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방법 논문

임신 중 쥐의 간 조직에서 지방산의 작곡 변화를 분석하는 가스 크로마토 그래피의 사용

30.4K 조회수

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DOI:

10.3791/51445

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2014년 3월 13일

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이 논문에서

요약

임신 산모 조직의 지방산 조성에 상당한 변화를 이끈다. 지질 쥐 사이의 식별 및 개별 지질 클래스에있는 지방산의 정량 임신 중에 다양한 높고 낮은 지방 다이어트를 공급 할 수 있도록 가스 크로마토 그래피를 통해 얻을 수있다.

초록

기체 크로마토 그래피 (GC)은 높은 정확도 및 재현성 결과를 수득 조직, 세포 및 혈장 / 혈청에서 지질의 지방산 콘텐츠를 식별하고 정량화하기 위해 사용되는 매우 중요한 방법이다. 대사 및 영양 연구에서 GC는 허용 개입을 다음과 지방산 농도 또는 임신 등의 생리적 상태의 변화시 변화의 평가. 아미노 실리카 카트리지를 사용하여 고체상 추출 (SPE)가 허용 트리 아실 글리세롤, 다른 인지질 및 콜레 스테 릴 에스테르 (CE)를 포함한 주요 지질 클래스의 분리. SPE와 함께 GC 다양한 높고 낮은 지방 다이어트를 공급했다 처녀 임신 한 쥐의 간에서 CE 분획의 지방산 조성의 변화를 분석하는 데 사용되었다. 간 CE의 오메가 -3와 오메가 -6 지방산 함량에 따라 상당한 다이어트 / 임신 상호 작용 효과는 임신 한 여성은식이 manipulat에 ​​다른 반응을 나타내는 있습니다보다 이온 처녀 여성 사이에서 볼 수있다.

서론

기체 크로마토 그래피 (GC)의 보급이나 생리적 비만과 같은 조건 (및 당뇨병과 같은 관련 질환) 또는 임신 3 중에 지질 풀 및 세포막 1,2으로 지방산의 혼입을 식별하고 정량화하기 위해 사용 노포 기법 - 5. 또한 식품의 유형과 지방의 양을 분석에 적합하다. 실험 사료의 특성뿐만 아니라, 식품 업계가 규정을 준수 함을 보장하는 경우에 유용합니다. 예를 들어, GC는 라벨링가 정확하고 규제가 6,7에 부착되도록하는 등 건강 보조 식품 등의 제품 내의 아이덴티티 및 지방산의 양을 확인하기 위하여 사용될 수있다. 지방산의 분석은 질병과 건강식이 변화의 영향 및 생리적 상태 8의 변동 효과 지질 대사에 가치있는 통찰을 제공 할 수있다. 임신 중에 샘플을 연구하는 GC의 사용은 중요한 제공하고 있습니다지방산과 복합 지질 항상성 3의 변화에 대한 정보를 제공합니다.

크로마토 그래피 분리에 앞서, 지질은 일반적 클로로포름과 메탄올의 혼합 용매에서의 지질 용해도를 사용하여 샘​​플로부터 추출된다. 염화나트륨 9,10 단계를 포함하는 수성 및 유기 지방질로 혼합물의....

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프로토콜

1. 동물 절차

  1. 모든 동물의 작업은 홈 오피스 동물 (과학적인 절차) 법 (1986)에 따라 수행되어야한다.
  2. 일부일처 번식에 의해 오래 십주 세의 Wistar 쥐 메이트, 및 질 플러그의 모양에 의해 임신을 확인합니다. 임신 중 하루 1로 이것을 기록하고 실험적인 다이어트를 시작. 처녀 여성의 경우, 개별적으로 쥐를 수용하고, 실험적인 다이어트를 시작.
  3. 20 일을위한 실험 사료를 공급 한 후 자궁 경부 전위 다음 CO 2 질식하여 쥐를 안락사.
  4. 복강을 노출하고 격막에 간을 연결하는 인대, 복부의 앞쪽 벽, 위, 십이지장을 절단하여 간을 절제하는 해부 집게와 가위를 사용합니다. C. -80 ° 저장하기 전에 PBS의 간을 세척하고 액체 질소에 동결

2. 총 지질의 제조 추출 9

  1. molecul 추가AR 체는 '건조'용제를 만들기 위해 모든 용제 (솔벤트 용기의 1 / 10을 채우기 위해). 흄 후드 내에서 모든 솔벤트 작업을 수행하십시오.
  2. 약 100 mg의 냉동 간을 잘라 무게. 얼음 양동이에 튜브에 조직을두고 0.8 ㎖를 얼음 냉각 된 0....

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결과

이 방법의 성공은 정확하게 프로토콜을 다음에와 '노이즈'와 크로마토 그램에 표시 할 수있는 오염을 줄이기 위해 청정 용매 및 시약을 사용하는 방법에 따라 달라집니다. 오염 된 샘플은 곡선 아래 면적 계산의 정확도를 저하 분석 할 더 많은 도전이다. 프로토콜이 분명 대칭, 잘 정의 된 피크와 최소한의 배경 소음이 성공적으로 크로마토 그램을 따라하는 경우 (그림 3)을 얻을 수 있어야합니다. 오염이 발생한 경우에는 추가 크로마토 그램 피크를 보여주고,도 4에 도시 된 바와 같이 비대칭 (비뚤어진) 피크를 나타낸다. 콜레스테롤이 제거되지 않는 프로토콜 5에 설명 된대로) (그림 1 참조 (CE에서 파생 된 FAME를 실행하는 경우 무료로 콜레스테롤에서 오염이 발생합니다.

준비된 교정 믹스의 사용은 일의 FAME의 식별 가능전자 샘플. 교정 믹스 크로마토 그램은도 .......

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토론

기체 크로마토 그래피는 지방산 분석을 위해 사용하는 정확한 방법이며, 그 재현성이 높은 임상 분석에 적합한이 기술을 판단. 적절한 GC 컬럼은 가능한 열 정지상, 컬럼 길이 및 내경의 극성의 변화를 갖는, 또한 지방산의 식별을 가능하게하기 위해 사용되어야한다. 분석 방법에있어서 용융 실리카 모세관 컬럼의 사용은 우수한 열 안정성과 높은 표면 불활성 양호한 해상도 8에 의한 유지 시간의 재현성을 제공한다.

이 프로토콜 내에서 중요한 단계는 하위 및 상위 단계의 수집 단계 (프로토콜 2.7 및 4.8 단계) 있습니다. 그것은 올바른 위상이 많이가 원하지 않는 단계의 오염없이 가능한 수집하는 것이 중요합니다. 샘플의 오염 물질의 존재는 바람직하지 크로마토 그래피 결과가 유도된다도 2에 도시 된 바와 같이. SPE 동안 CE를 수집하는 경우에는 카트리지 열이 샘플 TAG에서 CE의 성.......

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공개 사항

저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

감사의 글

저자는 쥐를 대상으로 한 연구에 Meritxell 로미오 - 나달의 기여를 인정하고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
메탄올Fisher ScientificM/4056/17'주의' 흄스 - HPLC 등급
클로로포름Fisher ScientificC/4966/17'주의' 흄 - HPLC 등급
BHT시그마- 알드리치W218405'주의' 먼지 흄 - 무수
NaCl시그마- 알드리치S9888무수
헥산Fisher ScientificH/0406/17'주의' 연기 - HPLC 등급
빙하 아세트산시그마- 알드리치695084주의' 화상 - 99.85%
황산시그마- 알드리치339741'주의' 화상 - 99.999%
탄산칼시그마- 알드리치20961999% ACS 시약 등급
중탄산칼륨시그마- Aldrich23720599.7% ACS Reasgent grade
Ethyl acetateFisher Scientific10204340'주의' 흉내 - 99+% GLC SpeciFied
TolueneFisher ScientificT/2300/15'주의' 흄크
디에틸 에테르Sigma- Aldrich309966'주의' 흄
질소(무산소) 실린더BOC44-w'주의' 압축 가스 - 폭발 위험
아미노프로필 실리카 SPE 카트리지애질런트12102014카트리지 - 비드 질량 100mg
실리카겔 SPE 카트리지질런트14102010카트리지 - 비드 질량 100mg
분자 seivesSigma- Aldrich334324펠릿, AW-300, 1.6mm
유리 파스퇴르 피펫Fisher ScientificFB50251
'륨 애

참고문헌

  1. Browning, L. M., et al. Incorporation of eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids into lipid pools when given as supplements providing doses equivalent to typical intakes of oily fish. Am. J. Clin. Nutr. 96 (4), 748-758 (2012).
  2. Cao, J., Schwichtenberg, K. A., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y.

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