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방법 논문

마우스 해마에 올리고머 아밀로이드 - 베타의 정위 주입

18.7K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/52805

⸱

2015년 6월 17일

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology and Cell Biology, Columbia University Medical Center, 2The Taub Institute for Research on Alzheimer's Disease and the Aging Brain, Columbia University Medical Center, 3Department of Neurology, Columbia University Medical Center

이 논문에서

요약

여기에서는 아밀로이드-베타의 직접 입체성 뇌 주입을 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 방법론은 뇌 뉴런에 대한 아밀로이드-베타의 단기적인 영향을 해결하기 위한 대안적인 생체 내 마우스 모델을 제공합니다.

초록

알츠하이머 병은 고령화에 영향을 미치는 신경 퇴행성 질환이다. 질병의 주요 신경 병리학 적 특징은 아밀로이드 - 베타의 과잉 생산과 고통받는 사람들의 뇌 영역에서 아밀로이드 베타 플라크의 증착이다. 지난 몇 년 동안 과학자들은 아밀로이드 - 베타 병리를 복제하려고 많은 알츠하이머 병 마우스 모델을 생성했다. 불행히도, 마우스 모델은 선택적 질환 특징을 모방. 신경 세포 사망, 알츠하이머 병 환자의 뇌에서 현저한 효과가 현저 이들 마우스에서 부족하다. 뉴런 가장 독성임이 입증되었다 아밀로이드 - 베타의 형태 - - 따라서, 우리 등은 직접 아밀로이드 - 베타의 수용성 올리고머 종을 주입하는 방법을 채용 한 stereotaxically 뇌로. 이 보고서에서 우리는 선택 뇌 영역에 아밀로이드 - 베타 수준을 증가의 수술 기법을 문서화하는 남성 C57BL / 6J 마우스를 사용합니다.콜린성 회로에 의해 접속되어 기저 전뇌와 함께이 뇌 구조체가 변성 질환의 영역 중 하나 나타내므로 투여 대상은 해마의 치아 이랑이다. 브로카의 대각선 대역의 수직 사지에서 세포 사멸 및 콜린성 뉴런 손실에 수반하는 증가가있을 정위 주입을 통해 치아 이랑에서 아밀로이드 베타 상승의 결과, 1 주 내에 치아 이랑에서 신경 세포 손실의 증가를 나타내 기저 전뇌의. 이러한 효과는 2 주까지 관찰된다. 우리의 데이타는 현재 아밀로이드 베타 주입 모델은 단기간에 특정 영역의 신경 세포 사멸을 해결하기위한 대안이 마우스 모델을 제공한다는 것을 시사한다. 이 모델의 이점은 아밀로이드 - 베타가 시공간하게 증가 될 수 있다는 것이다.

서론

아밀로이드 - 베타 (Aβ 1-42)으로 구성되어 아밀로이드 플라크 예금, 알츠하이머 병 (AD)의 병리의 핵심 기능입니다. 많은 연구는 신경 세포의 죽음, 시냅스 영양 장애, 손실 및 기능 장애를 유발 재조합 올리고머 Aβ 1-42의 높은 독성 수준을 보여 주었다; 뿐만 아니라 학습과 기억 적자 1-4으로. 영향을받는 뇌 영역은 해마, 대뇌 피질, 그리고 기저 전뇌와 편도체 (5, 6)와 같은 피질 하 구조를 포함한다. 지금까지 광고의 Aβ 1-42 병리학을 시뮬레이션하려고 여러 형질 전환 마우스 모델이있다. 변형에 따라이 동물은 AD의 선택 병리학 적 기능을 검사에 유용하다는 것을 증명한다. 불행하게도,이 트랜스 제닉 라인들, 및 APP23 5XFAD 제외한 이들 마우스는 완전히 신경 손실, AD의 핵심 양태를 복제하지 않는다. 심지어 APP23 및 5XFAD에서 관찰되는 신경 세포의 손실, 신경 세포의 죽음 obser와VED는 몇 가지 선택 지역 7,8에, 미묘한 나이 의존하고 분리 하였다.

야생형 마우스의 뇌에 Aβ 올리고머 1-42의 직접 주입 amyloidopathy 1,9,10의 신경 세포 죽음의 측면을 복제 생체 모델의 우수한을 제공합니다. 일반적으로 사용되는 형질 전환 마우스 모델과 달리 Aβ 올리고머 1-42 주입 모델은 급성 공간 및 시간 방식으로 Aβ에게 1-42 수준을 높이기에 이상적입니다. 이 모델 야생형 마우스를 사용하는 장점은 트랜스 제닉 마우스에 도입 라인 돌연변이 잠재적 보상 또는 부작용을 제거한다. 과거의 연구는 해마에 Aβ 1-42의 독성 수준을 주입하여 일주 (1)의 내부에 주입 부위의 근방에서 신경 세포 사멸을 유도하는 것으로 나타났다. 또한, Aβ 1-42은 콜린성 뉴런 (11) 기저 전뇌 독성 관찰과 일관성이 있음을해마에 프로젝트 콜린성 신경 세포 (BFCN) 인구는 효과적으로 뇌에서 고립 된 신경 회로의 시험을 허용, 생쥐에서 베타 - 아밀로이드 주입 1,10 다음 7~14일 내 20-50% 감소된다. 대부분의 제어 / 차량 및 올리고머 Aβ 1-42 솔루션 해마 (12)의 치아 이랑에 동측 BFCN 프로젝트 때문에 비교가 좌우 반구 (1) 사이에 만들어 질 수 뇌의 양쪽에 주입 될 수있다.

이 보고서에서 우리는 성인 야생 형 C57BL / 6J 마우스에 대한 자세한 수술과 주사 방법을 제공 할 것입니다. 이 마우스 변형 때문에 연구의 광범위한 사용으로 선택된다. 기술적으로, 임의의 뇌 영역은 그러나 여기서 우리는이 기술을 설명하기 위해 대상으로 해마의 치아 이랑을 사용, 주입 대상이 될 수있다.

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프로토콜

참고 : 모든 동물 실험의 경우, 기관 및 관리 및 실험 동물의 사용을위한 국가 가이드 라인을 따라야했다.

1. 외과 수술 도구 및 솔루션을 준비

  1. 모든 스테인레스 스틸 수술 도구를 압력솥.
  2. 멸균 분자량 그레이드 탈 증류수 200 증명 무수 에탄올을 희석하여 70 % 에탄올을 준비한다.
  3. 해밀턴 주사기에 29 G 바늘을 연결합니다. 1 분 동안 반복 그리기 및 배출 nanopure 물에 의해 해밀턴 주사기와 바늘의 내부를 청소합니다. 70 % 에탄올로이 절차를 반복합니다.
    1. 해밀턴 주사기의 플런저와 바늘을 제거합니다. 공기는 층류 후드 O / N에서 부분 건조.
    2. 사용 전에 30 분 동안 자외선 바늘과 주사기를 조사.
  4. 0.9 %의 체적 농도로 최종 중량에 대한 분자 수준의 물에 용해하여 염화나트륨 식염수 용액을 준비한다. Sterili0.2 ㎛의 기공 필터를 통해 여과하여 용액을 ZE.

2. 올리고머 Aβ 1-42 준비

  1. 빠 '등 13 책에서 설명한대로 Monomerize과 정확히 5 mm로 DMSO에 재조합 인간 Aβ 1-42을 재현 탁.
  2. 수술 전 하루에 100 μm의 멸균 (1X) PBS로 5 mM의 Aβ 1-42 희석.
  3. 분쇄가 잘 솔루션을 섞는다.
  4. 4C에서 12 시간 동안 Aβ 1-42 솔루션을 품어.
    참고 : 이러한 PBS에 DMSO를 희석 또는 스크램블로 제어 솔루션 / Aβ ​​1-42 펩타이드는 Aβ 1-42와 같은 방법으로 준비되어야한다 역.

사출 좌표를 결정 (3)

  1. 정확한 전후방 (AP), 중간 - 측면 (ML)를 결정하기 위해 성인 마우스 뇌 아틀라스를 사용하고 지느러미 - 복부 (DV)는 관심 (14)의 뇌 영역 좌표.
    아니테 : 우리는 브레 그마에서 다음 좌표를 대상으로 해마의 치아 이랑을 고른 기술 설명하기 : AP를, -2.00 mm; ML은 1.3 mm의 ±; DV, -2.2 mm이다. AP 값을 선행 음의 부호는 브레 그마의 2.00 mm의 후방을 나타냅니다. ML 값을 선행 ± 기호 중앙에서 왼쪽과 오른쪽 방향을 나타냅니다. 마지막으로, DV 앞에 음의 부호는 뇌의 표면으로부터 복부 이동 나타낸다.

4. 정위 프레임 설정

  1. 수술 얼굴 마스크, 깨끗한 실험실 코트, 멸균 수술 장갑을 착용 할 것.
  2. 정위 악기와 70 % 에탄올로 마우스 어댑터를 닦습니다.
  3. 카운터에 무균 수술 드레이프를 놓습니다.
  4. 무균 수술 드레이프의 상단에 마우스 어댑터 정위기구를 놓습니다.
  5. 70 % 에탄올로 마우스 가열 패드를 닦습니다. 정위 프레임 침대 위에 가열 패드를 놓습니다. 범용 LABORA를 사용하여마우스 어댑터 침대 위에 가열 패드 아래 테이프에 토리 라벨 테이프.
    1. 제조업체의 지시에 따라 온수 순환기 펌프에 전기 패드를 부착합니다.
    2. 따뜻한 물 순환기 펌프의 전원을 켜고 37 ° C의 온도를 설정하고,이 온도에 도달 할 때까지 기다립니다.
  6. 제조업체의 지시에 따라 전동 수직 주입 축에 그것을 돌려서 정위 프레임에 29 G 바늘 50 μL 해밀턴 주사기를 부착합니다.
  7. 비드 살균기를 켜고는 제조업체의 설정 온도에 도달 할 때까지 기다립니다.
    참고 :이이 동물 사이에 스테인레스 스틸기구를 살균하는 데 사용됩니다. 이 악기를 살균 구슬과의 접촉 20 초 걸립니다.
  8. 핫 플레이트의 전원을 켜고 42 ° C로 설정하고 꼭대기 깨끗한 빈 새장을 배치합니다.
  9. 해밀턴 주사기를 고정대에 고정시킨 상태에서, 상기 전동 정위의 I를 사용njector Aβ 1-42 솔루션을 그립니다.
    참고 : 주사기로 솔루션의 4 개 이상의 μL를 그려 후 주입 볼륨을 설정합니다 정위 인젝터를 사용합니다. 제조업체의 지시에 따라 인젝터를 작동.

5. 동물 준비

  1. 규모의 무게를 이용하여 마우스의 무게를 결정합니다.
  2. 복강 (IP)을 주입하여 100 ㎎ / ㎏ 케타민 10 ㎎ / ㎏ 자일 라진에서 케타민 / 자일 라진 칵테일 마우스를 마취. 발가락 핀치 반사의 손실에 의해 마취의 깊이를 모니터링합니다.
  3. 마우스가 진정 된 후 머리 깎기을하고 두개골을 통해 피부를 노출 머리를 면도.
  4. 정위 침대 위에 가열 패드 위에 마우스를 놓습니다.
  5. 치아 가드 내부의 앞니의 치아를 입을 열고 배치 할 주걱을 사용합니다. 마우스의 얼굴에 코 부분을 고정합니다. 부드럽게 너무 꽉을 단속.
  6. 포지머리를 보호하는 청각 (外耳道)에 양자 귀 크로스바를 기. 이 두개골을 돌 때까지 각 크로스바를 이동 한 다음 그것을 고정 나사를 켭니다.
    1. 머리가 부드럽게 머리를 아래로 밀어 검지 손가락을 사용하여 고정되어 있는지 확인하십시오. 머리가 제대로 고정되어 있다면 그것은 포기하지 않거나 누르면 이동합니다.
  7. 촉촉한 그들을 유지하는 눈 아이 크림 또는 점안제의 드롭을 적용한다. 눈 수술을 통해 습기가 있는지 확인합니다.
  8. 수술 부위는 70 % 에탄올이어서 두개골 위에 피부에 betadine 용액을 적용 멸균 면봉을 사용하여 소독. 교류 betadine 2 회 이상 세정 70 % 에탄올을 수행한다.

6. 수술 및 주입

  1. 두피의 중간 선에 2-3mm 절개를 만들기 위해 메스를 사용하고 두개골, 랜드 마크의 시상 봉합, 브레 그마 및 람다을 노출 1.0-1.5 cm에 절개 라인을 확장하는 직선 미세 가위를 사용정위 좌표에 기반들. 떨어져 피부를 유지하기 위해 마이크로 클램프를 사용합니다.
    참고 : 브레 그마 및 람다 위치는 마우스 뇌지도 책 "정위 좌표에서 마우스 뇌"(14)에 설명되어 있습니다.
  2. , 면봉을 가지고 멸균 식염수에 담가하고 두개골을 청소하는 데 사용합니다. 그런 다음, 두개골을 건조 깨끗하고 마른 면봉을 사용합니다.
  3. 브레 그마에 점을 표시하기 위해 멸균 고급 볼펜을 사용합니다. 바늘의 끝이 바로 브레 그마의 점에 닿을 수 있도록 해밀턴 주사기의 위치를​​ 정위 미세 조작기를 사용합니다.
    1. DV 좌표를 기록합니다.
    2. 두개골의 AP 축이 레벨이 바늘의 끝이 람다 지점을 터치 있도록 후방 해밀턴 주사기를 이동할 수 있는지 확인합니다.
    3. DV 위치를 기록합니다. 0.5 mm 내에있는 DV는 브레 그마 및 람다 좌표를 확인하십시오.
      주 : 목표는 브레 그마 및 람다 간의 DV 차이를 최소화하는 것이다.
  4. M을 사용하여icromanipulator는 브레 그마 점에 다시 해밀턴 주사기 바늘 끝을 반환합니다.
  5. 시작 AP의 위치를​​ 기록합니다.
  6. 좌표 시작 AP로부터 2.00 mm를 감산하여 끝 AP의 위치를​​ 계산한다.
  7. 좌표 최종 AP에 해밀턴 주사기 바늘의 위치를​​ 변경하기 위해 미세 조작기를 사용합니다.
  8. 현재 ML 좌표를 기록합니다.
  9. 왼쪽 계산과 오른쪽 ML을 종료하면 추가 또는 좌표 ML 시작에서 1.3 mm를 차감하여 조정한다.
  10. 끝 ML 좌표 중 하나에 해밀턴 주사기 바늘을 이동하는 미세 조작기를 사용합니다.
    1. 모두 종료 ML 좌표에 두개골의 표면에 바늘 끝을 터치 DV 좌표를 기록하고 값이 0.5 mm 내에 있는지 확인하십시오.
      주 : 목표 ML 좌표 끝 둘 사이 DV 차이를 최소화하는 것이다.
    2. 결말에 두개골이 지남에 0.5 cm의 바늘을 끌어 조정한다. 일에 점을 표시하기 위해 멸균 고급 볼펜을 가지고두개골의 전자 표면. 두개골의 반대쪽에 대해이 단계를 반복합니다.
  11. 방법 중 명확한 해밀턴 주사기를 스윙.
  12. 드릴 0.8 mm의 드릴 헤드를 연결합니다. 두 손으로 드릴을 가지고 안정성을 위해 테이블​​의 표면에 팔꿈치를 설정하고 왼쪽 또는 오른쪽 ML 하나가 좌표에 샤피 점보다 약간 드릴 헤드를 배치합니다. 두개골에 구멍을 소개하는 두개골 표면에 드릴 팁을 내려 드릴을 활성화합니다. 반대편에 대해이 단계를 반복합니다.
    참고 : 일부 출혈은 새로 도입 된 구멍에서 발생할 수 있습니다. 다음이 출혈이있는 경우 피를 가볍게 두 드리 깨끗한 마른 면봉을 사용합니다.
  13. 새로 도입 된 ML 구멍 중 하나를 통해 다시 위치로 해밀턴 주사기를 이동합니다. 바로 두개골을지나 해밀턴 바늘을 낮 춥니 다. 이 시점에서 뇌에 구멍을하지 않도록주의. 확인하려면 바늘 쉬르 두개골이 당신의 검지 손가락을 부드럽게 만들기 위해 두개골에 바늘을 밀어 통과전자 바늘 구멍을 종료하지 않습니다.
  14. 시작 DV 좌표를 기록합니다.
  15. 끝 DV가 시작 DV 좌표를 2.2 mm를 뺀 좌표 계산합니다.
  16. 좌표 아래로 종료 DV에 바늘을 낮 춥니 다.
  17. 0.5 μL / 분의 속도로 치아 이랑 Aβ 1-42 4 μl를 펌핑하도록 정위 인젝터 펌프를 활성화.
  18. 주입이 완료되면 바늘은 주사 부위에서 용액의 역류를 최소화하기위한 추가적인 1 분 동안 그대로 유지하자.
  19. 뇌의 다른 측면에 바늘을 이동하고 6.13-6.18 단계를 반복합니다.

7. 동물 제거 및 수술 후 관리

  1. 귀 바, 얼굴 / 코 가드를 풉니 다. 장치에서 마우스를 제거합니다.
  2. 두피를 닫습니다 끌어 후 봉합과 상처를 봉인 한 학생 표준 패턴 집게를 사용합니다.
  3. 수화에 대한 IP를 통해 마우스로 멸균 생리 식염수 1 ㎖를 주입한다.
  4. 에JECT의 프레 노르 핀 (0.1 ㎎ / ㎏) 피하는 통증을 완화합니다.
  5. 이 깨어날 때까지 42 ° C 핫 플레이트 위에 설정 깨끗한 빈 새장에 마우스를 유지하고 충분한 음식과 물과의 주택 케이지로 돌아갑니다.
  6. 피하 주사를 통해 통증 완화를위한 3 일간 매 12 시간을 부 프레 노르 핀을 관리합니다.

8. 봉합사 제거

  1. IP 100 ㎎ / ㎏ 케타민 10 ㎎ / ㎏ xlyazine에서 케타민 / 자일 라진 칵테일 마우스를 마취. 참고 :이이 7~10일 수술 후 이루어집니다.
  2. 봉합사를 제거하기 위해 학생 표준 패턴 집게 똑바로 미세 가위를 사용합니다.
  3. 수화에 대한 IP를 통해 마우스로 멸균 생리 식염수 1 ㎖를 주입한다.
  4. 이 깨어날 때까지 42 ° C 핫 플레이트 위에 설정 깨끗한 빈 새장에 마우스를 유지하고 충분한 음식과 물과의 주택 케이지로 돌아갑니다.

9. 동물의 희생 및 조직 처리

  1. 마우스 및 P 마취4 % 파라 포름 알데히드 (15)와 함께 erfuse 뇌를 제거하고 16 냉동 절편을 위해 그것을 처리합니다.
    참고 : 동물 희생의 타이밍이 실험에 따라 달라집니다. 그러나 우리의 연구에 우리는 7, 14 일 수술을 게시 선택했다.

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결과

인간 재조합 올리고머 Aβ 1-42의 제조 본 방법은 단량체, 이량 체, 삼량 체 및 사량 체 (도 1A)으로 이루어진 수용성 올리고머 종을 산출한다. 이러한 저 분자량 Aβ 1-42 종 아니지만 브릴과 플라크 뉴런 1,4,9,17-19 가장 독성 수많은 설정에 도시되어있다. 올리고머 Aβ 1-42은 마우스의 뇌에서 Aβ 1-42 신경 세포 사멸을 유도하는지 여부를 결정하기 (100 μM 원액 4 μL)를 9개월 오래 야생형 C57BL 하나 반구에서 해마의 DG에 주입 하였다 / 6J 마우스. C57BL / 6J위한 해마의 중량은 약 0.018 g을 것으로 추정되므로 Aβ 1-42의 전달은 약 100 μg의 / g이었다된다. 아밀로이드 베타 1 용해에 사용 된 DMSO의 동일한 볼륨으로 구성 - 같은 마우스 뇌의 반대편 DG는 제어 / 차량 용액을 주입했다42 ...

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토론

1) 무균 기술을 사용합니다 : 실험자 또는 외과 의사가 반드시 성공적으로 Aβ 1-42 주사를 달성하기 위해 2) 올바르게 정확한 좌표와 관심의 뇌 영역을 식별; 3) 적절 AP 및 ML 축 평준화 뇌 정위 프레임에 마우스를 보호 할 수; 4) 정밀 미세 조작기를 작동 할 수있는 능력을 가지고; 5) 적절한 수술 치료를 보장합니다. 이러한 주요 단계는 다음 경우 마우스없이 관찰 감염으로 수술을 생존해야한다.

시험관에 있던 연구는 우리와 다른 Aβ 1-42 직접 해마에 주입이 광고의 주요 기능 중 하나를 묘사, 신경 세포 죽음 1,4,9,10을 이끌어내는 것으로 나타났습니다. 변성 한 마커의 증가에 의해 보완된다 치아 이랑의 체적 감소에 의해 도시 된 바와 같이, 변성은 주사 부위의 부근에서 명확하게 알 수있다. 또한, T그는 콜린성 라벨링 감소 및 BF 1,10에서

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공개 사항

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

감사의 글

이 작품은 신경 질환의 국립 연구소에 의해 지원과 뇌졸중 알츠하이머 병 연구 투자 노화 (CMT에) NS081333, 알츠하이머 협회 보조금 NIRG-10-171721과 (어에) 정신 건강 보조금 MH096702의 국립 연구소 및 국립 연구소를 부여했다 (YYJ과 JB에) 컬럼비아 대학 파일럿 부여 AG008702에서 센터.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
케타민 HCl (100 mg/ml)Henry Schein Medical1049007동물 1kg당 케타민 100 mg 케타민
자일라진 (20 mg/ml)Henry Schein Medical사용 불가동물 1kg 당 10 mg 자일라
진 Buprenex (0.3 mg/ml)Henry Schein Medical1217793동물 1 kg 당 0.1 mg 부프레넥스
Aβ 1-42David Teplow/UCLA이용 불가100 μ M; 이 아밀로이드는
A&beta 논문에 사용되었습니다. 1-42BachemH-1368Teplow lab A&beta의 아밀로이드 대신 사용할 수 있습니다
. 1-42American Peptide62-0-80B는 Teplow lab
Scrambled A&beta의 아밀로이드 대신 사용할 수 있습니다. 1-42American 펩티드62-0-46BA&beta 비교를 위한 대조 펩티드로 사용될 수 있습니다; 1-42
NU4 항체 (Oligomeric Amyloid 항체)Gift from William Klein/Northwestern U.사용할 수 없음1:2,000 희석
항-아밀로이드 올리고머 항체  (다클론 토끼)EMD MilliporeAB9234는 Nu4 대신 사용될 수 있으며; 최종 사용자에 의해 테스트되어야 합니다.
6E10 항체 (Monoclonal Mouse) (Amyloid 항체)Biolegendsig-393201:1,000 희석
ChAT 항체 (Polyclonal Goat)MilliporeAB144P1:100 희석
DeadEnd 형광 TUNEL 시스템PromegaG3250제조사의 지시사항을 따르십시오.
InvitrogenP36935와 함께 Prolong Gold Antifade Reagent슬라이드를 커버슬립할 때 사용
FluorogoldFluorochrome, LLC사용할 수 없음2% 용액
절대 에탄올(200 proof)Fisher ScientificBP2818-4살균 및 소독을 위한 70% 에탄올 제조용
A&beta 분리를 위해; 1-42
Novex Tricine SDS 실행 버퍼 (10X)Life TechnologiesLC167510-20% Tricine 젤 실행용
Novex Tris-Glycine 전송 버퍼 (25X)Life TechnologiesLC367510-20% Tricine 젤 전송 SuperSignal
Western Blot EnhancerThermo Scientific46640A&beta 향상용; 1-42 신호; 제조업체의 프로토콜
Protran BA79 니트로셀룰로오스 블로팅 멤브레인, 0.1 μ mGE Healthcare Life Sciences1040208810-20% Tricine 젤 전송을 위한
Xcell SureLock Mini-CellLife TechnologiesEI0001전기영동 아파라투스 10-20% Tricine 젤
실행을 위한 GenTeal Lubricant Eye GelNovartis사용할 수 없음수술 중 마우스 눈을 촉촉하게 유지하는 데 사용할 수 있음; 현지 약국에서 찾을 수 있습니다
 
[header]
Refresh Optive Lubricant Eye DropsAllergan사용할 수 없음수술 중 마우스 눈을 촉촉하게 유지하기 위해; 지역 약국에서 찾을 수 있습니다. GenTeal
BetadineStoelting50998
라운드/테이퍼 스패튤라VWR82027-490동물 입을 열기 위해
Bulldog Serrefines 클램프 (턱 치수. 9X1.6 mm; 길이 28 mm)Fine Science Tools18050-28옵션; 주사 중 두피 피부를 분리하기 위해
스트레이트 파인 가위(절삭날 25mm; 길이 11.5 cm)Fine Science Tools14060-11두피 절단용
#3 메스 손잡이Fine Science Tools10003-12
#11 수술용 칼날Fine Science Tools10011-00두피 절개용
Student Standard Pattern Forcep (Tip Dims. 2.5x1.5 mm; 길이 11.5 cm)Fine Science Tools91100-12봉합 중 두피를 닫는 데 사용
트리머 콤보 키트Kent ScientificCL9990-1201털 면도용
T/Pump Warm Water Recirculator 켄트 사이언티픽 TP-700수술 중 동물을 따뜻하게 하기 위한
재사용 가능한 워마이닝 패드 (5" x 10")Kent Scientific TPZ-0510FEA수술 중 동물을 따뜻하게 하기 위해 T/Pump 온수 순환기에 부착하기 위해
마이크로 드릴스톨팅586100.8mm 강철 버를 사용하여 두개골에 구멍을 뚫습니다
신생아 쥐 어댑터스톨팅51615
마우스 스테레오택시 기구스톨팅51730사용할 수 있습니다. 이것은 스톨팅 고양이 대신 사용할 수 있습니다. #51615
Quintessential 스테레오택시 인젝터스톨팅53311
드라이 글라스 비드 살균기스톨팅50287스테인레스 스틸 기구 살균용
멸균 수술용 드레이프 (18" x 26")Stoelting50981
Hamilton 주사기 50 ml, 모델 705 RN SYR, NDLHamilton Company7637-01뇌 주입용; 다른 용액에 대해 다른 주사기를 사용하십시오
29 G Needle, Small Hub RNNDL Hamilton Company7803-06뇌 주사를 위해 Hamilton 주사기에 부착하기 위해
1 ml BD 투베르큘린 주사기VWRBD309659마취 및 식염수 투여용
30G 바늘 (0.5")VWRBD305106마취 및 식염수 투여용
휴대용 전자 CS 시리즈 저울 (오하우스)VWR65500-202마취 용량을 결정하기 위한 동물의 무게를 측정하기 위해
핫 플레이트(상판 치수. 7.25x7.25 인치)VWR47751-148수술 후 동물을 따뜻하게 하기 위해
Sofsilk Silk Suture C-1 절단 3/8, 12mmCovidienS1173상처 봉합
Vetbond 조직 접착제 (3M)Santa Cruz Biotechnologysc-361931옵션 : 상처 봉합 보조용; 봉합사와 함께 사용하십시오.
면팁 나무 축 멸균 애플리케이터Fisher scientific22-029-488수술 상처 청소 및 건조용
Fisherbrand Superfrost Plus 현미경 슬라이드Fisher Scientific 12-550-15뇌 절편 수집용
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참고문헌

  1. Baleriola, J., et al. Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions. Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).
  2. Haass, C., Selkoe, D. J. Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews. Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).
  3. Knowles, J. K., et al. The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).
  4. Troy, C. M., et al. beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation. Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).
  5. Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis. Brain structure & function. 214 (2-3), 111-126 (2010).
  6. Gotz, J., Ittner, L. M. Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).
  7. Calhoun, M. E., et al. Neuron loss in APP transgenic mice. Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).
  8. Oakley, H., et al. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).
  9. Jean, Y. Y., et al. Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death. The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).
  10. Sotthibundhu, A., et al. Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).
  11. Kar, S., Quirion, R. Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology. Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).
  12. Leranth, C., Frotscher, M. Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers. The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).
  13. Fa, M., et al. Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices. Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).
  14. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Second edn, Academic Press. (2001).
  15. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).
  16. Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain. Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).
  17. Jin, M., et al. Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).
  18. Lambert, M. P., et al. Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).
  19. Masters, C. L., Selkoe, D. J. Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease. Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262(2012).
  20. Chakrabarti, M., et al. Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration. Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).
  21. Cirrito, J. R., et al. In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).
  22. Puzzo, D., et al. Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).
  23. Puzzo, D., et al. Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory. Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).
  24. Akpan, N., et al. Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).
  25. Fulmer, C. G., et al. Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).
  26. Thakker-Varia, S., et al. The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).
  27. Greferath, U., et al. Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice. The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).
  28. Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band. Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).
  29. Clarke, D. J. Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study. Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).
  30. Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. Amyloid beta mediates memory formation. Learning & memory. 16 (4), 267-272 (2009).

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