동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다.
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이 논문에서
요약
초록
전이 유방암 환자의 사망의 주요 원인이다. 유방암의 전이를 포함한 암 세포 전이, 기본 메커니즘은 크게 알려지지 암 연구의 초점이다. 다양한 유방암 자발적 전이 마우스 모델이 확립되었다. 여기서는 동 소성 이식 유방암 원발 종양을 수립 인간 유방암 전이 모방 자발적 전이를 생성하는 간단한 방법을보고한다. 생물 발광 라이브 종양 영상과 결합,이 마우스 모델은 종양의 성장 및 진행 속도론을 모니터링하고 정량화 할 수 있습니다. 이 모델에서, 4T1-루크 유방암 세포 저용량 (1 × 104 세포) 투베르쿨린 주사기를 이용하여 BALB / C 마우스의 유방 지방 패드에 주입했다. 마우스는 주사 루시페린 및 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 다양한 시점에서 이미징 하였다. 차 종양은 appr합니다 (IACUC 승인 프로토콜과 크기 제한으로 성장하는 경우oximately 30 일), 마우스는 2 % 이소 플루 란과 산소의 일정한 흐름 하에서 마취시켰다. 종양 영역을 70 % 에탄올로 소독 하였다. 종양 주위 마우스 피부 멸균 가위로 제거하고 종양을 노출 절제 하였다. 주 종양의 제거를 한 달 동안 4T-1 담암 마우스의 생존을 연장한다. 생쥐는 다음 반복적으로 원격 장기로 확산 전이성 종양에 대한 몇 군데 있었다. 치료제는이 시점에서 종양 전이를 억제하기 위해 투여 될 수있다. 이 모델은 기본 사이트 및 원격 장기로 진행 동역학 유방암 세포의 성장을 정량화 단순하면서도 민감하고, 따라서, 생체 내에서 항 - 전이 치료 및 면역 치료제를 시험 유방암의 성장 및 진행을 연구하기위한 훌륭한 모델 .
서론
미국 암 협회에 따르면, 유방암은 미국 여성 암 중 가장 많이 진단 형태이다. 최근 개발 표적 요법과 조합 조기 발견이 상당히 지난 20 년간 유방암 사망률을 감소시켰다. 그러나 유방암은 여전히 미국의 한 여성에서 암 관련 사망의 두 번째 주요 원인이다. 유방암 환자의 사망의 대부분은 종양 세포의 전이 때문이다. 불행하게도, 대부분의 유방암은 침습적이고 자주 뼈, 폐, 간, 뇌를 포함한 원격 장기에이어서 림프절에 전이를합니다. 1, 2는 현재 전이성 유방암에 대한 효과적인 치료가 없습니다. 따라서, 화학 요법 및 면역 치료제의 개발은 전이성 유방암은 큰 의미입니다 억제합니다.
다양한 유방암 자발적 전이 마우스 모델 B 조EEN 유방 종양 세포의 진행 및 전이 및 치료제의 개발을위한 모델로서 사용되는 기초가되는 분자 기전을 연구하기 위해 개발 하였다. 1,3-5 그러나, 이러한 마우스 모델의 대부분은 유전 적 종양 모델임을 반면 기계적 대한 우수한 모델 연구는 전이 이러한 유전 모델 개발 개월 걸리므하여 항암제의 고가의 장기 투여를 요구하는, 치료제를 시험하기에 적합하지 않다. 살아있는 쥐 -6,7- 모니터링 종양 진행은 기술적으로 어려운 것이다. 반대로 이식 유....
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프로토콜
모든 절차는 조지아 리전트 대학 동물 사용 및 관리위원회의 지침과 승인 된 프로토콜을 따르십시오.
동소 이식 유방암 종양의 1. 설립
- 실험 하루 전에, 배양은 약 10 ㎖의 RPMI 배지에 10 cm 배양 접시에 2 × 106 4T1 룩 종양 세포는 10 % FBS를 함유. 37 ° C에서 CO 2 배양기에서 배양 접시를 품어 5 % CO 2.
- 종양 세포 주사 일에, PBS를 제거 5 ㎖ 멸균 인산 완충 식염수 (PBS), 배양 접시에 pH 7.4의 추가 진공 배양 접시에서 배양 배지를 제거하고 부드럽게 배양 표면을 세척 할 식기를 흔들 진공에 의해.
- 배양 접시에 2 ml의 트립신 EDTA (0.05 % 트립신 및 0.53 mM의 EDTA)을 추가 5 분 동안 37 ℃에서 CO2 인큐베이터에서 배양 한. 모든 세포가 배양 접시의 바닥에서 분리되어 있는지 확인하기 위해 거꾸로 현미경에 세포를 확인하십시오.
- 약 450 XG RT에서 3 분 동안 15 ml의 원추형 원심 분리 튜브에 세포를 8 ml의 혈청 함유 배지, 전사 셀을 첨가함으로써 트립신을 해소.
- 10 ml의 PBS에 진공에 resuspend 세포의 상....
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결과
동소 이식 유방 암 마우스 모델 구축
4T1는 공격적인 유방 암 세포주이다. 유방 지방 패드에 적은 4 10 × 1과 세포의 주입 주입 (그림 2A)의 사이트에서 하나의 종양 결절의 설립으로 이어질 수 있습니다. 따라서, 종양은 사람 유방 암종 주 모방. 거의 100 %의 마우스는 종양의 동 소성을 개발한다. 종양 크기는 디지털 캘리퍼스 또는 살아있는 종양 영상화 (도 3)를 사용하여 정량화 할 수있다. 종양은 생물 발광 이미징 시스템을 이용하여, 종양 주 사후 검출하여 3 일 정도이며, 종양의 크기가 증가함에 따라, 발광 강도가 증가한다 (도 3). 따라서,이 모델은 유방 암종의 모든 단계에 대하여 화학 및 면역 치료제의 효능을 테스트하기위한 이상적인 동소 유방암 모델이다.
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토론
유방암 전이 트랜스 제닉 마우스 모델의 많은 종류가 개발되었다. 하나 이들 트랜스 제닉 마우스는 60 내지 100 % 범위의 높은 종양 발생을 갖는다. (- 14 100 %) 그러나, 이들 트랜스 제닉 마우스의 전이 발생률은 종양 발생 빈도보다 낮다. 종양 세포는 유방암 전이 이들 트랜스 제닉 마우스 모델에서 대부분의 LN 및 폐 전이. 전이 대기 시간은 모델에 따라 다르며 2 ~ 8 개월의 범위. 유방암 전이 6,11-16 이러한 형질 전환 마우스 모델은 유방암 전이를 기본 유전 및 분자 메커니즘 연구를위한 훌륭한 시스템입니다. 그러나, 낮은 전이 발생률 전이 긴 대기 시간은 항암제의 시험에서 이러한 모델의 유용성을 제한한다.
차 종양 및 후속 전이성 성장, resembl의 형성과 유방 지방 패드에 4T1 세포의 소성을 주입,원발 종양 형성, 림프절 전이 먼 기관 전이 포함 악성 유방암에서 여러 단계, - ES. 또한, syngenic.......
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공개 사항
쥐는 잭슨 연구소에서 구입하여 조지아 리젠츠 대학교 동물 시설에 보관했습니다. 실험 및 관리/복지는 연방 규정 및 조지아 리젠트 대학교 IACUC 위원회의 승인된 프로토콜에 동의했습니다. 저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
미국 국립보건원(National Institute of Health)의 보조금 CA133085, CA182518 및 CA185909(KL) 및 VA Merit Review Award BX001962(KL의 보조금)으로 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Ami-X 이미징 시스템 | Spectral Instruments Imaging Inc. 투손, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | 마취 서비스 및 Equipment , Inc., 조지아 | ||
| AutoClip 의사 키트 | Becton Dickinson 1차 진료 진단. 스파크, MD | 427638 | |
| 9mm AutoClip 애플라이어 | Becton Dickinson 일차 진료 진단. Sparks, MD | 427630 | |
| 9mm AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9mm AutoClip 상처 클립 | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| 날카로운 포인티드 해부 가위 | Fisher | 8940 | |
| 세밀한 포인티드 펜치 해부 | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27 지 1/2 투베르큘린 주사기 | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 매체 | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% 에탄올 | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
참고문헌
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212(2006).
- Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. Breast cancer metastasis: markers and models. Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H.
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재인쇄 및 허가
