마우스의 초음파 유도 경 흉부 심근 내 주입

요약

심장 초음파 유도 경피적 심근 주입 뮤린 마음에 유전자 전달 제 또는 세포의 전달을위한 효율적인 신뢰성 있고 타겟팅 양상을 나타낸다. 이 프로토콜에 설명 된 단계에 따라, 운전자는 신속하게이 다재 다능 한, 최소 침습 기술에서 경쟁력이 될 수 있습니다.

초록

심혈관 질환의 생쥐 모델은 병리 생리 학적 메커니즘을 조사하고 잠재적 인 재생 치료를 탐험 중요하다. 심근 주입을 포함하는 실험은 현재 개흉술을 통해 직접 수술 접근에 의해 수행된다. 관상 동맥 결찰 같은 다른 실험 조작의 시간에 수행 될 때 편리하지만, 심근 배달 침습 절차에 대한 필요성이 전위 실험 설계를 제한한다. 지금까지 초음파 해상도와 고급 비 침습적 영상 방식을 개선, 그것은 정기적으로 초음파 유도 경피적 심근 내 주입을 수행 할 지금 가능하다. 이 양상은 효율적이고 안정적​​으로 심근의 대상 지역에 에이전트를 제공합니다. 이 기술의 장점은 수술 사망률의 회피, 선택적으로 초음파지도하에 심근의 지역을 대상으로 시설, myocardiu에 injectate을 제공 할 수있는 기회를 포함복수, 소정의 시간 간격 m. 연습 기술로, 심근 내 주입의 합병증은 드문와 마우스를 신속하게 마취에서 회복 정상적인 활동으로 돌아갑니다. 이 프로토콜에 설명 된 단계에 따라 기본 심 초음파 검사 경험이있는 운전자는 신속하게이 다재 다능 한, 최소 침습 기술에서 경쟁력이 될 수 있습니다.

서론

심장 질환은 매년 600,000 사망 ^한 회계, 미국에서 남성과 여성 모두 사망의 주요 원인이다. 심혈관 질환의 생쥐 모델은 병리 생리 학적 메커니즘을 조사 및 치료 가능성을 둘러보기에 매우 중요하다. 유전자 치료 벡터의 심근 전달, 세포 RNA를 변성하고, 심장 질환에 대한 그들의 ^2-7 치료 가능성의 다른 치료제 허가 조사 줄기. 현재 마우스 모델 ⁶ 치료제의 심근 전달을위한 제한된 옵션이 있습니다. 직접적인 시각화 하에서 심근 내 주입 흔히 사용하지만, 흉골 또는 개흉술을 요구하고 심장의 노출 된 영역에 한정되어있다. 이러한 LAD 결찰 같은 다른 실험 조작의 시간에 수행 될 때 편리하지만, 심근 배달 침습 절차에 대한 필요성이 전위 실험 설계를 제한하고 소개절차와 뉴 부가 효과 (예, 개흉술에 의한 섬유화). 바이러스 벡터의 경피적 심낭 전달보고되었지만 사이트 및 치료제의 분포는 균일하지 않으며 ⁸ 제어하는 것이 곤란하다. 주입 물질 있지만 효율적이고 재현 관상 전달보다 균일 분포 경피적 관상 동맥 주입 결과 뮤린 모델에 도전하고있다.

여기에, 우리는 초음파지도하에 치료제의 최소 침습, 운영자 제어 타겟팅을 할 수있는 닫힌 가슴 심근 내 ....

프로토콜

모든 기술 단계는 보스턴 아동 병원의 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행되었다.

1 준비

1. 심근 내 주입을위한 최적의 고정 센서의 위치가 해부학 및 기능 평가를 서술을위한 최적의 표준 뷰를 생성하지 수 있으므로, 이전에 주입 프로토콜을 시작으로 심 초음파에 의한베이스 라인 심장 해부학 및 기능 평가를 수행합니다.
2. 사출 설치는도 1a-1c에 표시됩니다. 피복 빈 바늘 주사기를 놓고, 위쪽으로 경사 배향은, 주사기 클램프 (도 1c 참조)와 검사 헤드 클램프 초음파 변환기 프로브를 고정 (도 1b 참조). 스캔 헤드 클램프 공 잠금 조인트 (도 1b)를 느슨하게하고 바늘의 축에 평행하게 정렬되도록 트랜스 듀서 방향을 조작. 스캔 - 수정스캔 머리 클램프 볼 잠금 관절을 조여 헤드 위치.
   참고 : 성인 쥐에 주사를 들어, 1 / 2.5 cm 길이 30 G 바늘이 최적입니다. 기밀 주사기는 작은 볼륨의보다 정확한 제어 (5 ~ 10 μL)에 사용할 수있는 동안 한 ML의 주사기는 더 큰 볼륨을 사용할 수 있습니다.
3. 전체가 함께 머....

결과

블루 염료 또는 형광 마이크로 스피어와 쥐의 심근 내 주입

에반의 파란색 염료를 주입 연습을 위해 유용합니다. 곧 주사 후, 중간 유두근 수준에서 심근 침윤 청색 염료, 마우스를 안락사 및 주입 청색 염료의 위치를 시각화 할 심장을 제거.도 5를 성공적으로 주입의 일례를 나타낸다 (도 5a는, 영역 밀폐 )의 점선으로. 에반스 블루 염료는 몇 시간 내에 조직을 씻어 것입니다. 주사 부위의 마킹 더 영구적 들어, 주사 부위에서 무기한 남아 형광 미립자를 사용할 수있다.도 5C-5F는 전방 및 후방 좌측 심실 벽에 다수의 분사 대상을 나타낸다.

심근에 아데노 바이러스 주입

초음파 가이드에 의해 심근에 아데노 바이러스의 전달을 시각화하려면D 주사, 우리는 포유 동물의 심근 특정 쥐 트로포 닌 T 발기.......

토론

생물 의약품은 혈류를 통해 직접 심근 내 주입, intrapericardial 주사, 또는 간접적으로 관리하여 심근에 전달 될 수있다. 심근 경색 모델에서 최근 세포 기반 치료 임상 시험 injectate ^12-14의 전달에 개흉술 방식을 설명했다. 심근 치료 적 개입의 성공에 중요 인자는 전달 경로의 선택에 달려있다. 생물의 높은 로컬 도즈는 심근 ^15,16 전달함으로써 달성된다. 직접 시각화에서 심근 내 주입은 가장 간단한 방법이며 심근 ⁽¹⁷⁾ 내에서 타겟 관리를 위해 수 있습니다. 이 타겟 ^{(18) 심근을} 노출 흉강 및 심낭의 개구를 필요로하지만,이 방법은 또한 가장 침습적이다. 같은 dorsal 표면과 마음의 일부는, 쉽게 시각화하고이 방법을 사용하여 주입되지 않습니다. proced의 침입우레 또한 잠재적 인 치료 투약 스케줄을 제한. 여기에, 우리는 이환율과 수술 개흉술 노출의 제약없이, 경피적 심근 내 주입에 의해 안전하게 초음파지도하에.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Vevo 2100 초음파 이미징 시스템	Visualsonics
Vevo 통합 레일 시스템 III	Visualsonics
Microscan MS400 트랜스듀서	Visualsonics
Microscan MS550D 트랜스듀서	Visualsonics
PrecisionGlide 바늘	BD	305128	30 G x 1 in/2.5 cm
1 cc 슬립 팁 주사기	Exel International	26048	또는 동급
Gastight 50 μ l 유리 주사기	Hamilton	1705
Trypan 블루 스테인 (0.4%)	Gibco	15250	또는 동급
Isoflurane	Baxter	AHN3640	또는 동급
Aquasonic 100	Parker Laboratories	(01-08)	또는 동급
의 폴리스티렌 미세구(적색 형광등)	Life Technologies	F-8842	또는 동급

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