리그램을 준비합니다. 참고 : 각 시설에서 관리 할 수있는 정확한 DNBS 농도를 최적화합니다. 수컷 스프 라그 - 돌리 래트 및 C57BL / 6 마우스, 그러나 다른 마우스 및 래트 균주 사용될 수는 DNBS 대장염의 유도를 위해 바람직하다. 대조군은 단 하나, OMI 수를 에탄올의 효과를 관련 경증 또는 결석으로 50 % 에탄올로 처리 한 마우스 및 래트가 사용될 수있다연구 12이 그룹의 포함을 t.
- 끝으로 고정 (마우스 - - 쥐 또는 PE-50 PE-90) 폴리에틸렌 카테 테르가 19 G 바늘로 1 ML의 주사기를 연결합니다.
- 가볍게 가열 ....
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결과
DNBS 쥐 (스프 라그 - 돌리) 또는 마우스 (C57BL / 6)의 도전은 일반적으로 때로는 대변에 혈액의 존재와, 일시적인 체중 감소와 설사가 발생합니다. 그러나, 유전,식이 요법과 장내 미생물 등의 요인이 DNBS 유도 성 대장염에 대한 감수성을 수정할 수 있습니다. 따라서 동물 실험에 포함 된 로컬 파생 또는 동물의 공급 업체로부터의 주문도, 같은 기관에서해야한다. 모든 동물은 신중하게 체중 감량 및 대장염 동안 고통을 고통의 증상의 정도에 대해 모니터링해야한다.
홍화유, 캐놀라 유 및 어유 DNBS 대장염의 결과 심각도에 평가되었다 :도 1-4에 제시된 결과는 세 식물 오일의 효과가있는 실험을 나타낸다. 군 간의 통계적 차이는 데이터 분석 소프트웨어 프로그램을 사용하여, 사후 Tukey의 테스트 하였다 ANOVA를 사용하여 측정 하였다. <0.05의 AP 값 consi이었다중요한 dered.
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토론
이 프로토콜에서 설명 DNBS 모델은 IBD의 다양한 양상을 연구하기 위해 이용 될 수있는 귀중한 저렴하고 재현성 대장염 모델이다. 쥐나 생쥐로 직장 내 투여시, DNBS는 다형 핵 세포의 전층 침투하고 지배적 인 NF-κB 의존 TH1 활성화 등의 다양한 조직 학적 기능의 측면에서 인간의 크론 병을 닮은, 대장에 염증과 조직 손상의 상당한 정도를 유도한다.
이 모델은 스트레스, 우울증, 다이어트뿐만 아니라, 장용 신경계의 참여, 부상 - 수리 메커니즘, 전층 염증 및 임상 치료로 IBD에 영향을 미칠 것으로 생각 다양한 요인을 연구하는 데 사용되었습니다. DNBS 모델은 마우스 및 쥐에서 TNBS에 의한 염증에 대한 적절한 대안과 같은 DSS로 대장염의 다른 일반적으로 사용되는 화학 모델보다 저렴한 대안을 제공합니다. 이 P에 설명 된 단계rotocol 하나는 성공적으로이 모델을 실행 할 수 있습니다.
대장염 13.......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.
감사의 글
이 작품은 캐나다 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC)과 크론과 캐나다의 대장염 재단 (CCFC)에서 KJ로 운영 교부금에 의해 지원되었다. VM은 CFRI 친목 및 GB 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR)에서 대학원 재학에 의해 지원됩니다. BAV는 창자와 간 장애 소아 소화기 및 KJ의 소아 IBD 연구 및 캐나다 연구 의자 재단 (CHILD) 의자는 어린이와 어린이 및 가족 연구소 (CFRI) 임상 과학자 상 프로그램에서 지원하는 수석 임상 과학자와 어린이입니다 브리티시 컬럼비아 대학.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1ml 주사기 | BD Biosciences | 309659 | |
| 19G 바늘 | BD 생명과학 | 305187 | |
| 폴리에틸렌 튜빙 PE-50 | BD Biosciences | 마우스의 직장내 투여를 위한 | 427517 |
| 폴리에틸렌 튜빙 PE-90 | BD Biosciences | 427519 | 쥐의 직장내 투여를 위한 |
| DNBS | MP Bio | 150959 | |
| 눈물 젤 | Novartis | 63601662596 | |
| 10% 포르말린 | 피셔 | 5F93-4 | |
| 워밍 패드 | Kent Scientific | TPZ-0510 | |
| 에탄올 | 피셔 | A-962.4 | |
| 헥사데실트리메틸-암모늄 브로마이드 | 시그마-알드리치 | H5882 | |
| 인산칼륨 완충 용액 | 시그마-알드리치 | 79628- | |
| o-Dianisidine dihydrochloride | 시그마-알드리치 | D3252 | |
| 30% H2O2 | Sigma-Aldrich | 31642 | 과산화수소 |
| 분광도계 | BioRad | Benchmarker Plus | |
| 광학 현미경 | Zeiss | Axio Image.Z1 | |
| 데이터 분석 소프트웨어 프로그램 | GraphPad 소프트웨어 | GraphPad Prism 소프트웨어 버전 4.00 | www.graphpad.com |
참고문헌
- Perše, M., Cerar, A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. Biotechnol, J. . B. iomed , (2012).
- Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression. Gastroenterology. <....
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재인쇄 및 허가
