Method Article

주문 제작 미세 투석 프로브 디자인

DOI:

10.3791/53048

⸱

July 21st, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Goethe University of Frankfurt, 2Department of Pharmaceutical Chemistry, Goethe University of Frankfurt, 3Department of Clinical Pharmacology, Goethe University of Frankfurt

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

미세 투석은 신경 과학 연구에 일반적으로 사용되는 기술이다. 따라서 상업 프로브는 큰 demand.In에 프로브 어셈블리가 $ 10 미만의 신뢰성, 동심, 맞춤형 미세 투석 프로브를 구축 상세하게 설명이 작품이다.

Abstract

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미세 투석은 신경 과학 연구에 일반적으로 사용되는 기술이다. 따라서 상업 프로브는 뇌척수액에, 생리 약리학과 병리학 적 변화를 모니터링하는 수요에 있습니다. 불행하게도, 상업 프로브는 공공 기관의 연구 그룹에 대한 비싸다. 본 연구에서는 프로브 어셈블리는 $ 10 미만의 신뢰성, 동심, 맞춤형 미세 투석 프로브를 구축 상세하게 설명한다. 미세 투석 프로브는 30 kDa의의 분자 컷 - 오프와 폴리 설폰 막으로 구성되어 있습니다. 프로브는 시험 관내 (100-1,600 다의 범위에서) 다른 분자량이 서로 다른 물리 화학적 특성을 가진 물질의 회수율을 비교한다. 프로브는 작은 화합물 포도당, 락 테이트, 아세틸 콜린 및 ATP에 대한 약 20 %의 체외 회수를 산출. 2~6%에 1,000-1,600 다 량 사이의 분자량을 갖는 신경 펩타이드에 대한 시험 관내 회수율. 따라서, 고 분자량 w 반면신경 펩티드의 팔은, 체외 복구 값을 분자량의 낮은 범위 (최대 500 다)의 화합물의 투석 체외 회복 속도에는 큰 영향을주지 않습니다를 하향 조정했다. 본 방법은 다른 컷오프 값 및 멤브레인 재료와 투석막의 이용을 허용한다. 따라서,이 특별 주문품 프로브 조립체는 광범위한 분자량 범위의 물질을 투석하기에 충분한 유연성 이점을 갖는다. 여기, 우리는 마우스와 쥐의 뇌 영역에서 미세 투석에 적용 2mm의 교환 길이와 미세 투석 프로브를 소개합니다. 그러나, 탐침의 치수는 쉽게 큰 동물에 사용되는 큰 길이 교환하도록 할 수있다.

Introduction

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미세 투석은 신경 과학 연구에 일반적으로 사용되는 기술이다. 지난 50 년 동안, 최소 침습 미세 투석 기법은 계속적으로 세포 외 공간에서 작은 분자량 화합물의 지방 농도를 모니터링하는 방법은 잘 확립 될 수 있도록 개선되었다. 거의 모든 조직 간질 유체가 자유롭게 움직이는 동물에서 연구 될 수있다.

Gaddum는 1960 년대에 푸시 - 풀 기술을 소개했다. 그는 Feldberg 등으로부터 접근 방식을 수정했습니다.하는 tubocurarine는 정맥이 측면 뇌실로 끝나는 및 정맥 (1)를 통해 또한 폐수를 수집을 통해 관류 하였다. Gaddum 동시에 끝이 주변의 뉴런으로부터 방출 신경 전달 물질을 제거하는 동안 두 개의 동심 강철 바늘로 이루어진 용액을 캐 뉼러에 의해 별개의 뇌 영역에 주입하고 관류시킨 푸시 풀 기술을 개발 하였다. 불행하게도, 조직 DAMA팁 주위의 정맥에 의한 GE는이 법의 적용을 제한했다. 이 방법의 추가의 발전으로, 비트 2 및 동료 수거 용액을 투석막에 의해 주변 조직으로부터 분리시킨 투석 백 방법을 도입했다. 그들은 개 목의 피하 조직에 투석 주머니를 이식. 투석 백의 함량은 무 단백질이며 이온 및 아미노산 많은 3 ....

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Protocol

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1. 준비 PTFE - 튜브

  1. 2.5 형상 조각으로 PTFE-튜브를 줄이십시오. 물리적 크기를 추정하는 규모의 용지를 사용하십시오. (그림 3a 참조)
  2. 출구 배관의 연결 용이하게하기 위해 각도에 하나의 끝을 잘라. (그림 3a 참조)
  3. 사포를 이용하여 거칠게 PTFE - 튜브 에폭시 접착제의 부착을 허용합니다.

2. 용융 실리카 준비

  1. 2.25 형상 조각으로 용융 실리카를 줄이십시오. (그림 3a 참조)

3. PTFE - 튜브에 용융 실리카를 삽입

  1. 평면 끝에서 1cm의 거리를 관통하는 중공 PTFE 섬유에 30 G 정맥을 삽입합니다. 프로세스를 단순화하기-PTFE 튜빙을 굽히고. (그림 3b 참조)
  2. 지도로 캐 뉼러를 사용하여 PTFE - 튜브에 용융 실리카를 삽입합니다. (도 3c 참조)
  3. 조심스럽게 정맥을 제거하고 용융 실리카를 고정합니다. (참조그림 3D)

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Results

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동심 맞춤형 미세 투석 프로브는 30 kDa의의 분자 컷 - 오프와 폴리 설폰 막으로 구성되어 있습니다. 프로브 조립체는도 3에 도시되어있다.

그것은 각각 19.10 ± 1.2 % 21.2 ± 1.6 %의 작은 에너지 대사 포도당 (180.16 다) 및 락 테이트 (112.06 다)에 대한 시험 관내 회복을 나타내었다. 다 181.66의 분자량 양전하 아세틸 콜린의 경우, 22.6 ± 1.4 %의 체외 회수 값을 나타내었다. 551.62 다 세 음으로 하전 된 인산 잔류의 분자량 ATP는 유사한 정도 (22.4 ± 0.7 %)로 체외 복구를했다. 작은 분자의 체외 회복은 그림 4A에 표시됩니다.

작은 분자 (<500 다)에 비해 1000 다 위의 분자량 신경 펩타이드는 생체 복구 .......

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Discussion

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도 3은 예시적인 프로브 조립체를 도시한다. 올바른 내부 및 외부 직경의 크기는 밀접하게 관 관찰 할 필요가 (OD 1.6 mm, ID 350 μm의), 용융 실리카 (OD 105 μm의; μm의 ID 40)와 투석막 (OD 245 μm의; ID 210 μm의). 이 멤브레인 (105 μm의)와 막뿐만 아니라 튜브 (105 μm의) 사이의 용융 실리카 사이의 공간을 유지하는 것도 중요하다. 값이 다른 경우, 프로브의 압력이 상승하고 막 유출로 이어질 수 있습니다.

여기에서 우리는 마우스 뇌 영역의 미세 투석에 적용 2mm의 교환 길이와 미세 투석 프로브를 소개합니다. 그러나, 치수가 쉽게 큰 동물에 사용되는 더 큰 길이를 교환하도록 구성 될 수있다.

어셈블리의 일부는 대체 될 수있다. 예를 들어, PTFE-튜브를 사용할 필요가 없다. 폴리에틸렌 튜브의 응용 프로그램은 동일한 외부 및 여관 가능합.......

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Disclosures

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저자는 공개할 것이 없습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 에폭시 접착제를 제공해 준 G. Barka(SunChrom GmbH, Friedrichsdorf, Germany)에게 감사를 표합니다. 또한, 저자는 모세관 혈액 모열 필터 FXCorDiax를 공급한 Fresenius Medical Care(독일 바트 홈부르크)에 감사를 표합니다. 자금은 프랑크푸르트 괴테 대학교(Goethe University of Frankfurt)에서 받았습니다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
에폭시 접착제SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, Germany     
용융 실리카 ID 40 µ m OD 105 &마이크로; mZiemer-Chromatographie, 만하임, 독일Art. 아니오 : 6.040105
폴리 설폰 멤브레인 (혈액 투석 필터 FX Cor Diax 600)Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, Bad Homburg, Germany참조 : F00001593
Cyanacrylate 접착제 (Pattex® 초강력 접착제 플라스틱)Henkel AG & Co. KGaA, D ü 독일
테플론 튜빙 1.6 x 0.35 mmSunChrom® GmbH, Friedberg, 독일Art. 아니오: 969-195.219
메스 (깃털® 외과 블레이드 번호 10)pfm 의료 ag, 쾰른, 독일Art. 아니오: 07310
현미경MEIJI Techno EMZ-8TR
30 G x 11" (0.3 x 25 mm) 캐뉼라  스테리칸® ZB.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany참조: 9324500
25 G x 11/2" (0.5 x 40 mm) 캐뉼라 100 Sterican®B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany참조: 9186166
파인 펜 (Stabilo 포인트 88 파인 0.4)Schwan-STABILO Schwanhä uß 어 GmbH & (주) KGArt. 아니오: 88/36
뜨거운 접착제  (글루 스틱 ULTRA Power x 11mm)스타이넬® GmbH, Herzebrock-Clarholz, 독일미술. 아니오: 4007841046910
사포 P60 230 x 280Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerhö he, 독일카탈로그 번호: 2608605397
셀도르프

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Feldberg, W., Malcom, J. Experiments on the site of action of tubocurarine when applied via the cerebral ventricles. J Physiol. 149, 58-77 (1959).
  2. Gaddum, J. H. Push-pull cannulae. J Physiol. 155 (1 P), (1961).
  3. Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N.

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