에 미세 소관 역학을 측정하는 plusTipTracker 소프트웨어를 사용 운송에 필요한 정보 미국 교통부 성장 콘

Alina Stout; Salvatore D'Amico; Tiffany Enzenbacher; Patrick Ebbert; Laura Anne Lowery

doi:10.3791/52138

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방법 논문

에 미세 소관 역학을 측정하는 plusTipTracker 소프트웨어를 사용 운송에 필요한 정보 미국 교통부 성장 콘

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DOI:

10.3791/52138

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2014년 9월 7일

Alina Stout¹ , Salvatore D'Amico¹ , Tiffany Enzenbacher¹ , Patrick Ebbert¹ , Laura Anne Lowery¹

¹Department of Biology, Boston College

이 논문에서

요약

MATLAB 기반, 오픈 소스 소프트웨어 패키지, plusTipTracker은 미세 소관 역학 정량화 형광 - 표지 + 팁 이미지 시리즈를 분석하는데 사용될 수있다.

초록

미세 소관 (MT) 플러스 - 엔드 추적 단백질 (+ 팁) 이동 단말의 증가 플러스 끝에 지역화 및 MT 역학 ^1,2를 조절한다. MT 역학 분석에 가장 잘 알려지고 널리 이용 + 팁 중 하나는 모든 MT 성장 플러스 단부에 결합 최종 결합 단백질, EB1,이며, 따라서, MT 중합 ^한 마커이다. 성장 콘 내의 EB1 동작의 많은 연구는 개별적인 이동 단말 ^1-3를 분석 시간과 바이어스 된 컴퓨터 보조 손 추적 방법을 이용했다. 우리의 접근 방식은 고해상도, 배양 된 배아 성장 콘 ^5에서 태그 EB1의 라이브 이미지의 취득 다음 소프트웨어 패키지, plusTipTracker ^사를 사용하여 MT 역학의 글로벌 매개 변수를 정량화하는 것입니다. 이 소프트웨어는 형광 표지 된 팁 + 영화 자동 감지, 추적, 시각화 및 분석을 결합 MATLAB 기반, 오픈 - 소스, 사용자 친화적 인 패키지. 여기서는 plusTipT를 사용하기위한 프로토콜을 제시배양하여 Xenopus laevis의 성장 콘에서 형광 표지 + 팁 혜성의 분석을위한 racker. 그러나,이 소프트웨어는 다양한 세포 유형 ^6-8 MT 동력학을 특성화하는데 사용될 수있다.

서론

이 방법의 목표는 정량적 인 미세 소관 (MT)에 관한 정보 플러스 - 엔드 추적 단백질 (+ 팁) 성장 콘 생활의 역 동성을 획득하는 것입니다. MT + 팁은 이동 단말 ^9,10의 플러스 끝에 지역화 단백질의 그룹입니다. 그들은 중합, 재앙, 그리고 구조의 비율을 포함하여 MT 동적 불안정성 ^(11)의 매개 변수를 조절하는 다양한 기능을 수행합니다. MT 역학을 분석 한 잘 사용하는 방법은 성장 MT에 특이 적으로 결합 플러스 종료 ^1,12을 + 팁 EB1의 동작을 추적하는 것입니다. EB1은 성장 MT에 여러 개의 다른 단백질을 모집하는 것으로 알려져 플러스가 종료 MT 성장과 재앙 주파수 ^{(15, 16)를} 모두 촉진, ^{13, 14,} 그리고 최근 MT 성숙 요인 ^15으로 설립되었습니다됩니다.

성장 콘 내에서 MT 역학의 많은 연구 EB1의 localizati로, 시간이 ^{1 ~ 3} 위에 EB1-GFP 역학의 변화를 측정하기 위해 손으로 추적 방법을 활용 한MT에게 플러스 단부 MT 중합 용 마커로서 사용될 수있다. MT 성장을위한 프록시로서 EB1-GFP 혜성 검사 용 주요 이점은 MT 역학 심지어 상....