철 염화물에 의한 경동맥 및 장간막 용기에 혈전증 마우스 모델

요약

마우스의 FeCl₃ 유도 혈전증 모델이 여기에 설명되어 있습니다. 장간막 혈관에 대한 생체 내 현미경 관찰과 경동맥의 혈류 측정을 통해 혈전 성장을 모니터링하는 방법이 제시됩니다.

초록

심한 혈전증과 심근경색, 폐색전증, 뇌졸중과 같은 허혈성 질환은 전 세계적으로 중요한 건강 문제입니다. 염화제이철 손상은 이제 노출된 정맥이나 크고 작은 직경의 동맥에서 혈전의 형성을 빠르고 정확하게 유도하는 잘 정립된 기술입니다. 이 모델은 혈전증의 병태생리학 연구, 새로운 항혈전제 약물의 발견 및 검증, 이러한 새로운 제제의 작용 메커니즘에 대한 이해에 중요한 역할을 했습니다. 여기에서는 마우스의 장간막 혈관 및 경동맥에 대한 이 기술의 구현이 제시됩니다. 이 방법은 순환하는 백혈구와 혈소판에 형광 염료를 표지하는 방법과 노출된 장간막에 대한 생체 내 현미경 검사를 통해 혈전을 형성하는 손상된 혈관 벽에 축적되는 것을 관찰하는 방법을 설명합니다. 경동맥에서 혈전 형성으로 인한 폐색은 도플러 프로브로 혈류를 모니터링하여 측정합니다.

서론

혈전증의 개발 및 항 혈전 약제의 효과의 평가에 관련된 메카니즘의 연구는 또한 실험 동물 모델을 확립 요구한다. 설치류가 ^1보다 인간에게 더 큰 용기가 제공 유사한 큰 동물 모델을 사용하는 제했다. 그러나 높은 비용이 요구되는 더 큰 시설을 조작하는데 어려움이 유전자의 사용에 큰 단점이며, 설치류에 예비 시험이 결정적인 결과 ² 주어진 일단 큰 동물은 지금 늦은 전임상 연구로 제한됩니다. 생체 내 테스트에 필요한 혈전 약물의 양을 최소화하는 유전자 및 녹아웃 균주 및 작은 크기의 넓은 가용성, 생쥐는 주로 혈전증 연구에 사용된다. 따라서, 혈전 성 질환의 몇몇 모델 생쥐 ^3에 개발되어왔다.

대부분의 설립 혈전증 모델은 intim을 방해혈전 ^(4)의 형성을 유도하는 혈액 흐름에 서브 내피 세포 외 기질의 노출 뒤에 혈관 벽의 층. 혈전은 /과 응고 캐스케이드 ^(5)를 활성화 조직 인자의 노출 또는 혈소판 활성화를 트리거 콜라겐 노출 될 수 있습니다. 몇 가지 기술이어서 초기 혈관 손상을 달성하기 위해 사용된다. Pierangeli는 외. 대퇴부 정맥 ⁶ 미세 도구 기계적 파괴 모델을 개발 하였....

프로토콜

동물과 관련된 모든 실험은 알프레드 의학 연구 및 교육 선거구 동물 윤리위원회 (E / 2,015분의 1,534 / B)에 의해 승인되었다. 모든 수술 조작은 완전 마취 하에서 수행하고, 동물은 임의의 단계에서의 통증을 경험하지 않았다. 기재된 모든 실험은 비 - 회복된다.

1. 준비

1. 종이 필터 (1mm × 2 ㎜)의 얇은 밴드를 잘라.
2. 갓 4 % 염화 제이철 용액이 준비 (w / v)의 6 % (W / V)를 탈 이온수로 희석 하였다. 0.22 μm의를 통해 여과, PBS에 로다 민 6G 솔루션 0.3 %를 준비합니다.
3. 주사기 래퍼의 흰색 플라스틱 작은 조각 (5mm X 1cm)을 잘라.

생체 내에 현미경으로 관찰 2. 장간막 세동맥 혈전 형성

1. 10 ~ 12 주 된 남성 C57BL / 6 야생형 마우스의 무게를 측정하고 복강 내 주사 비록 케타민의 혼합물 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (10 ㎎ / ㎏)에 따라 마취. 발가락, 꼬리 및 / 또는 피부 핀치, 각막과 눈꺼풀 핀치에서 반응성과 수염 운동의 부재에 응답하여 마취의 깊이를 모니터링합니다. 필요한 경우, 동물의 마취를 유지하기 케타민의 투여 ....

결과

로다 민 6G의 축적을 발표 할 예정 장간막의 형광 생체 내에 현미경 관찰 _50ml을 부상으로 혈관 벽을 따라 혈소판 및 백혈구를 표시. 부분 혈전의 점진적 형성은 200 μm의의 장간막 용기 (그림 1)에서 모니터링된다. 혈전 서서히 나타나며 명백하게 _FeCl3를 노출 제 분 후에 식별 가능한 (도 1, t는 60 초 =). 40 초 _FeCl3를 적신 여과지 제거한 후, 혈전증이 빠르게 진행되고, 최종적으로 관찰 된 전체 용기 구획의 벽에 존재한다 (도 1, t는 100 초 =).

그림 1 :. 혈전 성장 장간막 용기에 형광 .......

토론

염화철 유도 혈전증 모델은 우수한 연구 도구이다. 본 연구에서 나타난 바와 같이, 그 구현이 매우 용이하고, 생체 내에 현미경 또는 도플러 유량계와 조합하여 사용될 때, 혈전 형성의 좋은 실시간 모니터링을 제공한다. 노출 _시간과의 FeCl3의 농도를 조정, 또한 비 또는 폐쇄성 혈전 폐색 하나를 생성 할 수있는 가능성을 제공한다.

그러나,이 방법은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 경동맥, 주요 단점은 가림 시간을 효과적으로 개질 할 수 있지만, 모델 재현성 정확하게 혈전 크기와 성장 ^속도를 제어하기 위해 ^열이 너무 약한 남아 있다는 것이다. 몇몇 그룹은 모델 ^{(28, 29)의} 표준화에 일했다. 오웬스 등. 그 신뢰성과 재현성 가림 시간 연습과 같은 세 모든 변동 요인을 감소시킴으로써 얻어 질 수있다 제안했다쥐, 생쥐의 유전 배경 이용 마취, 염화 제이철 박람회 기술과 염화 제이철 용.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Whatman 크로마토그래피 종이	GE 헬스케어	3030917
철 (III) 염화 40% (w/v)	VWR	24212.298
로다민 6G	시그마	R4127
도립 현미경	Olympus	IX81
디지털 흑백 카메라	Olympus	XM10
도플러 플로우미터	Transonic	TS420
나노 도플러 플로우 프로브	Transonic	0.5 PBS
케타민	호스피라	0409-2051-05
자일라진(램푼)	바이엘	75313
페트리 접시	Sarstedt	82.1472
인슐린 주사기 (29 G)	BD 초미세	326103
면 팁 애플리케이터	BSN 의료	211827A
Dynek dysilk 봉합사	Dynek Pty Ltd	CS30100
Dulbecco의 인산염 완충액 식염수 (PBS)	Gibco life technologies	21600-069
발열 패드	Kirchner	T60