Method Article

마우스 신장 이식 : 동종 이식 거부의 모델

DOI:

10.3791/52163

⸱

October 11th, 2014

 ,  ,  ,  ,  , 
1MRC Centre for Inflammation Research, The Queen's Medical Research Institute, The University of Edinburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기에서는 거부 반응의 면역학을 연구하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 제시된 수술 모델은 짧은 수술 시간과 간결한 기술을 보여주었습니다. 기증자-수용자 균주 조합에 따라 이식된 신장은 간질성 섬유증 및 세뇨관 위축으로 정의되는 급성 세포 거부 반응 또는 만성 동종이식 손상이 발생할 수 있습니다.

Abstract

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인간의 이식된 신장에 대한 거부 반응은 여전히 이환율과 사망률의 주요 원인입니다. 신장 이식의 마우스 모델은 인간 신장 이식에서 발생하는 기술적 및 병리학적 과정을 밀접하게 복제합니다. 신장 이외의 기관에서 동종 거부 반응에 대한 마우스 모델이 존재하고 기술적으로 더 실현 가능하지만, 예를 들어 심장 및 신장 동종 이식편에서 거부 반응의 시간 경과가 특정 균주 조합에서 크게 다르다는 것과 같이 서로 다른 기관이 서로 다른 거부 반응 모드와 역학을 유도한다는 증거가 있습니다. 이 모델은 기술적 어려움에도 불구하고 여러 가지 이유로 매력적인 도구입니다. 근친 마우스 균주 하플로타입이 잘 특성화되어 있기 때문에 기증자와 수혜자 조합을 선택하여 MHC 클래스 I 및 II 유전자좌에 이식하여 급성 동종이식 거부 반응을 모델링할 수 있습니다. 반대로, 유사한 일배체형을 가진 균주 사이에 이식함으로써, 동종이식, 신장에서 간질성 섬유증 및 세뇨관 위축이 발생하는 만성 과정을 유도할 수 있습니다. 수술 시간을 줄이고 수술 용이성을 개선하기 위해 수술 기법을 수정했지만, 모델을 충실하게 복제하기 위해서는 여전히 학습 곡선을 극복해야 합니다. 이 연구는 수술 절차의 요점을 제공하고 이 기술을 확립하는 과정을 돕습니다.

Introduction

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이 길이와 수명이의 질 모두 향상을 제공하는 세계적으로 말기 신부전 환자를위한 혁신적인 치료되었다 이후 신부전의 치료에 성공적으로 신장 이식은 먼저 일란성 쌍생아 일 사이 1955에 기술되었다. 그러나 장기 이식 생존율은 만성 동종 이식 손상 3의 결과 병리학 적 과정의 무리에 의해 방해되었다.

인간에 ​​이식 된 신장의 거부는 immunosupporessive 요법에서 상당한 개선에도 불구하고 사망률의 주요 원인이 남아있다. 신장 이식 마우스 모델을 개발하는 목적은 밀접 인간 신장 이식 4에서 발견 과정과 병리를 복제하는 것이다. Skoskiewicz 외는. 제 1973 5 신장 이식 마우스 모델을 설명했다. 미세 첨단 기술이 요구되고 있지만, 그것은 유용한 t이며여러 가지 이유로 OOL : 마우스 게놈이 잘 특징 및 실험 방법 및 마우스 연구에 사용할 기술의 큰 다양성이있다.

신장 이식 마우스 모델을 이용하여 많은 그룹은 그러나 실험 4의 기간 동안 현장에 남아있는 다른 연구와 수신자 마우스의 기본 신장의 우리의 기술 방법 하나, 생명 ....

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Protocol

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해당 국가 및 지역의 기관 윤리는 동물 실험을 수행하기 전에 장소에 있어야합니다. 받는 사람 외과 의사가 2.1 2.8로 수행하면서 특히 영국에서 다음과 같은 실험은 기증자의 의사가 수행해야이 microsurgeons가 동시에 작동 할 수있는 동물 (과학적인 절차) 법 1986에 따라 수행되었으며, 1.1-1.16 다음 3.1-3.5 단계 . 하나의 연산자를 들어 단계가 순서대로 수행 할 수 있습니다.

1 기부자 준비

참고 : 여기에 제시된 절차는 기증자 C57BL / 6 BM12 사람과받는 사람 20g보다 더 큰 체중과 8~16주 된 세 사이의 C57BL / 6 수컷 마우스입니다. 그러나이 과정은 재현성 마우스 균주의 다양한 수행 될 수있다. 대표적인 결과 섹션에 제시된 데이터는 C57BL / 6, C57BL / 6 BM12 및 BALB / c 마우스로부터 얻은 것입니다.

  1. 행동 절차 날기목적과 g 멸균 수술기구 및 소모품 (오토 클레이브)는, 가능한 한 무균 영역을 유지한다. 이 외과 의사를 사용할 수있는 경우받는 사람의 준비와 동시에 기증자 준비를 수행합니다.
  2. medetomidine (0.5 ㎎ / ㎏)와 케....

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Results

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신장 이식 거부 반응은 이식 된 신장 (그림 2)의 methacarn 고정 파라핀 조직 절편의 조직 학적 분석에 의해 평가 될 수있다. 신장 허혈 재관류 손상에서 동계 쥐의 결과와 신장의 Isograft 이식 그러나 사주에 의해 세뇨관 복구 및 기본 신장 조직 학적으로 비교할 수있다. 급성 거부 반응은 신장 실질 조직 전반에 걸쳐 확산 단핵 세포 침윤이 간질, 사구체와 세뇨관을 포함,이 일주 내 BALB / c를받는 사람에 C57BL / 6 신장 이식에 의해 모델링 될 수있다. 만성 동종 이식 손상이 C57BL / 6받는 사람에 이식 C57BL / 6 BM12 신장에서 모델링 할 수 있습니다, 이것은 간질 섬유화 점진적인 세관 손실로 구성된 인간의 병리에서 볼 수있는 일반적인 기능을 발생합니다. 고성능 필드 (X200 배율) 당 총 세관의 수는 (Fi 접속 기능 네프론 질량의 정량화 할 수 있습니다gure 3), 세관의 손실이 거부로 인해 관상 부.......

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Discussion

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동맥 문합을 수행하는 가장 잘 설명 된 방법은 수신자 대동맥으로 엔드 - 투 - 사이드 방식으로 이어져 신동맥와, 도너의 원위 대동맥을 사용하는 것이다. 우리는 더 편리한 것으로 우리가 믿는 인간 신장 이식으로 수행 'Carrell 패치'미러링 유사한 대동맥 패치의 사용을 설명한다. 기증자와받는 사람의 수술 시간의 문헌보고가 드문 드문 있지만 우리는받는 사람 대동맥에 엔드 - 투 - 사이드 기증자의 대동맥 대신받는 사람의 대동맥에 대동맥 패치를 사용하는 것이 바람직하다 생각합니다. 패치를 이용하면 모든 척추 도너 대동맥을 해부 분기 할 필요성을 부정하고, 또한 시간이 자연스럽게 제외 패치 anastomosing 같이, 개별적으로 결찰하는 데 걸리는.

이 모델을 달성하기 위해 중요한 단계는 동맥 패치 문합 내에서 신장 동맥 이외의 다른 동맥 내강이 없음을 확인하기 위해 돌보는 포함 그들은미세 혈관 클램프가 제거 될 때 누출됩니다. anastamoses를 구성 봉합.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자가 공개하는 게 없다.

Acknowledgements

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신장 연구 UK에서 자금, 에딘버러 및 장기 이식의 유럽 사회의 외과 의사의 왕 대학은이 연구를 지원했다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
수술 도구
, 둔기, 해부 가위정밀 과학 도구  14072-10피부 절단용
곡선형 Castoviejo 가위Fine Science Tools15017-10조직 절단용
스프링 가위– 스트레이트Fine Science Tools15000-08봉합사 절단용
톱니 집게 1x2 치아Fine Science Tools11021-12
2 x Fine Tip 집게(Dumont No.5)Fine Science Tools11251-20
각진 파인 팁 집게 (Dumont No. 5/45)Fine Science Tools11253-25무딘 해부용
Curved Fine Tip 집게 (Dumont No.7)Fine Science Tools11273-22혈관 주위를 통과하는 데 유용
Curved Crile HaemostatFine Science Tools1300-04
잠금 장치가 있는 마이크로 클립 애플리케이터Fine Science Tools18056-14
2 x Micro serrefines 스프링 너비 2mm, 턱 길이 4mmFine Science Tools18055-04미세 혈관 클램프
2 x Colibri 3cm 와이어 견인기Fine Science Tools17000-03
잠금 장치가 있는 Castroviejo 바늘 홀더Fine Science Tools120660-01
상처 클립 애플리케이터Fine Science Tools12031-07
7mm 상처 클립Fine Science 도구12032-07수술
장비
OPMI 피코 현미경Carl ZeissS100
열 소작 장치 미세 팁Geiger150A
열 전자 패드Cozee Cumfortn/a
Euroklav 23-SMelagn/aAutoclave
일회용 장비
7/O 실크 브레이드 봉합사 Pearsall30514
10/O Dafilon (폴리아미드) 봉합사B-Braun 
6 / O Vicryl (plygalectin)EthiconW9537
일반 베벨 바늘, 1 인치, 21GBection, Dickinson and Company305175요관 아나스타마시스
용 일반 베벨 바늘, 5/8 인치, 25G벡션, Dickinson and Company305122
일반 베벨 바늘, 1/2 인치, 30G벡션, Dickinson and Company304000
인슐린 바늘 1ml, 29GBection, Dickinson and Company324827
인슐린 바늘 0.3ml, 30GBection, Dickinson and Company324826
1ml 주사기 슬립 팁Bection, Dickinson and Company300184
5ml 주사기 슬립 팁Bection, Dickinson and Company302187
Wypall 종이 면봉Kimberley-ClarkL40오토클레이브에 의한 살균
면모Johnson and Johnson해당 없음오토클레이브에 의한 살균
플레인 드레이프GuardianCB03오토클레이브에 의한 살균
세포 배양 접시 60mm x 15mmCorning Incorporated430166
디스펜싱 핀B-BraunDP3500L/413501NaCl 0.9%Re-agents
및 약물
(Lacri-Lube) 백색 소프트 파라핀 57.3%, 미네랄 오일 42.5% 및 라놀린 알코올 0.2%Allergan Ltd21956GB10X
(Videne) 포비돈-요오드 10%Ecolab LtdPL 04509/0041
(Vetalar V) Ketamine hydrochloridePfizer Animal HealthVm 42058/4165100mg/ml 용액 (용량 200mg/kg)(
Domitor) Medetomidine hydrochloride Orion PharmaVm 06043/40031mg/ml (용량 0.5mg/kg)(
Vetergesic) Bupernorphine hydrochloride Alsto Animal HealthVm 00063/40020.3mg/ml (투여량 0.05mg/kg)(
안티세단) 아티파메졸 하이드로코라이드Orion PharmaVm 06043/40045mg/ml (투여량 2mg/kg)
University of Wisconsin SolutionBelzer Bridge to Life투여량 약 500마이크로리터/마우스
NaCl 0.9%BaxterFKE1323
Heparin Sulphate비독점N/A5000units/ml (투여량 5units/mouse)
, 후 7-10일 제거G1118099봉 과 함께 사용

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guild, W. R., Harrison, J. H., Merrill, J. P., Murray, J. Successful homotransplantation of the kidney in an identical twin. Trans. Am. Clin. Climatol Assoc. 67, 167-173 (1955).
  2. Wolfe, R. A., et al.

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