전방 십자 인대 (ACL)의 부분적인 눈물을 복구하는 패치 향후 애플리케이션의 경우, 인간의 ACL 유래 세포는 체외에서 확장 및 조직 공학적 지지체에 성장 재건 과정 중에 얻은 조직에서 분리되었다. 세포 접착 및 형태학이어서 지지체 표면에 생체 적합성을 확인하기 위하여 실시 하였다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
ACL에 부상을 활성 개인에 일반적으로 발생하는 문제입니다. 기능과 안정성에 악영향을 생 역학적 결함이 관절 내 무릎 인대 리드 부분도 눈물. 열 변형, 단일 번들 수리, 완전한 재건, 네이티브 인대의 손상 부분의 재건 : 부분 ACL 눈물의 치료를 위해 현재 옵션은 보존 적, 보수적 인 경영에서 다음과 같은 여러 수술 옵션에 이르기까지 다양합니다. 연구는 거의 모든 경우, 관리는 지속적으로 우수한 것으로에 대한 하나의 방법을 증명하고있다, 많은 경우에 환자는 지속적인 불안정과 다른 동반 질환을 설명하기 위해 계속합니다.
본 연구의 목표는 부분적으로 찢어 ACL의 수선에서 구현 될 수있는 조직 공학적 패치의 개발에 활용 가능성 셀 소스를 식별하는 것이다. 새로운 프로토콜은 patie에서 파생 된 세포의 확장을 위해 개발 된전방 십자 인대 재건술을받은 국세청. 세포를 분리하기 위해 ACL 재구성 동안 획득 다진 hACL 조직은 콜라게나 제 용액에서 분해시켰다. 확장은 10 % 태아 소 혈청 (FBS) 및 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신 (P / S)이 보충 된 DMEM/F12 배지를 사용하여 실시 하였다. 세포는 그 다음 DMSO, FBS와 팽창 매체로 이루어진 동결 배지에서 -80 º C의 또는 액체 질소에 보관 하였다. 해동 후, hACL 유래 세포는 조직 공학적 지지체, PLAGA (폴리 락트산 - 코 - 글리콜 산) 및 제어 조직 배양 폴리스티렌 (TCPS)에 접종 하였다. 7 일 후에, SEM은 제어 TCPS 대 PLAGA 셀룰러 밀착성과 비교하기 위해 수행 하였다. 세포 형태는 면역 형광 염색법을 사용하여 평가 하였다. SEM (주사 전자 현미경) 현미경은 세포가 성장하고 PLAGA 및 TCPS 양면에 부착하고 7 일째하여 전체 표면에 컨 플루 언트 된 것을 보여 주었다. 면역 형광 염색이 아닌 일반 강조 형태 학적을 보여 주었다양면에 알 패턴. 이 기술은 ACL 재생 및 재건에 응용 프로그램에 대한 약속한다.
서론
전방 십자 인대 (ACL)은 무릎 부상 일반적으로 관절 내 인대이다. 약 20 만 (ACL) 부상은 미국에서 매년보고됩니다. 정형 외과 재건 수술 1,2,3,4에 대한 ACL 부상 OPT가 발생 환자의 75 % 이상. 외과 적 수술은 종종 인해 본질적으로 가난한 치유의 가능성 (3)에 표시됩니다. 전방 십자 인대 재건술은 일반적으로자가 이식 또는 동종 이식 건을 이용하여 수행됩니다. 그들은 높은 성공률 및 차 봉합 수리, 다른 치료 옵션을 자랑으로자가 이식과 동종 이식은 재건을위한 황금 표준을 나타냅니다, 최대 94 % 5,6,7의 실패율을 보였다.
ACL의 부분 눈물이 모든 ACL의 눈물 (8)의 28 %에 10 %를 나타냅니다. 전향 적 연구에서, 노이스 등. 더 ACL의 절반 이상에 영향을 미치는 부분 눈물을 가진 환자의 50 %가 후 ACL 부족을 완료하기 위해 비 진행 추정수술 적 치료 9. 다른 연구는 지속적인 불안정을보고하고 자신의 전 상해 활동 레벨 9,10,11,12,13로 돌아갈 수의 환자 미만 30 %와 기능을 감소. 치료 옵션이 제한됩니다 보수적 인 양식, 나머지 ACL의 열 수축, 또....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
1. 수술 불러
참고 : IRB 승인이 ACL 재건 수술하는 동안 ACL 그루터기를 수집 얻었다. 사용되는 ACL 그루터기는 일반적으로 수술 폐기물로 폐기되었다으로 IRB 면제가 주어졌다. 20 명의 환자는 ACL 그루터기를 수집하는 데 사용되었다.
- 환자에게 기관의 프로토콜에 따라 전신 마취 및 수술 전 항생제를 관리 할 수 있습니다.
- 지혈대를 적용하고 수축기 혈압 이상 100 ㎎의 팽창.
- 앙와위에서 환자를 놓다. 5mm의 포털에 대한 30 ~ 45 °의 굴곡에 무릎과 수평 외측 절개를 30 °에서 suprapatellar 주머니로 관절 경 트로 카메라를 삽입합니다.
- 일상적인 진단 관절 경을 수행합니다.
- 노치를 입력하고 찢어진 ACL에 막 활액막을 debride.
- ACL 그루터기를 식별 할 수있는 4.5 mm 면도기 및 애블 레이터를 사용합니다.
- 여러 개의 SPE를 수집하는 직선 쓴 짱구를 사용나머지 ACL 그루터기에서 cimens.
- 멸균 용기에 생리 식염수에서 샘플을 유지한다.
- 디코딩 및 실험실 시설에 최종 전달을 위해 병리에 견본을 보낸다.
- 환자를 복....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
외과 검색, 조직의 소화와 인간의 전방 십자 인대 (hACL) 유래 세포의 분리를위한 작업 모델은 그림 1에 나타내었다. 외식에서 마이그레이션 및 T-25 플라스크에 부착 된 세포를. 이 세포는 3 일 동안 배양 한 후 광학 현미경 (그림 2)에서 가시화되었다. 합류 단층은 하루 7을 얻었다. 건강, 생존 세포의 존재가 hACL 유래 세포를 성공적으로 검색 및 문화를 지적했다.
PLAGA 및 TCPS의 표면에 세포 부착은 SEM을 통해 정 성적으로 측정 하였다. 각 고분자 표면에 hACL 유래 세포의 3 전시의 부착과 증식을 그림. 휴대 합류는 PLAGA 및 TCPS 관찰되었다.
세포 형태학 및 접착 분석은 면역 형광 염색법을 통해 결정되었다. β-액틴 염색 hACL 파생 된 세포가 준수 시연D 및 PLA.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
이 hACL/2D 발판 연구의 주요 목적은 부분 ACL 눈물의 차 수리를 증가시키기 위해 패치에서 얻은 세포를 사용하는 것이 었습니다. 부분 ACL 눈물의 비수술 적 관리는 고정, 보조기, 진보적 인 재활 프로그램, 정기적 인 후속 평가 13,16,17의 짧은 기간을 포함 할 수있다. 그러나 많은 연구는 운동 선수의 보존 적 치료가 가난한 결과와 실패와 관련되어 있음을 보여줍니다. 버클리 등 알. 중간 추시 부분 ACL의 눈물로 25 명의 환자를 평가하고 환자의 단지 44 %가 자신의 전 상해 수준에서 운동을 다시 시작하고, 72 %가 활동 관련 증상 8보고 된 것으로 나타났습니다. 박 등 알. 5.3 년의 평균에 대한 격리 된 부분 ACL의 눈물 (56) 환자를 따라 환자의 30 %는 사전에 부상 활동 10을 다시 시작했다. Fritschy 등. 부분 ACL 눈물을 가진 43 명의 환자 (18)는 5 년 후속으로 파.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.
감사의 글
저자는 시작 기금 및 서던 일리노이 대학, 의과 대학에서 외과 연구 보조금의 부서를 인정하고 싶습니다; 및 기념 의료 재단 보조금.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 페트리 접시 | Fisher Scientific | 08-757-103C | |
| 인산염 완충 식염수(PBS) | Fisher Scientific | BP3994 | |
| 콜라겐분해효소 | Gibco | 17018-029 | 4 °에 저장; C |
| DMEM/F-12 | Cellgro | 10-092-CV | 4 °에 보관;C. 37 °에 따뜻하게 보관; C 사용 전 수조. |
| 소태아 혈청 (FBS) | Gibco | 10082 | -80 ° 저장; C |
| 페니실린/스트렙토마이신 | Lonza | 17-602E | 4 ° 매장; C |
| 원심 분리기 튜브 - 15 ml | Corning | 430790 | |
| T-25 플라스크 | BD Falcon | 3013 | |
| Trypsin-Versene 혼합물 | Lonza | 17-161E | 4 °C. 37 °에서 따뜻하게 보관; C 사용 전 수조. |
| DMSO | Fisher Scientific | BP231-100 | 가연성 액체. 피부, 눈 및 호흡기 자극을 유발할 수 있습니다. |
| 극저온 바이알 | Corning | 430489 | |
| PLAGA | Purac Biomaterials | Purasorb PLG8523 | Store at -80 ° C |
| TCPS 디스크 | Fisher Scientific | 12-545-82 | |
| 디클로로메탄 | Fisher Scientific | AC36423-0010 | 암 위험이 있습니다. 건조하고 서늘한 곳에 보관하십시오. |
| Bytac 종이 | Saint gobin 성능 플라스틱 | 1420652 | |
| 섬광 바이알 | Fisher Scientific | 03-339-21G | |
| 소 혈청 알부민 (BSA) | 시그마 Aldrich | A7906 | 4 &# 176 저장; C |
| Tween | Fisher Scientific | BP337-500 | |
| 마우스 항-베타;-액틴 항체 (1° Ab) | Sigma Aldrich | A5441 | -20 ° 매장; C |
| 염소-항-마우스 항체 (2° Ab) | 세포 신호 | 4408 | -20 °에 저장된다. C |
| Hoechst 염료 | Sigma Aldrich | 14530 | -20 °에 저장; C |
| : 글리세롤 | Fisher Scientific | BP229-1 | |
| 글루타르알데히드 | Fisher Scientific | BP2547-1 | 흡입 및 삼키면 독성이 있습니다. 모든 노출 경로에서 화상을 입힙니다. |
| Hexamethyldisilazane | Fisher Scientific | AC43085-1000 | 가연성 액체 및 증기. 모든 노출 경로에서 화상을 입힙니다. |
| 멸균 가위 | McKesson | 25-716 | |
| 원심분리기 | Eppendorf | 5804R | |
| 광학 현미경 | Olympus | CK40 | |
| 수조 | Thermo scientific | 2845 | |
| Vortex | Labnet | VX-200 | |
| 유리 페트리 플레이트 | fisher Scientific | S31473 | |
| Acu-punch | 아큐덤 Inc. | P1225 | Acu-Punch는 12mm 디스크 |
| Cacodylate buffer | Sigma Aldrich | 97068 | 가연성 액체, 발암 물질 및 자극성을 |
| 오스뮴 테트라옥사이드 | Sigma Aldrich | 201030 | 고독성 |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | T8787 | 삼키면 유해 |
| Decon Labs | 2705 | 열, 스파크, 화염 및 기타 형태의 발화로부터 멀리하십시오. | |
| 일반/지역 마취 | Amphastar 제약 | 1% 리도카인, 0.25% 부피바카인, 유도 및 유지용 마취제 | |
| 항생제 | Hospira | 0409-0805-01 | Ancef 1 g i.v. |
| 관절경 투관침 | 스미스 및 조카 | ||
| 관절경 카메라 | 스미스 및 조카 | ||
| 관절경 그래스퍼와 쓴 | Arthrex | ||
| 4.5mm 면도기 | Arthrex | ||
| 간섭 나사 | Arthrex | 스테인리스 스틸 나사 | |
| 스퍼터 코터 | Polaron | E5400 |
참고문헌
- Johnson, R. J. The anterior cruciate ligament: A dilemma in sports medicine. Int J Sports Med. 3, 71-79 (1982).
- Owings, M. F., Kozak, L. F. Ambulatory and inpatient procedures in the United States, 1996. Vital Health Stats. 13, 1-119 (1998).
- ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
