루시퍼 라제 리포터 유전자 RAW264.7 세포를 형질

Sylvia T. Cheung; Soroush Shakibakho; Eva Y. So; Alice L-F Mui

doi:10.3791/52807

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방법 논문

루시퍼 라제 리포터 유전자 RAW264.7 세포를 형질

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DOI:

10.3791/52807

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2015년 6월 18일

Sylvia T. Cheung¹^,²^,³ , Soroush Shakibakho¹^,² , Eva Y. So¹^,² , Alice L-F Mui¹^,²^,³

¹Immunity and Infection Research Centre, Vancouver Costal Health Research Institute, ²Department of Surgery, University of British Columbia, ³Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of British Columbia

이 논문에서

요약

대식세포 세포주 RAW264.7로의 형질주입은 이물질에 대한 세포의 자연적인 반응으로 인해 어렵습니다. 여기에서는 루시퍼라제 리포터 유전자를 RAW264.7 세포에 transfection하기 위한 부드럽지만 강력한 절차를 설명했습니다.

초록

원하는 유전 물질을 세포로 형질주입하는 것은 생물 의학 연구 연구에서 불가피한 절차입니다. 수많은 방법이 설명되었지만, 특정 유형의 세포는 이러한 방법 중 다수에 내성이 있고 형질주입 효율이 낮기 때문에¹ 이러한 세포 유형에 대한 연구를 방해할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는 플라스미드 DNA인 루시페라제 리포터 유전자를 RAW264.7 대식세포 세포주에 도입하기 위한 최적화된 transfection 절차를 제시합니다. 두 가지 다른 유형의 transfection 시약(지질 기반 및 폴리아민 기반)이 설명되며, transfection 절차에 의해 RAW264.7 세포가 최소한으로 변경되고 얻은 모든 실험 데이터가 실험 처리의 직접적인 결과임을 보장하기 위해 프로토콜 전반에 걸쳐 중요한 참고 사항이 제공됩니다. transfection 효율은 다른 transfection 방법에 비해 높지 않을 수 있지만, 설명된 절차는 자극에 대한 세포의 생리적 반응을 변경하지 않고 RAW264.7에서 루시페라제 신호를 검출할 수 있을 만큼 충분히 강력합니다.

서론

세포의 핵산의 형질 과학 연구에서 다양한 응용 프로그램을 가지고있다. 예로는 (1) 리포터 유전자, 유전자 발현의 다른 유전자 요소의 역할을 연구하기 위해 (2) 단백 발현 플라스미드 관심 단백질을 과발현, 및 (3) 작은 RNA 간섭하는 유전자 발현을 하향 조절하기 위해 포함된다. 특정 유전자의 발현 량을 조작하는 등의 조작 차동 효과를 측정함으로써, 연구자들은 선택된 생물학적 시스템에서 유전자 기능을 추론 할 수있다. 모든 형질 전환 방법은 동일한 형질 전환 효율을 제공하고, 심지어 같은 형질 전환 방법은 균등 ^한 모든 유형의 세포를 형질 감염되지 않는다. 따라서, 다른 형질 전환 방법은 인산 칼슘 법, DEAE 덱스 트란, 양이온 성 지질 형질 감염, 비 양이온 성 지질 - 폴리머 형질 감염, 전기 천공, 및 ^2,3- nucleofection 등이 개발되었다.

대식 세포로 형질은 ESPE입니다cially 어려운 의한 대 식세포 (메틸화) DNA ⁽⁴⁾ 파생 된 박테리아를 포함하여 이물질에 매우 민감 전문 식세포가 있다는 사실에. 외래 DNA의 도입은 사이토 카인과 산화 질소 ^{(5, 6)의} 생산을 유도하는 수신자 같은 수용체 9 (TLR9) 경로를 활성화합니....