우리는 뼈 에어컨 매체 (BCM)을 준비하고 시험 관내에서 활동을 테스트하는 방법을 여기에 대해 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
자가 뼈 이식 널리 구강 악안면 외과, 정형 외과 및 외상에 사용됩니다. 자가 뼈 이식은 누락 된 뼈를 대체하지, 그들은 또한 골 재생의 복잡한 과정을 지원합니다. 자가 이식이 유리한 동작은 세 가지 특징에 기인한다 : osteoconductivity, osteogenicity 및 osteoinductivity을. 그러나, 다른 측면이있다 : 뼈 골 재생에 관련된 중간 엽 세포를 대상으로 할 수 성장 인자를 포함하여 분자의 무수 해제 접목. 골 이식의 분비 속성은 뼈 에어컨 매체 (BCM)를 사용하여 시험 관내에서 공부하실 수 있습니다. 여기에서 우리는 열 처리 또는 탈회를 시행 기본 돼지 피질 뼈에서 뼈 에어컨 매체를 준비하는 방법에 대한 프로토콜 및 뼈를 제시한다. 세포는 직접 BCM에 노출 또는 콜라겐 멤브레인, 이전 BCM 적신 같은 생체 재료,에 접종 할 수있다. 우리는 체외 bioassa에 대한 예를들TGF-β 조절 유전자의 발현에 중간 엽 세포와 YS. 제시된 프로토콜은 추가 골 재생시 뼈 이식의 분비 효과를 밝혀 및 재건 수술의 폭 넓은 분야의 중개 연구에 대한 경로를 엽니 다 장려해야한다.
서론
자가 뼈 널리 기형의 결과, resective 수술, 재건 외상 수술, 이전 임플란트 식립 1, 2에로 발생한 결함을 연결하는 데 사용됩니다. 뼈 이식은 이식 통합의 과정을 지원하는 방법의 생물학적 원리를 이해하는 것은자가 이식이 재건 수술의 황금 표준으로 간주하는 이유를 이해하기 만 키가 아닌, 그것은 또한 뼈 대체 (3)의 개선 된 디자인에 생체 공학입니다. 그러나 이식 통합은 빠른자가 뼈와 뼈가 4,5 대체 비교된다. 따라서, 골 재생을 지원하기 때문에 효과적인 자가골을 분자 세포 메커니즘을 나타 내기 위해 필수적이다.
통합 프로세스의 6,7을 지원하는 것으로 간주되는자가 이식의 세 교과서의 특성이 있습니다. 첫째,자가 뼈가 성장하는 새로 형성된 뼈에 대한 지침을 제공, osteoconductive입니다결함에. 둘째,자가 뼈는 조골 세포 (8)로 분화 할 수 중간 엽 세포를 포함 즉, 골 형성이다. 매트릭스 내에 안치 뼈 형태 형성 단백질 유사 성장 인자 연골 또는 골 형성 intramembranous (9)의 처리를 개시 할 수있다 셋째, 자가골은 골 유도된다. 또 다른 측면이있다 : 갓 준비 뼈 칩은 "뼈 에어컨 ....
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프로토콜
1. BCM 준비
- 가능한 한 신선한 지역 정육점에서 돼지 턱을 얻습니다. 회사 표면에 턱을 놓고 전체 두께 플랩이있는 부드러운 조직을 떠나거나 뼈에 부착 된 골막하지 않도록 특별한주의를 기울이고 놓습니다. 흐름 후드에서 작동 할 필요없이 깨끗한 환경에서 작업.
- 전체 두께 플랩이 해제되면, 협측에서 뼈 칩을 수확 뼈 스크레이퍼를 사용합니다. 뼈 스크레이퍼 날카로운되어 있어야합니다. 단단히 뼈 스크레이퍼를 처리하고 긴 운동은 뼈를 수집로. 작은 그 1mm를 뼈 칩을 폐기하십시오.
- 기본 뼈 칩을 유지하기 위해, 1 %의 항생제와 그들을 밖으로 건조를 허용하지 않습니다 항진균제 보충 둘 베코의 수정 이글의 중간 (DMEM)와 10cm 직경의 플라스틱 접시에 직접 뼈 칩을 놓습니다.
- 열처리의 영향을 평가하기 위해, 대상 뼈 칩은 80 ° C에서 30 분 동안 저온 살균 또는121 ℃에서 20 분 동안 오토 클레이브.
- , 탈회의 영향을 평가 4 ℃에서 4-6 시간 동안 1 M HCL에 뼈 칩을 흔들 pH가 중성이 될 때까지 배양 배지로 반복 세척합니다.
- 새로운 플라스틱 접시에 1 % 항생제와 항진균제로 보충 된 10 ml의 신선한 DMEM 당 뼈 칩 5 g의 총을 놓습니다. <....
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결과
뼈 조정 배지를 신선한 돼지 뼈 칩으로부터 제조된다. 공정의 일반 개요 BCM을 준비하고 BCM 생체 물질과 조합을 사용은도 1 및도 2에 각각 도시되어있다. BCM 준비 동안, 최종 BCM의 품질에 영향을 미칠 수있는 짧은 움직임 또는 매우 작은 뼈 칩만큼 움직임 큰 뼈 칩을 얻는 것이 중요하다. ADM, PTX3, IL11, IL33, NOX4 및 PRG4 (도 3) : BCM의 품질 BCM 타겟 유전자의 유전자 발현을 분석하여 제어 될 수있다. ADM과 PTX3 0.4 배 아래로 아래로 조절하고 200 배에 규제까지-IL11, IL33, NOX4 및 PRG4이 될 수 있습니다. 구강 섬유 아세포 표시된 수준에서 BCM의 표적 유전자를 발현하지 않는 경우, 세포의 상태를 확인하거나 새로운 턱에서 새로운 BCM을 준비합니다. 콜라겐 장벽 막에 시드 구강 섬유 아세포에서 BCM 대상 유전자의 발현에서 4 표시에게 전형적인 결과를
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토론
뼈 에어컨 매체는 골 재생의 초기 단계 동안 뼈 이식의 공개 활동을 반영한다. 여기에 설명 된 프로토콜이 골 재생에 관여하는 세포의 다른 유형의 반응을 연구하기 위해 적응 될 수있다. 또한, 프로토콜 처리 된 뼈 또는 뼈 충전제로부터의 조건화 배지를 제조 할 수있다. 다양한 네이티브 및 처리 뼈에서 방출 요인 : 방법을 수행하고 간단한 개념에 의존하기 쉽다. 방법 BCM을 이해하는 것은 중간 엽 세포가 이식 통합 및 골자가 이식의 속성에 대한 자세한 내용을 보려면하는 데 도움이 될 수 있습니다에 영향을줍니다. 우리는 또한 세 가지 주요 계통으로 증식, 이동 및 분화에, 중간 엽 세포의 유전자 발현에 네이티브 11, 15 및 14, 20에서 처리 된 뼈 수득 BCM의 영향에 대한 지식을 축적이 개념에 근거; 조골 세포, 지방 세포와 연골 세포 (11). BCM 또한 TA에 용량을 조사 하였다파골 세포 (13)의 변조에 대해, 예를 들어 조혈 세포를 r.......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다. 조르디 Caballé - 세라노는 치과 연구 및 교육, 바젤, 스위스의 재단에서 장학금을 받았다.
감사의 글
저자는 Catherine Solioz의 능숙한 도움에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 돼지 하악골 | 부처 | ||
| 뼈 스크레이퍼 | Hu-Friedy | PPBUSE2/36 | |
| 항생제 및 Antimicotics | All life Technologies | 15240-062 | |
| 콜라겐 멤브레인 (Bio-Gide) | Geistlich | ||
| 태아 송아지 혈청 | Invitrogen Corporation | 16030074 | |
| DMEM | Invitrogen Corporation | 21885-025 | |
고순도 RNA 분리 키트 | Roche | 11828665001 | |
| 전사자 우선 스트랜드 cDNA 합성 키트 | Roche | 4379012001 | |
| Primers | Microsynth | ||
| SYBR Green (for Q-RT-PCR)로 | 슈 | 4673484001 | |
| PBS | Roche | 11666789001 |
참고문헌
- Buser, D. Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation. Journal of dental research. , (2013).
- Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. augmentation procedures in implant dentistry. The International jour....
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재인쇄 및 허가
