방법 논문

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이를 통해 동소 이식 접종

DOI:

10.3791/54353

⸱

2016년 12월 9일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Bell Research Center for Reproductive Health and Cancer, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Nagoya University Graduate School of Medicine, 3Department of Cancer Biology, Nagoya University Graduate School of Medicine

이 논문에서

요약

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난소 암의 복막 보급의 다단계 과정을 명확히하기 위해, 본 연구는 이러한 종양 세포와 동 소성 접종을 통해 원래의 종양 개발 및 복막 전이의 쥐 실험 모델을 제시한다.

초록

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이 복막 보급을 보여주기 때문에 상피 난소 암 (EOC)는 불량한 예후와 연관되어있다. 예후를 개선하기 위해, 복막 보급을 제어하는 ​​것이 중요하다. 종양 세포는 일차 병소에서 분리 및 부착 방법 mesothelium 그러나, 여전히 불분명하다. 적절한 동물 모델의 확립은 생체 내에서 복막 보급의 메커니즘을 이해하기 위해 필요하다. 현재의 연구는 복막과 원격 장기 포함한 전이 현상에 쥐 난소 표면에 EOC 세포의 국소 주입의 과정을 소개한다. 나이 8 주째 암컷 누드 마우스 (BALB / C 뉴 / 민)를 사용 하였다. 보기의 현미경 분야에서 EOC 세포 지느러미 측면에서 후 복막 접근 방식을 통해 쥐의 난소에 주입했다 (중간 세포 외 기질 (ECM)의 1 × 10 5 세포 / μL은 하이드로 겔 / 일방적 인 난소 / 마우스 기반). 이 제안 된 방법은 르입니다마우스에 대한 SS 침략 절차 및 난소의 손상을 최소화 할 수 있습니다. 여기서는 EOC 원래 전이성 종양 형성의 개발 방법 론적 단계를 설명한다.

서론

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상피 난소 암 (EOC)는 부인과 악성 종양 1 중 암 관련 사망의 가장 높은 비율을 차지. EOC는 주로 인해 늦게 증상으로, 예후와 연관되어, 종종 여러 복강 내 disseminations 및 원격 전이 2-4와 연결되어 있습니다. 복막 전파는 다단계 프로세스이다. 우선, 종양 세포는 일차 병소에서 분리 및 복강 내로 이동한다. 종양 세포가 복강 mesothelium에 부착되면, 그들은 mesothelium 5,6- 통해 조직을 침범하기 시작한다. 더 나은 종양 생물학 (예를 들어, 암의 진행 및 치료 반응)을 이해하기 위해서는, 마우스 모델은 풍부한 정보를 제공합니다. 인간 암세포와 이종 널리 인간 암세포를 복강 내, 정맥 내 및 동소 피하 접종 된 마우스 모델을 사용한다. 동소의 g를 가진 동물 모델뗏목 종양보다 효율적이고 정확하게 heterotopically 그래프트 종양 동물 모델에 비해 인간 종양 환경을 반영하는 결과를 생성 할 수있다. 따라서, 많은 인간의 종양, 동 소성 이식 모델은 7-11 설립되었습니다.

여기, 우리는 복부 접종에 비해 침입이 제한 지느러미 측면에서 복막 접근을 통해 인간의 EOC 세포의 동 소성 접종에 대해 ....

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프로토콜

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치료 프로토콜은 나고야 대학에 의해 채택 된 동물 실험에 대한 가이드 라인을 따른다.

세포 현탁액 1. 준비

  1. 인간의 난소 투명 세포 암 세포주.
    1. (100 단위 / ㎖, 스트렙토 마이신 0.1 ㎎ / ㎖ 페니실린) 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 및 페니실린 / 스트렙토 마이신을 가진 RPMI-1640 배지에서 ES-2 셀 (12)을 유지한다. 5 % CO 2 가습 인큐베이터에서 37 ° C에서 배양 세포.
    2. 0.05 %의 트립신 / 0.02 %의 EDTA 용액 (트립신 / EDTA)를 대수 증식기의 세포를 수집한다.
      1. (- 25cm 2 당 4 ml의 2 + 칼슘 / 마그네슘없이 PBS 3) 먼저, 다음 PBS로 한 번 세포를 씻어, 세포 배양 용기에서 이전 용지를 제거합니다.
      2. 다음으로, 25cm 트립신 / EDTA 2 당 1 ml에 추가 할 수 있습니다. 트립신 / EDTA로 세포 단층을 포함하는 세포 배양 용기를 돌린다. 제거하고 트립신 / EDTA를 폐기 한 후, 세포를 반환3 인큐베이터에 배양 용기 - 세포 5 분 또는 때까지이 분리....

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결과

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여섯 누드 마우스는이 프로토콜에 기재된 바와 같이 난소가 인간 투명 세포 암종 세포주 ES-2로 접종했다. 도 1a에 도시 된 바와 같이, 1 주 후 6 마우스의 5 ES-2 세포에 접종 난소 종양을 가졌으나 (대조군으로서 사용됨) 접종하지 않고 반대측 난소에는 종양이 없었다. 또한, 5 쥐의 2 복수 여러 복막 disseminations을 보였다. 세포는 간 (그림 1B)로 전이. 난소 접종 부위와 제어 측의 종양 질량 둘 해부 단면, 헤 마톡 실린 - 에오신 (HE)으로 염색하고, 현미경 (도 2)에 따라 분석 하였다. 난소 암 세포의 다수가 아닌 반대편에서 접종 난소에서 관찰되었다. 셀 형태는 부모의 종양과 동일하다.

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토론

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동물 모델은 암 세포에 대해 종양 발달 진행, 전이, 약물 효능의 기전을 분석하기 위해 필수적이다. 인간 난소 암 세포를 담지 마우스는 동물 모델로서 사용되어왔다. 여기서, 우리는 동소 사이트 난소 종양 세포의 투여에 덜 침습적 인 과정을 설명한다. 지느러미 측면에서 후 복막 접근 방식을 통해 난소에이 절차 접종을 사용하면 일반적으로 사용되는 다른 기술에 비해 상당한 이점을 제공한다. 우선, 소성을 접종 인간의 종양 13,21 환경을 반영보다 효율적이고 정확한 결과를 제공 할 수있다. 둘째, 지느러미 측면에서이 복막 접근법은 단지 작은 절개가 필요 (<1-2cm를) 그래서 복막 접근 방식에 비해 빠른 절차입니다. 따라서,이 후 복막 접근 방식은 마우스에 대해 덜 침습적입니다. 셋째, 뮤린 난소 REA 많은 양을 받아 매우 작고, 따라서없는남자용 화장실. 이 발표 과정에서, 우리는 고농도 세포 현탁액 (1 × 10 5 세포 / μL) 및 낮은 접종 볼륨 사용 - 하나의 샷으로 (1 2.......

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공개 사항

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저자는 공개 아무것도 없어.

감사의 글

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저자는 도움이 토론 및 기술 지원에 대한 산부인과의 부서의 구성원과 암 생물학 감사합니다. 이 연구는 과학의 진흥 (JSPS)에 대한 일본 사회에 의해 지원되었다 그랜트 -에 - 보조 과학 연구 (15K15604, H. Kajiyama에).

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
마트리겔 매트릭스 BD354234ECM 기반 하이드로겔
인슐린 주사기TERUMOSS-05M29131/2 cc, 29 G x 1/2"
봉합 바늘 봉합11 mm, 3/8, 나일론6-0
반사 7 mm 상처 클립 적용CellPoint Scientific204-1000
  리플렉스 7mm 감긴 클립CellPoint Scientific203-1000
사 기

참고문헌

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  1. Jemal, A., et al. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin. 61 (2), 69-90 (2011).
  2. Kajiyama, H., et al. Long-term clinical outcome of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma: is it the same for each histological type. ....

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재인쇄 및 허가

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태그

Trypsin EDTA

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