방법 논문

(A)의 안전주의 사항 및 운영 절차 BSL-4 실험실 2. 일반 사례

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DOI:

10.3791/53600

⸱

2016년 10월 3일

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1Integrated Research Facility at Frederick, National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID), National Institutes of Health (NIH)

이 논문에서

정오 공지

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요약

BSL-4 실험실에서 바이러스 분석을 수행하는 것은 필요한 추가 안전 예방 조치로 인해 BSL-2 실험실에서 수행하는 작업에 비해 더 복잡합니다. 여기에서는 BSL-4 실험실 내에서 사용되는 관행 및 절차에 대한 개요를 제시하여 적절한 Class II 생물 안전 캐비닛 사용, 폐기물 관리/처리 및 샘플 제거를 보여줍니다.

초록

바이오 안전성 레벨 4 (BSL-4) 봉쇄 실험실에서 작업 시간과 세부 사항에 큰 관심을 필요로한다. 비 고 결과 병원균과 BSL-2 실험실에서 수행하는 것과 동일한 작업은 BSL-4 환경에서 상당히 오래 걸릴 수 있습니다. 이 증가 된 시간 요구 사항으로 인해 실험실 획득 감염, 잠재적 오염의 작업 환경과 높은 결과 병원균이 가능합니다 릴리즈에서 지역 사회에서 연구원을 보호하기위한 것이다 요인의 군중이다. 실험실 내부, 운동은 필수 전신 안전 정장에 ​​부착 된 공기 호스로 인해 제한됩니다. 또한, 클래스 II 바이오 안전성 캐비닛 (BSC들)에서 제거 된 모든 항목의 소독이 필요합니다. 실험실 전문가는 BSL-4 실험실의 관행에서 훈련을해야하고 그들이 수행하는 능력에서 높은 능력을 보여 주어야한다. 이 기사의 초점은 적절한 절차 및 실험실 (B)을 보장하는 기술을 간략하게 설명하는 것입니다예제 절차와 표준 바이러스 플라크 분석법을 이용하여 iosafety 실험의 정확성. 실험을 수행하는 것은 시각적으로 강조 할 때 특히 적절한 기술은 BSL-4 환경에서 안전하게 작업 할 수 있습니다. 이러한 기술은 다음과 같습니다 실험, 적절한 작업을 완료 클래스 II BSC의 청소, 폐기물 관리 및 BSL-4 실험실 내부에서 발생하는 폐기물의 안전한 폐기 및 BSL- 내부에서 불 활성화 된 샘플의 제거를위한 클래스 II BSC를 설정 BSL-2 실험실 4 실험실.

서론

높은 결과 병원균을 처리하는 실험실 요원의 안전 (더 감염 prophylaxes이나 치료 방법이없는) 가장 중요하기 때문에, 미국 보건 복지부는 생명 의학에서 병원균과 함께 작업의 안전한 행위에 대한 설비 건설을위한 가이드 라인 및 우수 사례를 설립했다 바이오 안전성 관점 1 임상 실험실. 법률 및 규제를 통해, 관행 및 절차의 대부분은 이러한 병원체와 작업에 따라야 필수 요건이되었다. 미국, 쉽게 사람에서 사람 전송되는 병원균에서 높은 경우 - 사망률 결과 및 / 또는 주요 공중 보건에 미치는 영향과 생물 테러의 가능성을 가지고, 알레르기 및 감염성의 건강 / 국립 연구소의 국립 연구소로 분류됩니다 질병 (NIH / NIAID) 우선 순위 병원균과 또는 질병 통제 및 예방 (CDC) 바이오 테러의 범주에 대한 센터 에이전트 2. 또한, H이 병원균은 잠재적 생화학 테러 요원 대량 사상자 또는 경제, 중요 인프라, 또는 공신력 3에 파괴적인 영향 가능성이있는 경우 IGH-결과 병원균은 1 단계 선택 에이전트로 분류됩니다.

BSL-4의 실험실과 연구소에 대한 액세스를 포함 BSL-4 작업은, 더 높은 BSL-2 / 3 작업보다 제어된다. 예를 들어, 인해 상당한 정장 트레이닝 요구 ....

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프로토콜

1. 실험 항목

  1. 이전 BSL-4 실험실에 진입 실험 (예를 들면, 세포, 미디어, 소모품)을위한 BSL-2 실험실에서 모든 물품을 수집합니다.
  2. (참고 7에서 자세히 설명)을 BSL-4 항목의 절차를 완료합니다.

BSL-4 실험실에서 클래스 II 바이오 안전성 캐비닛 2. 준비

  1. 일단 BSL -4- 기관 내부 완료된 일상 점검의 내부 (도 1)을 보장한다. 체크리스트는 이전에 작성하여 바이러스가 사용될 표시되어 있지 않은 경우 체크리스트를 작성합니다. 체크리스트가 이미 완료된 경우에 이름을 추가하고있는 바이러스 목록에 사용될 것이다.
  2. (5 % 이중 차 암모늄 살균제 용액으로 예를 들면 N- 알킬 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드, N- 알킬 디메틸 에틸 벤질 암모늄 (새시 포함) BSC의 전체 내부를 분무하여 클래스 II BSC 청소에이전트에 대한 클로라이드 또는 다른 살균제의 적절한 사용)와 종이 타월 10, 11로 닦아된다. 점착성 소독액을 제거 캐비닛 및 새시 안에 70 % 에탄올 용액을 분무.
  3. 앉아있는 경우, 캐비닛의 뒷면에 도달 할 수....

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결과

BSL-4 실험실 내에서 적절한 절차에 따라이 분석의 안전하고 효과적인 완성을 보장하기위한 중요합니다. 완성 된 매일의 내부 체크리스트 (그림 1)을 참조하여, 실험실 직원은 장비가 완전히 작동 확인합니다. BSC에 중앙의 적절한 몸체 위치가 실험 최적의 공기 유동 상태 (도 2)에서 수행되는 것을 보장한다. 바이러스 샘플을 직렬로 플레이트 당 30-300 플라크 (도 3A) 및 바이러스 역가 (도 3b)을 결정하기 위해이 판을 얻기 위해 희석한다. 다수의 인자 숙주 세포주에 대한 친 화성 바이러스 접종 기법 바이러스 성장, 적절한 희석 범위 및 오버레이의 선택 조건을 포함 8 플라크의 형성에 영향을 미칠. 절차 동안 BSC에서 발생하는 폐기물을 제대로하기 전에 고온 가압 멸균에 의해 이전에 BSC 다시에서 제거에 소독BSL-4 .......

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토론

BSL-4 실험실에서 작업은 상당한 시간과 세부 사항에 대한 추가적인주의가 필요합니다. 이 환경에서 작업의 모든 유형이 아니라 철저한 훈련, 그리고 양심적 인 개인이 필요합니다. 분석 실험실 근로자가 훈련을해야하는 몇 가지 주요 개념을 포함로 표준 바이러스 성 플라크 분석은 BSL-4 실험실에서 높은 결과 병원균 작업을위한 일반적인 절차의 정확한 모델을 제공합니다.

첫 번째 주요 개념은 높은 결과 병원균에 대한 기본 봉쇄로 기능 클래스 II BSC,의 적절한 사용 및 안전 관행에의 응용 프로그램입니다. 클래스 II BSC의 기능은 크게 개인에 대한 노출 위험을 제한하는 방법을 지시하는 방법을 이해. 클래스 II의 작업 영역에 걸쳐 오염 된 지역에 깨끗한 지역에서 작업 흐름 ( "깨끗한 측") ( "더러운 측")는 BSC는 교차 오염 (11)을 방지하는 데 도움이됩니다. 깨끗하고 오염 물질 및 Suppl에이거 깨끗한 항목을.......

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공개 사항

저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

이 출판물의 내용이 미국 보건복지부(DHHS) 또는 저자와 제휴한 기관 및 회사의 견해나 정책을 반드시 반영하는 것은 아닙니다. 이 작업은 Battelle Memorial Institute와 미국 국립 알레르기 및 전염병 연구소(NIAID)의 주요 계약을 통해 부분적으로 자금을 지원받았습니다. HHSN272200700016I. M.R.H., D.P., L.B., K.J. 및 J.W.는 Battelle Memorial Institute의 직원으로 이 작업을 수행했습니다. 이 작업을 수행한 Battelle Memorial Institute의 하청업체는 다음과 같습니다: MRI Global의 직원인 S.M.; Lovelace Respiratory Research Institute, Inc.의 직원으로서의 MGL; J.H.K.는 Tunnell Government Services, Inc.의 직원입니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Micro-Chem PlusNational Chemical Laboratories255
에탄올FisherBP2818500
2 ml 96-딥 웰 플레이트Fisher278743
10 ml 혈청학적 피펫Fisher13-678-11E
25 ml 혈청학적 피펫Fisher13-678-11
6-웰 플레이트Fisher
크리스탈 바이올렛시그마HT90132-1L
10% 중립 버퍼드 포르말린Fisher22-050-105
TragacanthFisher50-702-2000 
20 &뮤; l 피펫 팁Fisher21-402-550
200 μ l 피펫 팁Fisher21-402-561
1,000 μ l 피펫 팁Fisher21-402-581
DMEMLonza12-604Q
FBSSigmaF2442-500mL
페니실린/스트렙토마이신Lonza17-602E
2x EMEM품질 생물학115-073-101
피펫터드러먼드4-000-101
1,000 μ l 피펫 라이닌  L-1000XLS+
200 &뮤; l 피펫 라이닌  L-200XLS+
12-Well, 다중 채널 200 μ l 피펫터RaininL12-200XLS+
8-Well, 다중 채널 1,000 μ l 피펫터RaininLA8-1200XLS
AttestExpress 의료 용품 
오토클레이브GetingeGEB 2404 AMB-2
오토클레이브 백Fisher01-828E
2,000 ml 비커Fisher02-591-10H
오토클레이브 트레이Fisher13-359-20B
피펫 트레이Fisher13-361-5
37 ° C 인큐베이터FisherWU-39321-00
바이오하자드 캔러버메이드 상업용FG614500 RED
오토클레이브 테이프Fisher15-903
오토클레이브 로드IRF 시설 제작N/A
라이트 박스FisherS11552
히트 씰러피셔NC9793612 
히트 씰 파우치Fisher01-812-25H
생물학적 위험 백Fisher01-828E
140675MMM12192

참고문헌

  1. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edn. Chosewood, L. C., Wilson, D. E. , , U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
  2. Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
  3. Executive order 13546 -- Optimizing the security of Biologi....

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정오


Formal Correction: Erratum: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
Posted by JoVE Editors on 12/05/2016. Citeable Link.

A correction was made to the authors section in: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices

One of the authors names was corrected from:

Nicole Joselyn

to:

Nicole Josleyn

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